本技术属于生物,具体涉及一种抗claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用。
背景技术:
1、claudins蛋白家族负责维持细胞间紧密连接,并通过建立屏障来控制细胞间的分子流动。claudins在不同组织中表达不同亚型,其中claudin18主要在胃组织中表达,其功能的改变与肿瘤的发生和发展有关。claudin18具有claudin18.1和claudin18.2两种结构高度相似的剪接变体。研究表明,claudin18.2在正常组织中的表达受到高度限制,但是在胃癌组织中发生异常表达,同时在胰腺癌、食管癌、卵巢癌等癌种中发生异位活化,这使得claudin18.2成为消化系统恶性肿瘤治疗的一个潜在靶点。作为一个胃癌的新兴靶点,claudin18.2最大的特点在于,具有这一靶点的患者数量约占全部胃癌患者的50%~60%,药物研发领域也有单抗、双抗、adc和cart等多个类型的在研产品。为了更精准的筛选获益人群,开发应用claudin18.2的伴随诊断也成为相关药企、诊断企业以及临床病理关注的热点。
2、市售的claudin18.2抗体存在灵敏性不高、特异性差等问题,且该抗体目前受国外公司垄断。伴随诊断,如免疫组化和流式细胞检测的准确性直接影响了病人的临床治疗方案,所以对诊断的准确性要求非常高。随着国内针对claudin18.2的靶点药越来越多进入临床,伴随诊断的抗体需求非常大。
3、因此,开发一种高灵敏度、强特异性的抗claudin18.2抗体,对识别和检测组织或者血液中的肿瘤细胞上claudin18.2蛋白的表达具有非常重要的作用。
技术实现思路
1、1.发明目的
2、本技术目的是提供一种抗claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用,该重组单克隆抗体能够特异性识别组织内claudin18.2蛋白。经过多种不同组织的免疫组织化学(ihc)检测发现,该重组单克隆抗体可以很好的检测到正常上皮、肿瘤细胞或免疫细胞上claudin18.2蛋白的表达,可应用于免疫组织化学、间接elisa、免疫荧光、流式细胞术等检测与筛查领域。
3、2.技术方案
4、为了达到上述目的,本技术所采用的技术方案如下:
5、本技术提供了一种抗claudin18.2重组单克隆抗体,该重组单克隆抗体能特异性的与claudin18.2蛋白结合,包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区包括seq id no.8-10所示的氨基酸序列中的一种,轻链可变区包括seq id no.11-13所示的氨基酸序列中的一种。
6、进一步地,上述一种抗claudin18.2重组单克隆抗体,重链可变区包括seq idno.8所示的氨基酸序列,轻链可变区包括seq id no.11所示的氨基酸序列。
7、进一步地,上述一种抗claudin18.2重组单克隆抗体,重链可变区包括seq idno.9所示的氨基酸序列,轻链可变区包括seq id no.12所示的氨基酸序列。
8、进一步地,上述一种抗claudin18.2重组单克隆抗体,重链可变区包括seq idno.10所示的氨基酸序列,轻链可变区包括seq id no.13所示的氨基酸序列。
9、本技术还提供了一种核酸,该核酸编码上述抗claudin18.2重组单克隆抗体。
10、进一步地,上述编码抗claudin18.2重组单克隆抗体的核酸,包括:
11、如seq id no.2所示的核苷酸序列,用于编码上述抗claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括seq id no.8所示的氨基酸序列的重链可变区;
12、如seq id no.3所示的核苷酸序列,用于编码上述抗claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括seq id no.9所示的氨基酸序列的重链可变区;
13、如seq id no.4所示的核苷酸序列,用于编码上述抗claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括seq id no.10所示的氨基酸序列的重链可变区;
14、如seq id no.5所示的核苷酸序列,用于编码上述抗claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括seq id no.11所示的氨基酸序列的轻链可变区。
