红茶中的水解单宁类单体化合物及其应用

：本发明属于医药，具体地，涉及红茶中的水解单宁类单体化合物及其应用。

背景技术

0、
背景技术：

1、氧自由基的危害与疾病密切相关。多种因素诱导产生的过量自由基可引发氧化胁迫反应，造成细胞结构损伤和功能缺失，促使肌体衰老并加剧如阿尔茨海默病、心血管疾病、恶性肿瘤等相关疾病的发展与恶化。抗氧化剂的使用有利于清除体内外过量的自由基，减轻肌体的氧化胁迫损伤从而延缓衰老和防治衰老相关疾病，植物源抗氧化剂的挖掘一直是当今研究的热点。

2、近年来，随着生活节奏的不断加快及生活压力的不断增大，加上饮食模式的单一化、高糖高脂肪化及久坐不动的生活方式，导致我国糖尿病患者及糖耐量受损患者(igt)持续增加。2013年的相关调查显示，我国近40％的成年人正处于糖尿病患病前期的高危状态，若不进行有效干预，每年每6位igt中将有1人发展成为糖尿病患者。糖尿病容易诱发心脑血管疾病、视网膜和眼底病变以及周围神经病变和循环末端组织溃疡、感染和坏疽等慢性并发症，更严重的是其可能出现糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷、急性感染、乳酸性酸中毒等急性并发症，严重危害人民健康。在糖尿病患者的治疗过程中，植物源天然降血糖物质较合成药物具有毒负作用更小、药效更为持久、患者更易接受等特点。

3、滇红茶通常是指以云南大叶种茶(大叶茶和大理茶)的鲜叶和/或芽为原料经多酚氧化酶催化发酵而成，属全发酵茶。该茶类在发酵过程中，单体黄烷-3-醇在多酚氧化酶的作用下发生一系列氧化聚合反应，形成新的二聚，低聚和多聚化合物。与其它茶类进行比较结果显示茶黄素、茶红素是红茶的特征成分，此外红茶中还发现许多结构新颖的多酚类茶色素、含有n-乙基-2-吡咯烷酮基的儿茶素二聚体以及其它黄烷酮。然而，迄今为止，现有技术无来源于该茶类的水解单宁类化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖的报道，也没有该化合物及其药物组合物作为抗氧化、抗衰老以及降血糖等人类常见疾病的相关药物的报道。

技术实现思路

0、
技术实现要素：

1、本发明的目的旨在提供1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖(1-o-galloyl-4,6-tetrahydroxydibenzofurandicarboxyl-β-d-glucopyranose)，其制备方法，含其的药物组合物，及其在制备抗氧化和降血糖药物中的应用。

2、为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

3、如下结构式所示的化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖，

4、

5、所述化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖的制备方法，该方法包括下述步骤：将红茶和/或其它植物大理茶种红茶、大叶种红茶、小叶种红茶、余甘子、诃子粉碎，采用4倍体积60％的丙酮水溶液于室温下冷浸提取4次，每次7天，过滤，滤液于50℃条件下减压浓缩除去有机溶剂得样品粗提物，粗提物用水混悬，分别进行氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中乙酸乙酯层上sephadex lh-20层析柱，于meoh:h2o为0:1～1:0梯度洗脱得fr.1到fr.6，其中fr.3上diaion hp20ss柱层析，meoh:h2o为0:1～1:0梯度洗脱得fr.3-1到fr.3-15；其中fr.3-7上mci-gel chp20p,toyopearl hw-40f,rp-18和sephadex lh-20柱层析，meoh:h2o为0:1～1:0梯度洗脱，结合半制备hplc乙腈-水洗脱得化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖，经hplc含量检测，其纯度≥90％。

6、所述的化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

7、所述的化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖在制备抗氧化剂中的应用。

8、化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖在制备预防或治疗糖尿病的药物中的应用。

9、化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖在制备预防或治疗抗衰老药物中的应用。

10、化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖在制备抗衰老化妆品中的应用。

11、药物组合物，其含有所述的化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖，和可药用载体。

12、所述的药物组合物在制备抗氧化、抗衰老药物中的应用。

13、所述的药物组合物在制备预防或治疗糖尿病药物中的应用。

14、本发明提供所述化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖来源于大理茶种红茶、大叶种红茶、小叶种红茶，及其它含有该化合物的其它茶类及植物的次生代谢物。

15、本发明提供所述化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖具有显著的抗氧化活性。

16、本发明提供所述化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

17、本发明提供所述化妆品，由化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖和其它常用载体组成。

18、本发明提供了所述药物组合物由1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖和药学上可接受的载体所组成。

19、当所述化合物用于制备药物时，本发明优选将所述化合物直接使用，或以药物组合物的形式使用

20、本发明提供的药物组合物，包括上述化合物和药学上可接受的载体。在本发明中，所述药学上可接受的载体优选为固体、半固体或液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体没有特殊的限定，选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体即可。

