鸡传染性法氏囊抗体检测试剂盒及其制备方法和应用与流程

本发明属于病毒疫病诊断技术和动物检疫领域，具体涉及鸡传染性法氏囊抗体检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术：

1、鸡传染性法氏囊病(ibd)又称鸡传染性腔上囊病(ibdv)，是由传染性法氏囊病毒引起的一种急性、接触传染性疾病。传染性法氏囊病毒属于双rna病毒科，包括两个血清型。以法氏囊发炎、坏死、萎缩和法氏囊内淋巴细胞严重受损为特征。从而引起鸡的免疫机能障碍，干扰各种疫苗的免疫效果。发病率高，几乎达100％，死亡率低，一般为5％～15％，是养禽业最重要的疾病之一。

2、自然条件下，本病只感染鸡，所有品种的鸡均可感染，但不同品种的鸡中，白来航鸡比重型品种的鸡敏感，肉鸡较蛋鸡敏感。本病仅发生于2周--15周的小鸡，3～6周龄为发病高峰期。病毒主要随病鸡粪便排出，污染饲料、饮水和环境，使同群鸡经消化道、呼吸道和眼结膜等感染；各种用具、人员及昆虫也可以携带病毒，扩散传播；本病还可经蛋传递。

3、传染性法氏囊病毒属于双股rna病毒科禽双股rna病毒属。病毒颗粒无囊膜，直径60nm，有一层外壳，20面对称，基因组含a.b两个线状双股rna分子，大小6kbp，病毒对热(60℃30min)稳定，在ph3-9、经乙醚或氯仿处理均不丧失其活性。病毒的复制对细胞的rna及蛋白质的合成无明显影响，病毒在胞浆组装并蓄积。

4、检测鸡ibdv抗体的主要方法有：中和试验、琼扩、间接免疫荧光(ifa)及elisa。中和试验虽然是评价鸡群抗体的金标准，但因其操作繁琐，耗时较长，且需要培养细胞，不适合普通养殖场的使用。琼扩实验虽然操作不复杂，但不够灵敏且耗时较长，达不到快速和灵敏的目的。ifa操作也比较繁琐，需要培养细胞，且观察需要用的荧光显微镜价格昂贵。elisa具备特异、简便、快速的特点。因此，目前普遍使用间接eilsa来评价鸡群内的ibdv抗体水平。但针对养殖户来说，elisa操作依然需要专业人员和专业设备，因此，也不适合在养殖场的现场使用。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一，提供一种鸡传染性法氏囊vp2蛋白的单克隆抗体；本发明的目的之二，提供一种使用本发明制备的vp2蛋白和单克隆抗体制备鸡传染性法氏囊抗体检测试剂盒。

2、因此，本发明一方面公开了一种鸡传染性法氏囊单克隆抗体，所述的单克隆抗体能特异性结合鸡传染性法氏囊vp2蛋白，所述的单克隆抗体为单克隆抗体1c4，所述的单克隆抗体1c4的重链可变区序列和轻链可变区如seq id no.1和seq id no.2所示。

3、再一方面，本发明还公开了一种鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条，所述鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条由试纸条和处理液组成，所述试纸条包括pvc底板，在pvc底板上按顺序依次固定有样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸；试纸条的乳胶微球垫为乳胶微球标记鸡传染性法氏囊vp2蛋白；试纸条的硝酸纤维素膜表面均划有检测线和质控线，其中质控线为单克隆抗体1c4，检测线为鸡传染性法氏囊vp2蛋白。

4、优选地，本发明所述的样品处理液为1×pbs溶液。

5、优选地，本发明所述的试纸条适用于检测血清、血液和组织液中的鸡传染性法氏囊抗体。

6、优选地，本发明所述的组织液为唾液。

7、再一方面，本发明还公开了一种所述的单克隆抗体1c4在制备鸡传染性法氏囊抗体检测试剂中的应用。

8、本发明所提供的鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条适用于血清、全血和组织液(如唾液)中鸡传染性法氏囊抗体的检测，其特异性强、灵敏度高、稳定性好、检测速度快，可用于鸡传染性法氏囊抗体的早期筛查，特别适合现场鸡传染性法氏囊感染诊断、流行病学调查和国际贸易检疫检验等。

9、本发明用于制备试纸条的鸡传染性法氏囊vp2蛋白的单克隆抗体1c4，具有良好的特异性和敏感性，也适用于制备不同的鸡传染性法氏囊诊断试剂，如胶体金、试纸条、elisa、化学发光检测等。

技术特征：

1.一种鸡传染性法氏囊单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体能特异性结合鸡传染性法氏囊vp2蛋白，所述的单克隆抗体为单克隆抗体1c4，所述的单克隆抗体1c4的重链可变区序列和轻链可变区如seq id no.1和seq id no.2所示。

2.一种鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条，其特征在于，所述鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条由试纸条和处理液组成，所述试纸条包括pvc底板，在pvc底板上按顺序依次固定有样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸；试纸条的乳胶微球垫为乳胶微球标记鸡传染性法氏囊vp2蛋白；试纸条的硝酸纤维素膜表面均划有检测线和质控线，其中质控线为权利要求1所述的单克隆抗体1c4，检测线为鸡传染性法氏囊vp2蛋白。

3.根据权利要求2所述的鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条，其特征在于，所述的样品处理液为1×pbs溶液。

4.根据权利要求2所述的鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条，其特征在于，所述的试纸条适用于检测血清、血液和组织液中的鸡传染性法氏囊抗体。

5.根据权利要求4所述的鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条，其特征在于，所述的组织液为唾液。

6.一种如权利要求1所述的单克隆抗体1c4在制备鸡传染性法氏囊抗体检测试剂中的应用。

技术总结
本发明一方面公开了一种特异性结合鸡传染性法氏囊VP2蛋白的单克隆抗体，所述的单克隆抗体为单克隆抗体1C4，该单克隆抗体的重链可变区序列和轻链可变区如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种鸡传染性法氏囊抗体快速检测试纸条，所述快速检测试纸条由试纸条和处理液组成，所述试纸条包括PVC底板，在PVC底板上按顺序依次固定有样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸；试纸条的乳胶微球垫为乳胶微球标记鸡传染性法氏囊VP2蛋白；试纸条的硝酸纤维素膜表面均划有检测线和质控线，其中质控线为单克隆抗体1C4，检测线为鸡传染性法氏囊VP2蛋白。本发明制备的单克隆抗体1C4具有良好的特异性和敏感性，适用于制备不同的鸡传染性法氏囊诊断试剂。

技术研发人员：胡昌红,周侃均,白青月,胡振,强文俊,殷复建,谢宏权
受保护的技术使用者：宁波纯派农业科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15