一种EBV的Rta截短mRNA相关疫苗及其制备方法与应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种ebv的rta截短mrna相关疫苗及其制备方法与应用。

背景技术：

1、ebv属人类γ-疱疹病毒亚科淋巴潜隐病毒属，是第一种被鉴定的人类致癌病毒，与鼻咽癌、淋巴瘤、部分胃癌等肿瘤发生密切相关。ebv是双链dna囊膜病毒，基因组大小约为172kb，可以编码85个基因和多种mirna。这些病毒的糖蛋白和mirna在病毒入侵机体,潜伏期凋亡逃避，增殖期的免疫逃避过程中发挥了至关重要的作用。据报道，至少90％以上的鼻咽癌在流行病学上证实与ebv相关，因此以ebv为靶点开发药物和疫苗具有开阔的前景。虽然ebv从发现至今已经过去了40年，但是截止目前为止仍然没有ebv疫苗上市，表明疫苗开发难度大开发周期长的特点。目前每年约有20万新发鼻咽癌病例，开发行之有效的预防和治疗疫苗已刻不容缓。

2、mrna疫苗是是继灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗和病毒载体疫苗后的第三代疫苗，它通过将含有编码抗原蛋白的mrna导入人体，直接进行翻译生成相应的抗原蛋白，从而诱导机体产生特异性免疫应答，达到预防免疫的作用。因此mrna疫苗具有不带有病毒成分，没有感染风险，疫苗整体的安全性要远高于蛋白疫苗。同时由于疫苗的研发周期短，生产成本低，可以针对病毒新兴的变异株在短时间内设计和生产出特异性疫苗。本发明旨在设计和开发针对ebv感染关键性蛋白的mrna治疗性疫苗。

技术实现思路

1、本发明第一方面的目的，在于提供一种蛋白质。

2、本发明第二方面的目的，在于提供编码本发明第一方面的蛋白质的核酸分子。

3、本发明第三方面的目的，在于提供与本发明第二方面的核酸分子相关的生物材料。

4、本发明第四方面的目的，在于提供一种mrna疫苗组合物。

5、本发明第五方面的目的，在于提供本发明第一方面的蛋白质、第二方面的核酸分子、第三方面的生物材料和/或第四方面的mrna疫苗组合物在制备产品中的应用。

6、本发明第六方面的目的，在于提供一种产品。

7、为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

8、本发明第一个方面，在于提供一种蛋白质，所述蛋白质的氨基酸序列为a)或b)：

9、a)如seq id no:1或seq id no:4所示；

10、b)a)所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列。

11、优选地，所述蛋白质的氨基酸序列还可为与a)或b)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上或者90％以上同源性且具有相同功能的氨基酸序列。

12、本发明第二个方面，在于提供编码本发明第一方面的蛋白质的核酸分子。

13、优选地，所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no:2、seq id no:3、seq id no:5或seq id no:6所示。

