一种抑制人USP46基因表达的siRNA和脂质体及其应用

本发明涉及生物，特别涉及一种抑制人usp46基因表达的sirna和脂质体及其应用。

背景技术：

1、小干扰rna(small interfering rna；sirna)有时称为短干扰rna(shortinterfering rna)或沉默rna(silencing rna)，是一个长20到25个核苷酸的双股rna，在生物学上有许多不同的用途。已知sirna主要参与rna干扰(rnai)现象，以带有专一性的方式调节基因的表达。此外，也参与一些与rnai相关的反应途径，例如抗病毒机制或是染色质结构的改变。不过这些复杂机制的反应途径尚未明了。

2、乳腺癌是乳腺上皮细胞在多种致癌因子的作用下，发生增殖失控的现象。疾病早期常表现为乳房肿块、乳头溢液、腋窝淋巴结肿大等症状，晚期可因癌细胞发生远处转移，出现多器官病变，直接威胁患者的生命。乳腺癌常被称为“粉红杀手”，其发病率位居女性恶性肿瘤的首位，男性乳腺癌较为少见。随着医疗水平的提高，乳腺癌已成为疗效最佳的实体肿瘤之一。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种抑制人usp46基因表达的sirna。

2、本发明的另一目的在于，提供一种抑制人usp46基因表达的脂质体。

3、本发明的再一目的在于，提供上述sirna及脂质体的应用。

4、本发明的目的通过下述技术方案实现：

5、一种抑制人usp46基因表达的sirna，为以下至少一种：

6、siusp46#1，其正义链核苷酸序列为：

7、5’-cgcuuaccaaugaaacucgaudtdt-3’，

8、反义链核苷酸序列为：

9、5’-aucgaguuucauugguaagcgdtdt-3’；

10、siusp46#2，其正义链核苷酸序列为：

11、5’-auggccugacgucagauauaudtdt-3’，

12、反义链核苷酸序列为：

13、5’-auauaucugacgucaggccaudtdt-3’；

14、siusp46#2-ome，其正义链核苷酸序列为：

15、5’-auggccugacgucagauauaudtdt-3’，第17位至第20位的核苷酸为2’甲氧修饰的核苷酸，

16、反义链核苷酸序列为：

17、5’-auauaucugacgucaggccaudtdt-3’；

18、或siusp46#1、siusp46#2、siusp46#2-ome通过碱基插入、缺失、或替换而获得的仍具有抑制人usp46基因表达功能的类似物。

19、所述的抑制人usp46基因表达的sirna能够通过胆固醇修饰促进sirna进入细胞。

20、所述的抑制人usp46基因表达的sirna通过添加cy3荧光基团使得sirna进入细胞后除了抑制人usp46基因表达功能，还可以发出荧光指示sirna在细胞中位置。

21、所述的抑制人usp46基因表达的sirna，其核苷酸序列中的dt为脱氧胸腺嘧啶。

22、一种抑制人usp46基因表达的脂质体，是上述至少一种抑制人usp46基因表达的sirna被纳米脂质体包封得到的。

23、所述的脂质体的制备方法，包括如下步骤：

24、(1)用无水乙醇溶解dlin-mc3-dma，dmg-peg2000，dspc，胆固醇各组分，并混合得到溶液a备用；

25、(2)将待包封的sirna分别溶解在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中(ph＝4.0,100mm)得到溶液b；

26、(3)将溶液a和溶液b混合，得到一种抑制人usp46基因表达的脂质体。

27、所述的抑制人usp46基因表达的sirna或脂质体在调控人usp46基因表达中的应用。

28、所述的抑制人usp46基因表达的sirna或脂质体在制备usp46蛋白表达抑制剂中的应用。

29、所述的抑制人usp46基因表达的sirna或脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。

30、所述的肿瘤为乳腺癌。

31、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

32、(1)本发明合成了抑制人usp46基因表达的sirna序列，通过纳米脂质体包封递送系统，将合成的sirna递送进入细胞，使其能与细胞质中usp46基因的mrna序列，通过碱基互补配对方式相互结合，抑制usp46蛋白的表达，进而抑制细胞的生长。该sirna可以被纳米脂质体包封递送进入乳腺癌细胞，并抑制其生长，可应用于乳腺癌的治疗。

33、(2)本发明合成的sirna具有比较高的稳定性，能很好地抑制usp46基因的表达，可特异作用于usp46基因，可以被纳米脂质体封装并且递送进入细胞，有效抑制乳腺癌细胞生长。

技术特征：

1.一种抑制人usp46基因表达的sirna，其特征在于为以下至少一种：

2.根据权利要求1所述的抑制人usp46基因表达的sirna，其特征在于：

3.根据权利要求1所述的抑制人usp46基因表达的sirna，其特征在于：

4.根据权利要求1所述的抑制人usp46基因表达的sirna，其特征在于：

5.一种抑制人usp46基因表达的脂质体，其特征在于：

6.权利要求5所述的抑制人usp46基因表达的脂质体的制备方法，包括如下步骤：

7.权利要求1～4任一所述的抑制人usp46基因表达的sirna或权利要求5所述的脂质体在调控人usp46基因表达中的应用。

8.权利要求1～4任一所述的抑制人usp46基因表达的sirna或权利要求5所述的脂质体在制备usp46蛋白表达抑制剂中的应用。

9.权利要求1～4任一所述的抑制人usp46基因表达的sirna或权利要求5所述的脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

技术总结
本发明提供了一种抑制人USP46基因表达的siRNA和脂质体及其应用。本发明合成的siRNA具有比较高的稳定性，能很好地抑制USP46基因的表达，可特异作用于USP46基因，通过纳米脂质体包封递送系统，将合成的siRNA递送进入细胞，使其能与细胞质中USP46基因的mRNA序列，通过碱基互补配对方式相互结合，抑制USP46蛋白的表达，进而抑制细胞的生长。该siRNA可以被纳米脂质体包封递送进入乳腺癌细胞，并抑制其生长，可应用于乳腺癌的治疗。

技术研发人员：林棉杰,刘婉婷,张弓,钟利叶
受保护的技术使用者：暨南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15