一种从液基细胞中提取HPV病毒的方法与流程

【】本发明属于医疗化验，特别是涉及一种从液基细胞中提取hpv病毒的方法。

背景技术

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背景技术：

1、hpv病毒是导致宫颈癌产生的主要病因，99％以上的宫颈癌是由于同一高危型hpv持续感染导致，从hpv感染到癌变大约十年左右，宫颈癌是目前世界上唯一一种可早发现早预防的癌症。

2、目前临床上比较普遍的初筛方式是tct和hpv分型检测。传统的tct的检测标本是用一种特殊的液基细胞保存液用来保存细胞，里面主要成分有醇类、双蒸水、粘液分解剂等等，用来保持细胞的完整性。而用来提取hpv病毒的保存液往往采用一些氯化钠、edta、磷酸氢二纳的等等成分，以避免影响pcr的扩增。传统的方式是一个客户先做其中一种，然后再做另外一种检测，客户需要取两次样本，耗时较长。如果同时做两种检测就需要取两次样本，但是这样有时会导致客户子宫受伤，并且发现第二次取的样本有一部分会因客户取样出血导致样本混血，血液中血红素会抑制hpv分型检测中的pcr反应，影响实验效果。

3、现有技术中，专利公开号为cn113957122a公开了一种在宫颈细胞样本中提取dna的方法，其包括：(1)配置细胞核裂解液，所述细胞核裂解液成分：氯化钠、乙基苯基聚乙二醇、盐酸胍、1mol/l的tris-hcl溶液、0.1mol/l的乙二胺四乙酸溶液；(2)用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节所述细胞核裂解液的ph至9.5，得到缓冲液；(3)准备好待提取的第一样本300ul，放入ep管中并用离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第二样本；(4)在所述第二样本中加入300ul所述缓冲液，放入离心机，在1400r/min的转速下离心5分钟，去上清，得到第三样本；(5)在所述第三样本中再次加入所述缓冲液50ul，得到第四样本；(6)在所述第四样本中加入10ul蛋白酶k溶液和2ul二硫苏糖醇溶液，所述蛋白酶k溶液浓度为13mg/ml，所述二硫苏糖醇溶液浓度为0.375g/ml，得到第五样本；(7)将所述第五样本放入聚合酶的链式反应设备，进行反应。该方法步骤较多，且操作较为繁杂。

4、因此，有必要研发一种从液基细胞中提取hpv病毒的方法来解决上述问题。

技术实现思路

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技术实现要素：

1、本发明的主要目的在于提供一种从液基细胞中提取hpv病毒的方法，可以在临床上采一种tct标本，即可用来做tct检测，又可以用来进行hpv分型检测，达到一瓶双检的目的，也可以同时减少患者采样的痛苦，且提取方法简单，便于操作，且效率高。

2、本发明通过如下技术方案实现上述目的：一种从液基细胞中提取hpv病毒的方法，其包括以下步骤：

3、本发明一种从液基细胞中提取hpv病毒的方法，其包括以下步骤：

4、s1)配置醇类洗脱剂：将洗脱液94％、盐1％以及乙二胺四乙酸二钠5％混合在一起，全部溶解得到醇类洗脱剂；

5、s2)配置核酸提取试剂：在离心管中加入乙基苯基聚乙二醇10％、聚乙二醇辛基苯基醚1％、细胞裂解液20％以及余量的纯化水，全部溶解后得到核酸提取试剂；

6、s3)取1ml～3ml由液基细胞保存液保存的宫颈脱落细胞构成的标本，12000rpm离心5～10分钟；

7、s4)弃上清取沉淀，加入所述步骤s1)配置的醇类洗脱剂，充分震荡摇匀，12000rpm离心5～10分钟；

8、s5)弃上清取沉淀，加入50μl～100μl所述步骤s2)配置的核酸提取试剂，混匀后2000rpm离心10～30秒，100℃水浴或干浴10～20分钟，得到检测样本；

9、s6)将所述检测样本在12000rpm下离心10min，取上清供pcr扩增用。

10、与现有技术相比，本发明一种从液基细胞中提取hpv病毒的方法的有益效果在于：可以在临床上采一种tct标本，即可用来做tct检测，又可以用来进行hpv分型检测，达到一瓶双检的目的，也可以同时减少患者采样的痛苦，且提取方法简单，便于操作，且效率高。

技术特征：

1.一种从液基细胞中提取hpv病毒的方法，其特征在于：其包括以下步骤：

技术总结
本发明揭示了一种从液基细胞中提取HPV病毒的方法，其包括以下步骤：S1)将洗脱液94％、盐1％以及乙二胺四乙酸二钠5％全部溶解在一起得到醇类洗脱剂；S2)将10％的NP‑40、1％的tritonx‑100、20％的细胞裂解液以及余量的水全部溶解在一起得到核酸提取试剂；S3)取1ml～3ml由液基细胞保存液保存的宫颈脱落细胞构成的标本，12000rpm离心5～10分钟；S4)弃上清取沉淀，加入醇类洗脱剂，12000rpm离心5～10分钟；S5)弃上清取沉淀，加入50μl～100μl核酸提取试剂，混匀后2000rpm离心10～30秒，100℃水浴或干浴10～20分钟，得到检测样本；S6)将所述检测样本在12000rpm下离心10min，取上清供PCR扩增用。本发明可以在临床上采一种TCT标本，即可用来做TCT，又可以用来检测HPV，达到一瓶双检的目的，也可以同时减少患者采样的痛苦。

技术研发人员：李文勇,殷亚娟,陈巍,程司
受保护的技术使用者：江苏迪赛特医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15