一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA、组合物及应用的制作方法

本发明属于生物医药，具体涉及一种抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的sirna、组合物及其应用。

背景技术：

1、ii型糖尿病(type 2diabetes mellitus，t2dm)是多基因遗传性复杂病，由遗传因素及环境因素共同作用而形成；目前由于对其病因和发病机制仍然认识不足，现有干预手段依然以控制血糖水平为主，一般多采用口服降糖药物以及胰岛素治疗，尤其是胰岛素，是作为t2dm后期治疗的常见选择，糖原的合成是胰岛素降低血糖水平的一个重要方式。在进食引起血糖水平高时，胰岛素可以通过激活akt，进而磷酸化并失活糖原合成酶激酶(gsk3)，使糖原合成酶(gs)的磷酸化水平下降、活性上升，促进糖原的生成，进而抑制葡萄糖的合成；胰岛素初始阶段能起到很好控糖效果，但到后期机体逐渐对胰岛素产生耐药性药效降低，且并不能达到很好的治疗效果；

2、越来越多的证据证明lncrna在慢性非感染性疾病中发挥重要的作用，相关研究报道证明loc157273(8p23.1)参与调节血糖以及血脂胆固醇，在ii型糖尿病患者当中，蛋白ppp1r3b作为蛋白磷酸酶靶向亚基，距离它最近的变体rs4841132距离仅仅只有175kb，当loc157273被沉默后，可以负调控蛋白ppp1r3b，进而调节(抑制)葡萄糖的合成，以此为靶点进行合成sirna进行rna干扰治疗t2dm以及开发t2dm新的治疗药物；

3、现有技术中有关于应用于人体肝脏loc157273的sirna，但不适用t2dm新药临床应用前的大型动物实验，大型动物实验是药物临床前评价的主要实验对象，灵长类作为大型动物实验的重要研究对象，与人类遗传物质存在部分同源而非完全同源，因此应用于人体肝脏loc157273的sirna在临床试验中无法直接应用于灵长类动物实验，导致其药效和药代动力学作用难以得到验证，从而影响治疗ii型糖尿病的新药开发。

技术实现思路

1、针对现有技术中应用于人体肝脏loc157273基因的sirna在临床试验中无法直接应用于灵长类动物t2dm实验的问题，提供一种抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的sirna。

2、本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

3、本发明提供一种抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的sirna，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，或与所述正义链和所述反义链序列具有80％以上同源性的sirna。

4、可选的，所述sirna的正义链的3'末端和/或所述sirna的反义链的3'末端加上两个呈单链悬挂结构的脱氧核糖核苷酸dt。

5、一方面，本发明提供一种抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的组合物，包括所述的sirna，或可表达所述sirna的表达体系。

6、可选的，所述组合物还包括用于递送所述sirna的载体。

7、可选的，所述载体包括脂质体。

8、可选的，所述组合物还包括具有糖尿病预防或治疗作用的药物活性成分。

9、可选的，所述药物活性成分包裹于所述脂质体载体中。

10、可选的，所述组合物还包括药学上可接受的辅料。

11、可选的，所述辅料包括缓冲剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、生理食盐、赋形剂、填充剂、凝结剂与调和剂、界面活性剂、扩散剂和消泡剂中的一种或多种。

12、另一方面，本发明提供一种组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。

13、可选的，所述糖尿病包括ii型糖尿病。

14、本申请提供的抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的sirna，所述正义链及反义链包括靶向人肝脏细胞和灵长类动物肝脏细胞中loc157273基因的核苷酸序列，针对人与动物loc157273基因非完全同源部分设计sirna，使该sirna可同时沉默人肝脏细胞和灵长类动物肝脏细胞中loc157273基因，解决现有技术中应用于人体肝脏loc157273基因的sirna在临床试验中无法直接应用于灵长类动物t2dm实验的问题，在t2dm新药实验中更加方便的针对不同物种的相同基因；另外，本申请提供的sirna沉默loc157273基因的位置处于蛋白pp1r3b的上游不表达的长链非编码基因，相比直接过表达目的基因，副产物少即副作用小；本申请提供的sirna为t2dm治疗及新药临床应用提供依据。

技术特征：

1.一种抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的sirna，其特征在于，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，或与所述正义链和所述反义链序列具有80％以上同源性的sirna。

2.根据权利要求1所述的一种抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的sirna，其特征在于，所述sirna的正义链的3'末端和/或所述sirna的反义链的3'末端加上两个呈单链悬挂结构的脱氧核糖核苷酸dt。

3.一种抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的组合物，其特征在于，包括如权利要求1～2任意一项所述的sirna；

4.根据权利要求3所述的抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的组合物，其特征在于，所述组合物还包括用于递送所述sirna的载体。

5.根据权利要求4所述的抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的组合物，其特征在于，所述载体包括脂质体。

6.根据权利要求4所述的抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的组合物，其特征在于，所述组合物还包括具有糖尿病预防或治疗作用的药物活性成分。

7.根据权利要求6所述的抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的组合物，其特征在于，所述药物活性成分包裹于所述脂质体载体中。

8.根据权利要求4所述的抑制肝脏细胞中loc157273基因表达的组合物，其特征在于，所述组合物还包括药学上可接受的辅料，所述辅料包括缓冲剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、生理食盐、赋形剂、填充剂、凝结剂与调和剂、界面活性剂、扩散剂和消泡剂中的一种或多种。

9.如权利要求1～2任意一项所述的sirna或如权利要求3～8任意一项所述的组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的sirna在制备治疗糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述糖尿病包括ii型糖尿病。

技术总结
为克服现有技术中应用于人体肝脏LOC157273基因的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物T2DM实验的问题，提供一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，或与所述正义链和所述反义链序列具有80％以上同源性的siRNA。同时，本发明还公开了上述抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA的组合物及应用。本发明提供的抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，可同时沉默人肝脏细胞和灵长类动物肝脏细胞中LOC157273基因，解决现有技术中应用于人体肝脏LOC157273基因的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物T2DM实验的问题，使治疗药物的药效和药代动力学作用得到验证，从而促进T2DM治疗新药开发。

技术研发人员：王卫中,蔡林涛,张鹏飞,莱昂纳多·利波维奇,王子霆,王媛媛,连昕,郑文岭,张晓松,刘琳娜
受保护的技术使用者：深圳市华元生物技术股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16