一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌制备及应用的制作方法

本发明涉及动物饲料，具体涉及一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌制备及应用。

背景技术：

1、玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。李季伦1980年研究发现，许多农作物如小麦、大豆等植物中也存在玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮有许多种衍生物，例如7一脱氢玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯酸、8-羟基玉米赤霉烯酮。同时，植物中的玉米赤霉烯酮结构和对生物体的影响与霉菌产生的玉米赤霉烯酮作用是一致的。

2、玉米赤霉烯酮具有雌激素的作用，其强度为雌激素的十分之一，可造成家禽和家畜的雌激素水平提高。目前发现，猪对此毒素较为敏感。玉米赤霉烯酮作用的靶器官主要是雌性动物的生殖系统，同时对雄性动物也有一定的影响。在急性中毒的条件下，对神经系统、心脏、肾脏、肝和肺都会有一定的毒害作用。主要的机理是它会造成神经系统的亢奋，在脏器当中造成很多出血点，使动物突然死亡。主要的原因还是由于雌激素水平过高而造成的。

3、因此在动物饲料当中常常需要专门的添加相应的降解玉米赤霉烯酮的菌类来防止玉米赤霉烯酮对动物造成健康影响，现有技术中例如公开号为cn102181376b的同时降解玉米赤霉烯酮和纤维素的枯草芽孢杆菌及其应用中使用的就是枯草芽孢杆菌进行降解玉米赤霉烯酮，但是进一步的研究发现用于降解玉米赤霉烯酮的枯草芽孢杆菌为好氧菌，在动物肠道不能较快的繁殖代谢，并解决体内的霉菌毒素的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌制备及应用，能够提高在厌氧环境下对玉米赤霉烯酮的降解率。

2、为解决上述技术问题，本发明提供一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌( lactobacillus reuteri)，其保藏号为：cgmcc no.27510。

3、本发明通过筛选得到的这种新型罗伊氏乳杆菌具有着能够在厌氧环境下进行繁殖发酵的效果，可以在动物肠道环境下较快的繁殖代谢，解决动物体内霉菌毒素的问题。

4、进一步的，所述罗伊氏乳杆菌的发酵培养基包括如下重量份数的原料：

5、10份蛋白陈、5份牛肉粉、4份酵母粉、20份葡萄糖、1份吐温80、2份磷酸氢二钾、5份乙酸钠、2份柠檬酸三铵、0.2份硫酸镁、0.05份硫酸锰、1000份蒸馏水。

6、进一步的，所述罗伊氏乳杆菌的发酵温度为30-40℃，发酵时间为20-30h，发酵ph为6.0-6.6，发酵方式为厌氧发酵，所述罗伊氏乳杆菌的接种量为每0.5-2.5ml的罗伊氏乳杆菌接种50-100ml发酵培养基。

7、本发明的另一目的在于，罗伊氏乳杆菌的活性蛋白的提取包括如下步骤：

8、s1、对罗伊氏杆菌进行发酵扩大培养，得到菌液，将菌液进行离心破壁后对菌液中添加萃取剂，然后提取上清液进行静置；

9、s2、离心所述上清液，得到蛋白沉淀；

10、s3、将蛋白沉淀溶于pbs溶液当中，冷冻干燥得到活性蛋白。

11、进一步的，所述萃取剂为90wt%甲醇、90wt%乙醇、45wt%硫酸铵溶液、65wt%硫酸铵溶液或85%硫酸铵溶液。

12、进一步的，所述上清液的静置温度为0℃，所述上清液的静置时间为1-24h。

13、本发明中的一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌，如图3和图4所示，在厌氧条件下与玉米赤霉烯酮反应16小时后对玉米赤霉烯酮的降解率达到81.4%，同时本发明的罗伊氏乳杆菌及其所分泌的活性蛋白解毒活性高、特异性强、作用效果温和，适用于降解及去除饲料中的玉米赤霉烯酮，同时，本发明的罗伊氏乳杆菌具有生物活性强、益生性能好等优点，不会破坏饲料中的营养成分。

14、本发明的罗伊氏乳杆菌在降解玉米赤霉烯酮中、抑制鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌中的应用。

15、进一步的，所述罗伊氏乳杆菌的发酵液700-900µl，加入玉米赤霉烯酮溶液100-300µl，反应体系的ph值范围为6.0-7.5，反应温度为30-40℃，反应时间为2-72h。

16、本发明中的一种降解玉米赤霉烯酮的活性蛋白在降解玉米赤霉烯酮、抑制鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌中的应用。

17、进一步的，所述活性蛋白的pbs溶液700-900µl，加入玉米赤霉烯酮溶液100-300µl，所述活性蛋白在pbs溶液中的浓度为0.01g /ml，反应体系的ph值范围为6.0-7.5，反应温度为30-40℃，反应时间为2-72h。

技术特征：

1.一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌(lactobacillus reuteri)，其保藏号为：cgmcc no.27510。

2.如权利要求1所述的一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌的发酵培养基包括如下重量份数的原料：

3.如权利要求2所述的一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌的发酵温度为30-40℃，发酵时间为20-30h，发酵ph为6.0-6.6，发酵方式为厌氧发酵，所述罗伊氏乳杆菌的接种量为每0.5-2.5ml的罗伊氏乳杆菌接种50-100ml发酵培养基。

4.权利要求1所述的任一项罗伊氏乳杆菌在降解玉米赤霉烯酮中、抑制鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌的发酵液与玉米赤霉烯酮溶液的比值为2.3~9：1，反应体系的ph值范围为6.0-7.5，反应温度为30-40℃，反应时间为2-72h。

6.如权利要求1所述的一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌，其特征在于，罗伊氏乳杆菌的活性蛋白的提取方法，包括如下步骤：

7.如权利要求6所述的一种降解玉米赤霉烯酮的活性蛋白的提取方法，其特征在于，所述萃取剂为90wt%甲醇、90wt%乙醇、45wt%硫酸铵溶液、65wt%硫酸铵溶液或85%硫酸铵溶液。

8.如权利要求6所述的一种降解玉米赤霉烯酮的活性蛋白的提取方法，其特征在于，所述得上清液后静置，所述静置温度为0℃，所述上清液的静置时间为1-24h。

9.权利要求6-8任一项所述的降解玉米赤霉烯酮的活性蛋白在降解玉米赤霉烯酮、抑制鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述活性蛋白的pbs溶液与玉米赤霉烯酮溶液的比值为2.3~9：1，所述活性蛋白在pbs溶液中的浓度为0.01g /ml，反应体系的ph值范围为6.0-7.5，反应温度为30-40℃，反应时间为2-72h。

技术总结
本发明提供一种降解玉米赤霉烯酮的罗伊氏乳杆菌制备及应用，属于动物饲料技术领域，在降解玉米赤霉烯酮、抑制鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌中有着效果，本发明的罗伊氏乳杆菌及其所分泌的活性蛋白解毒活性高、特异性强、作用效果温和，适用于降解及去除饲料中的玉米赤霉烯酮。同时，本发明的罗伊氏乳杆菌具有生物活性强、益生性能好等优点，不会破坏饲料中的营养成分，其保藏号为：CGMCC NO.27510，本发明能够提高在厌氧环境下对玉米赤霉烯酮的降解率。

技术研发人员：郑文革,潘桂霞,焦江涛,王丽,李雪萍,吴利娟
受保护的技术使用者：河南亿万中元生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15