15、如seq id no.6所示的核苷酸序列,用于编码上述抗claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括seq id no.12所示的氨基酸序列的轻链可变区。
16、如seq id no.7所示的核苷酸序列,用于编码上述抗claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括seq id no.13所示的氨基酸序列的轻链可变区。
17、本技术还提供了一种重组表达载体,该重组表达载体含有上述编码抗claudin18.2重组单克隆抗体的核酸,可以表达抗claudin18.2重组单克隆抗体。
18、进一步地,上述重组表达载体包括:含有上述编码抗claudin18.2重组单克隆抗体的核酸的pcdna3.4++质粒。
19、本技术还提供了一种重组表达细胞,该重组表达细胞包括上述重组表达载体或上述编码抗claudin18.2重组单克隆抗体的核酸,可以表达抗claudin18.2重组单克隆抗体。
20、进一步地,上述重组表达细胞包括:293细胞系。
21、本技术还提供了上述核酸、重组表达载体、重组表达细胞在制备抗claudin18.2重组单克隆抗体中的应用。
22、本技术还提供了一种上述抗claudin18.2重组单克隆抗体的制备方法,包括:采用上述重组表达载体转染细胞获得重组表达细胞;培养转染后的重组表达细胞;收集上清液并纯化,得到抗claudin18.2重组单克隆抗体。
23、本技术还提供了一种标记抗体,包括上述抗claudin18.2重组单克隆抗体,并偶联了酶、荧光素、磁珠等偶联剂。
24、本技术还提供了上述抗claudin18.2重组单克隆抗体、核酸、重组表达载体、重组表达细胞或抗claudin18.2重组单克隆抗体的制备方法在检测claudin18.2蛋白分子,或制备检测claudin18.2蛋白分子设备中的应用。
25、进一步地,上述检测claudin18.2蛋白分子包括免疫组织化学、elisa、免疫荧光、流式细胞术等检测方法中任意一种或多种。
26、进一步地,上述检测claudin18.2蛋白分子设备包括试剂盒、抗体偶联、抗体芯片等中的任意一种或多种。
27、本技术还提供了一种检测claudin18.2蛋白分子的试剂盒,该试剂盒包括上述抗claudin18.2重组单克隆抗体,以抗claudin18.2重组单克隆抗体为一抗。
28、进一步地,上述试剂盒为流式细胞检测试剂盒,包括上述抗claudin18.2重组单克隆抗体,还包括流式细胞检测试剂。
29、进一步地,上述流式细胞检测试剂盒还包括:荧光标记二抗、pbs、牛血清白蛋白、human igg、7-aad等试剂。
30、进一步地,上述试剂盒为免疫组织化学检测试剂盒包括:包括上述抗claudin18.2重组单克隆抗体,还包括免疫组织化学检测试剂。
31、进一步地,上述免疫组织化学检测试剂盒包括:hrp酶标二抗、edta修复液、过氧化氢酶封闭液、dab浓缩液、dab缓冲液、苏木素、返蓝液等。
32、本技术还提供了上述一种检测claudin18.2蛋白分子的试剂盒在检测claudin18.2蛋白分子中的应用。
33、进一步地,上述流式细胞检测试剂盒应用包括:细胞复苏、fc受体阻断、一抗孵育、二抗孵育、7-aad活性染色、上机收集数据等。
34、进一步地,上述免疫组织化学检测试剂盒应用包括:脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶失活、封闭、一抗孵育、二抗孵育、dab显色、复染、脱水、封片和镜检等。
35、3.有益效果
36、本技术与现有技术相比,其有益效果在于:
37、(1)本技术提供的提供一种抗claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用,与claudin18.2蛋白分子的结合具有高特异性和高灵敏度,能够特异性地识别和检测肿瘤组织上claudin18.2蛋白的表达,在检测claudin18.2蛋白时呈阳性高表达,因此该抗体可应用于免疫组织化学、间接elisa、抗体芯片制备、流式细胞术、免疫荧光等检测与筛查领域,有利于获得准确的评估和检测结果。
38、(2)本技术提供的提供一种兔抗人/鼠claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用,由于其特异性好、与claudin18.1不存在交叉、阳性信号强等特点,更容易区分胃癌特异性的阳性,有利于靶向治疗的伴随诊断精准性。