14、本发明第三个方面，在于提供与本发明第二方面的核酸分子相关的生物材料，所述生物材料包括(1)～(3)中的至少一种：

15、(1)表达盒，含有本发明第二方面的核酸分子；

16、(2)重组载体，含有本发明第二方面的核酸分子或(1)中表达盒；

17、(3)重组细胞，含有本发明第二方面的核酸分子、(1)中表达盒或(2)中重组载体。

18、优选地，所述重组载体为质粒载体、病毒载体或细胞载体。

19、优选地，所述质粒载体可以是任选的质粒，所述病毒载体可以任选的病毒，所述细胞载体不包括繁殖材料。

20、优选地，所述细胞为昆虫细胞和/或哺乳动物细胞。

21、本发明第四个方面，在于提供一种mrna疫苗组合物，所述mrna疫苗组合物包括本发明第一方面的蛋白质、本发明第二方面的核酸分子或本发明第三方面的生物材料。

22、优选地，所述疫苗还包括药学上可接受的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂。

23、优选地，所述载体为脂质体。

24、优选地，所述载体为阳离子脂质体，包括阳离子脂质和辅助脂质。

25、优选地，所述阳离子脂质包括dotap、dotma、doepc、dc-chol、ddab、dodma和dlindma中的至少一种。

26、优选地，所述辅助脂质为中性辅助脂质。

27、优选地，所述中性辅助脂质包括dspc、dope、dopc、dopg、dops和胆固醇中的至少一种。

28、优选地，所述脂质体为dotma和dopa，两者的摩尔比为1～10:1；进一步为2:1。

29、优选地，所述疫苗的制备方法为：将mrna与脂质体混合，其中mrna与脂质体的质量比为1～5:1，进一步为2～3:1。

30、优选地，所述疫苗以生理可给药的形式提供，并且适合于口服、肌内、静脉内、皮下或皮肤注射应用。

31、本发明第五个方面，在于提供本发明第一方面的蛋白质、第二方面的核酸分子、第三方面的生物材料和/或第四方面的mrna疫苗组合物在制备产品中的应用。

32、优选地，所述产品的功能为(b1)～(b5)中的任一种：

33、(b1)预防或治疗eb病毒感染相关疾病；

34、(b2)预防或治疗肿瘤；

35、(b3)抑制肿瘤生长；

36、(b4)引起免疫反应；

37、(b5)制备eb病毒抗体。

38、优选地，所述产品包括试剂和/或试剂盒。

39、优选地，所述产品为药物，进一步为疫苗。

40、本发明第六个方面，在于提供一种产品，包含本发明第一方面的蛋白质、第二方面的核酸分子、第三方面的生物材料和/或第四方面的mrna疫苗组合物。

41、优选地，所述产品的功能为(b1)～(b5)中的任一种：

42、(b1)预防或治疗eb病毒感染相关疾病；

43、(b2)预防或治疗肿瘤；

44、(b3)抑制肿瘤生长；

45、(b4)引起免疫反应；

46、(b5)制备eb病毒抗体。

47、优选地，所述产品包括试剂和/或试剂盒。

48、优选地，所述产品为药物，进一步为疫苗。

49、本发明的有益效果是：

50、本发明提供一种ebv的rta截短的蛋白质，以及基于编码截短蛋白质的mrna制备的相关mrna疫苗。首先申请人分析rta蛋白(brlf1编码)结构以及mhc(主要组织相容性复合体)结合序列；筛选出免疫原性较强的序列：截短体1和截断体2。并基于截短体1和截断体2制备mrna疫苗，发现截短序列和全长序列表现出了相似的肿瘤抑制作用和免疫原性，且截短体激发了更强的细胞免疫，综合考虑生产成本及治疗效果后，截短体序列可以用于ebv相关肿瘤的治疗疫苗的开发。

技术特征：

1.一种蛋白质，所述蛋白质的氨基酸序列为a)或b)：

2.编码权利要求1所述的蛋白质的核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列优选如seqid no:2、seq id no:3、seq id no:5或seq id no:6所示。

3.与权利要求2所述的核酸分子相关的生物材料，所述生物材料包括(1)～(3)中的至少一种：

4.一种mrna疫苗组合物，所述mrna疫苗组合物包括权利要求1所述的蛋白质、权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的生物材料。

5.根据权利要求4所述的mrna疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗还包括药学上可接受的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂。

6.根据权利要求5所述的mrna疫苗组合物，其特征在于，所述载体为脂质体。

7.根据权利要求6所述的mrna疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗以生理可给药的形式提供，并且适合于口服、肌内、静脉内、皮下或皮肤注射应用。

8.权利要求1所述的蛋白质、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的生物材料和/或权利要求4～7中任一项所述的mrna疫苗组合物在制备产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品的功能为(b1)～(b5)中的任一种：

10.一种产品，包含权利要求1所述的蛋白质、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的生物材料和/或权利要求4～7中任一项所述mrna疫苗组合物。

技术总结
本发明属于生物医药技术领域，公开了一种EBV的Rta截短mRNA相关疫苗及其制备方法与应用，具体公开了一种蛋白质。本发明提供一种EBV的Rta截短的蛋白质，以及基于编码截短蛋白质的mRNA制备的相关mRNA疫苗。首先申请人分析Rta蛋白(BRLF1编码)结构以及MHC(主要组织相容性复合体)结合序列；筛选出免疫原性较强的序列：截短体1和截断体2。并基于截短体1和截断体2制备mRNA疫苗，发现截短序列和全长序列表现出了相似的肿瘤抑制作用和免疫原性，且截短体激发了更强的细胞免疫，综合考虑生产成本及治疗效果后，截短体序列可以用于EBV相关肿瘤的治疗疫苗的开发。

技术研发人员：钟茜,曾木圣,袁渤雨,赵舸昕
受保护的技术使用者：中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14