一种骨髓间充质干细胞标记方法与流程

本申请涉及细胞标记移植领域，特别涉及一种骨髓间充质干细胞标记方法。

背景技术：

1、近年来，随着干细胞研究的深入，骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells，bmscs)是一类具有自我更新、多向分化潜能和免疫调节功能的多能干细胞群，已被多项临床试验证明具有广泛而且良好的应用前景，在一定的诱导条件下，可以分化为脂肪、骨、软骨等组织或者其他的功能细胞，而且来源广泛，体外扩增能力强、纯度高、免疫原性低，因此是一类良好的多能干细胞。尤其是bmsc是被证明具有向神经干细胞(neuralstem cells，nscs)分化的潜能，应用bmscs移植修复中枢神经系统损伤和疾病成为一个研究热点。为明确bmscs移植后症状改善是否由移植细胞所致，既往多采用处死动物后进行组织切片加以验证。这种侵袭性的方法不利于对移植后bmscs在脑内的迁移进行动态的追踪，并且这种方法也不能适用于人体研究。对于bmscs在移植治疗的过程中，活体状态下动态检测植入体内bmscs的存活率、迁移能力以及分化程度是必须要考虑的一个重要问题。

技术实现思路

1、本申请实施例提供一种骨髓间充质干细胞标记方法，以解决上述背景技术中提高的问题。

2、提供了一种骨髓间充质干细胞标记方法，包括以下步骤：

3、对大鼠处理，获得骨髓基质细胞；

4、对骨髓基质细胞处理，获得骨髓间充质干细胞，加神经干细胞培养基悬浮细胞，并加胎牛血清(10％终浓度)接种于24孔培养板和培养瓶中；

5、将超顺磁氧化铁纳米微粒与多聚左旋赖氨酸混合，振荡后将超顺磁氧化铁纳米微粒与多聚左旋赖氨酸混合物加入细胞培养基中，得到混合培养基，其中，超顺磁氧化铁纳米微粒和多聚左旋赖氨酸的终浓度为25μg/ml和0.75μg/ml；

6、将培养5天后的细胞用混合培养基孵育过夜。

7、一些实施例中，对大鼠处理，获得骨髓基质细胞，具体包括步骤：

8、用10％的水合氯醛(0.4ml/100g)对大鼠进行腹腔注射麻醉，将大鼠双后肢严格消毒，无菌条件下切开皮肤，分离显露出胫骨和股骨骨端，12号注射针穿透骨皮质至骨髓腔，以浓度为500u/ml肝素湿化处理注射器并力抽吸骨髓，骨髓穿刺术后缝合伤口，以保证大鼠存活待日后接受移植，所获骨髓用平衡盐液稀释，细胞悬液按1：2比例加入到分离液中进行2500rpm×15min密度梯度离心，离心后液体由上至下依次为：稀释液层、乳白色呈膜状的有核细胞层、分离液层及管底的红细胞层，小心吸取富含有核细胞的界面层，获得骨髓基质细胞。

9、一些实施例中，对骨髓基质细胞处理，获得骨髓间充质干细胞，具体包括步骤：

10、以2ml双蒸水(4℃)吹打骨髓基质细胞约1min以破坏红细胞，再加入培养基终止红细胞溶解，800rpm离心5min，去上清，得到的沉淀物即为骨髓间充质干细胞。

11、一些实施例中，还包括步骤：

12、用台盼蓝排除实验检测被标记的骨髓间充质干细胞活力，若活力较低则重复上述步骤，直至活力达到预设标准。

13、本申请提供的技术方案带来的有益效果包括：

14、本申请实施例提供了一种骨髓间充质干细胞标记方法，先获得骨髓间充质干细胞，然后与超顺磁氧化铁纳米微粒和多聚左旋赖氨酸混合物进行混合培养，最终在大鼠颅骨正中线左右两侧用牙科钻于对称位置上将拟移植部位的颅骨钻成小孔，左侧移植标记好的骨髓间充质干细胞，右侧移植未标记的骨髓间充质干细胞，通过上述标记移植方法，方便用户在后续的实验中观察骨髓间充质干细胞是否能够像神经干细胞分化。

技术特征：

1.一种骨髓间充质干细胞标记方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的骨髓间充质干细胞标记方法，其特征在于，对大鼠处理，获得骨髓基质细胞，具体包括步骤：

3.如权利要求1所述的骨髓间充质干细胞标记方法，其特征在于，对骨髓基质细胞处理，获得骨髓间充质干细胞，具体包括步骤：

4.如权利要求1所述的骨髓间充质干细胞标记方法，其特征在于，还包括步骤：

技术总结
本申请涉及一种骨髓间充质干细胞标记方法，包括以下步骤：对大鼠处理，获得骨髓基质细胞；对骨髓基质细胞处理，获得骨髓间充质干细胞，加神经干细胞培养基悬浮细胞，并加胎牛血清(10％终浓度)接种于24孔培养板和培养瓶中；将超顺磁氧化铁纳米微粒与多聚左旋赖氨酸混合，振荡后将超顺磁氧化铁纳米微粒与多聚左旋赖氨酸混合物加入细胞培养基中，得到混合培养基，将培养5天后的细胞用混合培养基孵育过夜。本发明通过超顺磁氧化铁纳米微粒与多聚左旋赖氨酸混合标记骨髓间充质干细胞，从而方便验证活体状态下动态检测植入体外的BMSCs的体内存活率、迁移能力以及分化程度。

技术研发人员：杨志军,陈占锋,韩亚娟,吴翠莹,高谋,张源
受保护的技术使用者：中赛干细胞基因工程有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15