鳊的雄性分子标记及其应用的制作方法

本发明属于分子生物，具体涉及鳊的雄性分子标记及其应用。

背景技术：

1、鳊，学名: parabramispekinensis(basilewsky, 1855) 。鳊体高，侧扁，全体呈菱形，体长约50厘米，为体高的2.2-2.8倍。鳊平时栖息于底质为淤泥、并长有沉水植物的敞水区的中、下层中，冬季喜在深水处越冬。它生活于江河、湖泊中。平时栖于水的中下层。比较适于静水性生活。鳊属于中型鱼类，生长速度较快，以1-2龄生长最快。在水草较丰盛的条件下，一般当年鱼体重可达100-200克;二龄鱼体重可达300-500克，以后生长速度逐渐减慢，最大个体可达3-5千克。鳊2-3龄可达性成熟，长江中下游地区多在4月底至6月初，即水温在20-29℃的时节为产卵期。池塘培育的鳊在繁殖季节，如有微流水或其他条件刺激，能造成不集中的自然产卵。所以每年3月左右，就要将雌雄亲鱼分开培育，人工催情，集中成批繁殖，生产鱼苗。

2、探索鳊性别分化的调控机制，建立全雌或高比例雌性鳊培育新技术对其种质资源保护和开发利用具有重要的理论和实际意义。而性别特异分子标记的开发有助于准确快速获取表型，判断性别，从而开展人工繁殖和选育等工作，也有助于在商业生产中开展性别控制育种技术研究，进而建立单性体系。如今，尚无能够成功鉴定鳊遗传性别的分子标记的报道，因此，开发一种准确鉴定遗传雄性的分子标记在鳊人工繁育中具有极大的生产应用价值。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供鳊的雄性分子标记及其应用。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、一种雄性鳊分子标记，所述雄性鳊分子标记为seq id no:1为所示核苷酸序列，具体为：

4、tccctatctgatgtaacttgtgatccaacctgaatcataacgacaccctgttcattcgctgc caactttgctcacattctatgttgaaaaaaaaaaacagtacttgagtgcccagatgattccacattaaaatccagcatgaagagtaatttggcatcactgtttgaaatacagcattgtttatccagcggtaacagctaagcagtatatgcaaatcaactc tctgtttgttccagtcttctcaattgttttacccaccaagtagtccacgtactct。

5、一种雌雄鳊鉴定的分子标记组合，所述分子标记组合为seq id no:1所示核苷酸序列和seq id no:2为所示核苷酸序列，具体为：tcatctcataccgacctacaggcagaaactgaaatcagctaaacctgtagcaaggtctgtaa agagatggaccaccgaaacagagcgggctttacaagcctgtttcgaatggactgattggagtgtttttgaagctgctgcgaccaatcgggatgagctcacagagactgtaacttcatatatcagtttctgtgaggatttgtgcattcctacaaagactcatttatcttacaacaatgacaaaccctggttcactgcaaaactcagccagctccgtcaggccaaagaagatgctcgcagaaaaggggacagagtcttgtacaaacaggccaaatacacactggaaaaggagatcagagtggcaa。

6、所述seq id no:1所示核苷酸序列或所述分子标记应用于鉴定鳊的性别。

7、一种鉴定鳊性别的引物组合，包括用于鳊性别鉴定的两对引物：

8、byttf24f：为seq id no:3为所示核苷酸序列，5’-tccctatctgatgtaacttgtg-3’；

9、byttf24r：为seq id no:4为所示核苷酸序列，5’-agagtacgtggactacttggt-3’；

10、byttf20f：为seq id no:5为所示核苷酸序列，5’-ttgccactctgatctcct-3’；

11、byttf20r：为seq id no:6为所示核苷酸序列，5’-tcatctcataccgacctaca-3’；

12、byttf24f、 byttf24r序列为seq id no:1所示核苷酸序列引物，利用该引物在雄性鳊扩出阳性片段，但在雌性鳊上扩不出阳性片段；

13、byttf20f、byttf20r序列为seq id no:2所示核苷酸序列引物，利用该引物在雌性和雄性鳊上均可扩出阳性片段。

14、所述的引物组合在鳊性别鉴定中应用。

15、本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包含本发明所述的引物。

16、采用本发明所述试剂盒对鳊进行检测，筛选出雄性鳊的品种，有利于鉴定或辅助鉴定雄性鳊遗传性别。

17、一种鳊性别的鉴定方法，所述方法包括以下步骤：

18、(1)提取待检样品基因组dna；

19、(2)以提取得到的dna为模板，利用所述引物组合在同一个反应体系内进行pcr扩增，得到pcr产物；pcr扩增体系是25ul：10×pcr buffer 3ul，2.5mmol/l dntp 2ul，mgcl23ul，上下游引物各1ul，taq酶0.5ul，dna模板2ul，超纯水10.5ul；pcr扩增程序为：94℃预变性3min; 94℃变性10s，退火温度复性10s，72℃延伸20s，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存；

20、(3)分析电泳结果。利用所述引物组合对待测鳊进行pcr扩增，当扩增结果为277bp和365bp，则所测鳊遗传性别为雄性，当扩增结果仅为365bp，则所测鳊遗传性别为雌性。

21、本发明的有益效果是：

22、本发明公开了一种鳊(spinibarbus hollandi)的雄性分子标记，所述雄性分子标记的序列为核苷酸序列如seq id no.1和2所示；还提供了包含上述引物的试剂盒。本发明从鳊中筛选获得了雄性特异性的分子标记，根据该分子标记设计的检测引物只能在鳊雄性个体中扩增出目的条带，从而可以用该分子标记鉴定或辅助鉴定鳊的性别。同时还提供了一种鳊性别鉴别的方法。通过该技术可以快速、准确、便捷地鉴定鳊的性别，特异性为100％，且对鱼体伤害较低，为鳊性控育种和种质资源保护、改进与可持续利用提供帮助。

技术特征：

1.一种雄性鳊分子标记，其特征在于，所述雄性鳊分子标记为seq id no:1为所示核苷酸序列。

2.一种雌雄鳊鉴定的分子标记组合，其特征在于，所述分子标记组合为seq id no:1所示核苷酸序列和 seq id no:2为所示核苷酸序列。

3.权利要求1中所述seq id no:1所示核苷酸序列或权利要求2中所述分子标记应用于鉴定鳊的性别。

4.一种鉴定鳊性别的引物组合，其特征在于，包括用于鳊性别鉴定的两对引物：

5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求4所述的引物。

6.权利要求4所述的引物组合在鳊性别鉴定中应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：

技术总结
本发明公开了鳊的雄性分子标记及其应用，所述雄性分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供了一段鳊内参引物进行配合鳊雄性特异的引物进行鳊遗传性别鉴定。利用所述引物对待测鳊进行PCR扩增，当扩增结果为277bp和365bp，则所测鳊遗传性别为雄性。当扩增结果仅为365bp，则所测鳊遗传性别为雌性。本发明从鳊中筛选获得了雄性特异性的分子标记，根据该分子标记设计的检测引物只能在鳊雄性个体中扩增出目的条带，从而可以用该分子标记鉴定或辅助鉴定鳊的性别。同时还提供了一种鳊性别鉴别的方法。通过该技术可以快速、准确、便捷地鉴定鳊的性别，特异性为100％，且对鱼体伤害较低，为鳊性控育种和种质资源保护、改进与可持续利用提供帮助。

技术研发人员：杨元金,李志远,姜伟,胡亚成,朱欣,曲焕韬
受保护的技术使用者：中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15