抗乙型流感病毒抗体、检测乙型流感病毒的试剂和试剂盒的制作方法

本发明涉及抗体，具体而言，涉及一种抗乙型流感病毒抗体、检测乙型流感病毒的试剂和试剂盒。

背景技术：

1、流行性感冒病毒(influenza virus，flu)，简称流感病毒，是正粘病毒科的代表种，包括人类流感病毒、猪流感病毒、马流感病毒、禽流感病毒等，其中人流感病毒根据其核蛋白的抗原性可分为甲(a)、乙(b)、丙(c)三型，是流行性感冒的病原体。流感病毒可引起人、禽、猪、马、蝙蝠等多种动物感染和发病。其中可感染人主要是甲型流感病毒和乙型流感病毒，主要引起上呼吸道的感染，也可引起儿童与成年人的下呼吸道感染，主要为肺炎，婴幼儿的重症流感常伴有支气管、高热。

2、乙型流感，是由乙(b)型流感病毒引起的流行性感冒，其特点是起病急骤，畏寒、发热，体温在数小时至24小时内升达高峰，39-40℃甚至更高。伴头痛，全身酸痛，乏力，食欲减退。呼吸道症状较轻，咽干喉痛，干咳，可有腹泻。颜面潮红，眼结膜外眦充血，咽部充血，软腭上有滤泡。可用金刚烷胺为m2离子阻断剂等药物治疗，也可用中药治疗。

3、乙型流感病毒会产生许多亚型，因为流感病毒的血凝素(hemagglutinin，ha)和神经氨酸酶(neuraminidase，na)抗原易发生转变，其组成氨基酸位点均可发生变异。流感病毒每次大流行后，通过上述的氨基酸位点变异，从而产生新型的流感病毒，人体免疫系统对于变异的亚型普遍缺乏抵抗力，容易造成局部流行，在特殊的环境下可以引起大范围人群感染。流感病毒感染后临床症状不典型，临床诊断主要依赖于实验室检测，而可同时感染人类的呼吸道病毒大概有200余种，因此检测试剂的灵敏度和特异度对临床诊断至关重要。选取检测时间短、检出率高的流感病毒筛查技术是保障临床快速诊断和对症治疗的技术路径和前提保障。

4、针对流感病毒的实验室检测方法有多种，参照卫生部《流行性感冒诊断标准》的变化可知，早期检测依赖鸡胚接种，由于操作复杂、技术要求高临床已很少应用，现代检测技术包括抗原检测和核酸pcr检测，新技术具有快速、敏感、特异的特点，为临床诊断提供了很大的帮助。

5、荧光pcr扩增技术，该方法的优点是灵敏度和特异度均较高，但是pcr法对样品、试验环境、操作人员的要求较高，扩增方法学适用于批量标本的检测，出报告时间较长，无法很好的满足临床快速诊断的要求。而检测病毒抗原的免疫胶体金技术可以作为一种快速诊断乙型流感的优选方法，检测时间短，能有效地辅助临床诊断，很大程度上帮助临床尽早对症用药。因此，本领域对于有效结合乙(b)型流感病毒并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。

技术实现思路

1、本技术提供一种活性提高的抗乙型流感病毒抗体，以改善乙型流感病毒的检测，为乙型流感病毒的检测提供重要的原料来源。

2、为了实现上述目的，本发明提供了一种抗乙型流感病毒抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含具有氨基酸序列seq id no:9的重链可变区的三个互补决定区和具有氨基酸序列seq id no:10的轻链可变区的三个互补决定区。

3、可选地，所述互补决定区由kabat、chothia、imgt、lesk、abm或contact任意一种系统或多种系统组合定义。

4、可选地，所述互补决定区由kabat、chothia、imgt或lesk系统定义。

5、可选地，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：

6、hcdr1，其包含seq id no:1所示的氨基酸序列，或由其组成；

7、hcdr2，其包含seq id no:2所示的氨基酸序列，或由其组成；

8、hcdr3，其包含seq id no:3所示的氨基酸序列，或由其组成；

9、lcdr1，其包含seq id no:4所示的氨基酸序列，或由其组成；

10、lcdr2，其包含seq id no:5所示的氨基酸序列，或由其组成；

11、lcdr3，其包含seq id no:6所示的氨基酸序列，或由其组成。

12、可选地，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如seq id no:9或与其具有80％以上同一性所示的重链可变区，和氨基酸序列如seq id no:10或与其具有80％以上同一性所示的轻链可变区。本发明提供了一种抗乙型流感病毒抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括：a)氨基酸序列如seq id no:1至3所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3，和氨基酸序列如seq id no:4至seq id no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或

13、b)氨基酸序列如seq id no:9所示的重链可变区，和氨基酸序列如seq id no:10所示的轻链可变区；或

14、c)氨基酸序列与b)所示序列具有80％以上同一性的重链可变区和轻链可变区，且包括a)所示序列的hcdr1至hcdr3和lcdr1至lcdr3；或

15、d)氨基酸序列如seq id no:11所示的重链，和氨基酸序列如seq id no:12所示的轻链。

16、本发明提供了一种抗乙型流感病毒抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括：a)氨基酸序列依次如seq id no:1至3所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3，和氨基酸序列依次如seq id no:4至seq id no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

17、可选地，上文任一项所述的抗体或其功能性片段还包含恒定区。

18、可选地，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区。

19、可选地，所述重链恒定区选自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige或igd的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。

20、可选地，所述恒定区选自igm的重链恒定区。

21、可选地，所述恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或人。

22、可选地，所述恒定区的种属来源为小鼠。

23、可选地，所述重链恒定区序列如seq id no:7所示或与其具有至少80％同一性。

24、可选地，所述轻链恒定区序列如seq id no:8所示或与其具有至少80％同一性。

25、可选地，上文任一项所述的抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如seq id no:11所示的重链，和氨基酸序列如seq id no:12所示的轻链。

26、可选地，所述功能性片段选自所述抗体的f(ab’)2、fab’、fab、fv和scfv中的任意一种。

27、本发明提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。

28、可选地，所述抗体偶联至生物素或生物素衍生物。

29、可选地，所述抗体偶联至固相。

30、可选地，所述抗体偶联至标记物。

31、可选地，所述标记物选自荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。

32、可选地，所述标记物优选为胶体金。

33、本发明提供了一种检测乙型流感病毒的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。

34、本发明提供了一种检测乙型流感病毒的方法，包括：使上述任一项所述的抗体或其功能性片段、偶联物、试剂或试剂盒与待检测样品中的乙型流感病毒接触形成免疫复合物。

35、可选地，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合。

36、可选地，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与乙型流感病毒结合。

37、本发明提供了一种核酸，其编码上述任一项所述的抗体或其功能性片段。

38、本发明还提供一种载体，其含有上文所述的核酸。

39、本发明还提供一种细胞，其含有上文所述的核酸或载体。

40、本发明还提供一种制备上文任一项所述的抗体或其功能性片段的方法，其包括：培养上文所述的细胞。

41、本发明还提供上文任一项所述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒在检测乙型流感病毒、制备检测乙型流感病毒的产品、诊断乙型流感病毒感染中的用途。

42、本发明还提供一种诊断受试者感染乙型流感病毒的方法，包括：

43、a)使上述任一项所述的抗体或其功能性片段、偶联物、试剂或试剂盒与来自所述受试者样品中的乙型流感病毒接触形成免疫复合物；和

44、b)检测所述免疫复合物的存在，所述复合物的存在指示所述受试者样品中所述乙型流感病毒的存在。

45、可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合。

46、可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述乙型流感病毒结合。