21、本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物与药学上可接受的载体混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。

22、本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗氧化和降糖药物中的应用，对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。

23、在本发明中，当所述药物组合物用于制备药物时，所述组合物在药物中的含量优选为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物在药物组合物中的含量优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。

24、本发明还提供了化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖抗氧化活性评价方法，采用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(dpph)自由基清除模型进行评价。以抗坏血酸(维生素c)为阳性对照，dmso为空白对照。步骤1，精密称取待测物约1mg，溶于少量dmso中，配制成1000μm浓度的母液，逐步稀释成12个浓度梯度(1000，500，200，100，50，20，10，5，2，1，0.5，0.2μm)的待测物溶液。步骤2，将100μl不同浓度的待测物溶液和100μl的dpph乙醇溶液(100μm)加入96孔板中，空白对照组为100μl dmso+100μldpph乙醇溶液。室温下避光反应15min。步骤3，用酶标仪测定反应液在517nm波长下的吸光度a。每个待测物重复实验3次。步骤4，dpph自由基清除能力按照公式：抑制率％＝(ablankcontrol-asample)/a blankcontrol×100进行计算，并以ic50值(清除半数dpph自由基所需的样品浓度)反映供试品抗氧化能力的强弱情况，ic50值通过reed-muench方法计算。

25、abts+活性评价方法：本发明提供了化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖抗氧化活性评价方法，采用2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)(abts)自由基清除模型进行评价。以trolox(维生素e)，dmso为空白对照。步骤1，精密称取待测物约1mg，溶于少量dmso中，配制成1000μm浓度的母液，逐步稀释成12个浓度梯度(1000，500，200，100，50，20，10，5，2，1，0.5，0.2μm)的待测物溶液。步骤2，abts+溶液先由5ml abts(7mm)溶液与88μl过硫酸钾(140mm)在室温下避光反应12-16h得到。使用前用无水乙醇稀释调整，使其在734nm处的吸光度a为0.700±0.002，得到abts+工作液。步骤3，将10μl不同浓度的待测液和200μl abts+工作液加入96孔板中，空白对照组为10μl dmso+200μl abts+工作液。室温下避光反应6-8min。步骤4，用酶标仪测定反应液在405nm波长下的吸光度a。每个待测物重复实验3次。步骤5，abts+自由基清除能力按公式：抑制率％＝(ablankcontrol-asample)/ablankcontrol×100进行计算，并以ic50值(清除半数abts+自由基所需的样品浓度)反映供试品抗氧化能力的强弱情况，ic50值通过reed-muench方法计算。

26、本发明提供了化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖降糖活性评价方法，采用α-葡萄糖苷酶抑制活性模型进行评价。步骤1，配制0.1mol/l的磷酸缓冲液(ph 6.8)，将待测样品溶解于dmso。步骤2，反应混合液(200μl)包括待测样品(终浓度1-50μm)，磷酸缓冲液(ph 6.8,0.1m)，4-nitrophenylα-d-glucopyranoside(pnpg,1mm)，α-glucosidase酶溶液(终浓度0.025u/ml)依次顺序加入96孔酶标板，充分混匀，设置3孔重复。同时设置dmso溶剂为空白对照和quercetin(终浓度2-10μm)为阳性对照。步骤3，反应液于37℃孵育50min后，用酶标仪测定在405nm处的吸光值a。步骤4，α-葡萄糖苷酶抑制活性的抑制率按照以下公式计算：抑制率(％)＝(1-asample/ablankcontrol)×100；ic50值按reed&muench法进行测算。

27、与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：

28、1.本发明提供了1个新的化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖。

29、2.本发明提供了制备新化合物的新的方法，该方法原料易得，易于操作，适于工业化生成。

30、3.本发明提供了新化合物作为有效成分的药物组合物，为新的抗氧化、抗衰老和降血糖药物提供了具有较好药用作用的新的药物。

31、4.本发明的化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖化合物的抗氧化活性评价：根据
技术实现要素：
中所述的dpph自由基清除模型及abts+自由基清除模型进行抗氧化活性评价，结果显示该化合物的dpph自由基清除ic50值为338.9±24.7μm，显著的强于阳性对照抗坏血酸(ic50＝1197.0±87.7μm)。该化合物的abts+自由基清ic50值为110.7±2.1μm，显著的强于阳性对照trolox(ic50＝404.8±6.2μm)。

32、化合物1-o-没食子酰基-4,6-四羟基联苯并呋喃二羧基-β-d-吡喃葡萄糖的降糖活性评价：根据发明内容中所述的α-葡萄糖苷酶抑制活性评价方法进行评价，结果显示该化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性ic50值为1.771±0.050μm，显著强于阳性对照quercetin(ic50＝5.747±0.797μm)。