一种基于核酸试纸条的核酸检测装置及核酸检测方法与流程

本发明属于生物医学体外快速分子检测，具体涉及一种基于核酸试纸条的核酸检测装置及核酸检测方法。

背景技术：

1、试纸条核酸快检技术是利用等温扩增将核酸中靶标分子大量扩增后在crispr(clustered regularly interspaced short palindromic repeats：原核生物基因组内的一段重复序列)专用核酸检测试纸条或普通核酸核酸检测试纸条上层析，通过核酸检测试纸条上条带显色结果定性检测靶标基因的技术，该技术具有抗原检测技术的便捷性和qpcr(real-time quantitative pcr detecting system：实时荧光定量核酸扩增检测系统)的灵敏性及基因编辑的高特异性。该技术可以用于核酸靶标分子的快速、不依赖设备、高灵敏的检出，是一种先进的分子poct(point-of-care testing：即时检验)技术，在体外诊断试剂开发、病原快检、动物疫病检测等领域应用前景非常广泛。

2、使用等温扩增法(rpa、raa、lamp等)对待检样本核酸进行靶标分子扩增富集，最佳反应温度一般在39℃或65℃，扩增速度快，10-30min就能完成扩增反应，扩增后产物有两种不同的技术方案，基于crispr专用核酸核酸检测试纸条的检测方案是：通过等温扩增将样品中dna或rna(逆转录成cdna)靶标序列扩增富集，得到大量的dna分子，再将dna转录为rna，事先针对靶标分子设计的grna与靶标分子结合诱导crispr酶(cas13a)激发其切割特性，然后将反应体系里的reporter无差别切割，切割后的reporter分子在crispr专用核酸检测试纸条上层析会形成两条带(c线和t线)，相反如果没有靶标分子，则无法激活crispr酶(cas13a)的切割特性，完整的reporter在进行crispr专用核酸核酸检测试纸条上层析检测时只会显示一条带(c线)，从而实现对靶标分子的检测。通用核酸检测试纸条的检测方案是：通过等温扩增将样品中dna或rna(逆转录成cdna)靶标序列扩增富集，原本体系中的引物分别用fam基团和生物素基团标记过，形成产物后fam基团和生物素基团结合在一起，然后用核酸检测试纸条进行层析，有靶标基因的形成了两端同时带有fam基团和生物素基团的产物，核酸检测试纸条上层析会形成两条带(c线和t线)，如果没有靶标分子，则体系中没有两端同时带有fam基团和生物素基团的产物，核酸检测试纸条条上层析检测时只会显示一条带(c线)。

3、目前常用的技术手段是等温扩增后的反应液体系用10倍左右的稀释液稀释后开插入核酸检测试纸条层析显色，该过程需要将等温扩增反应体系暴露在空气中，等温扩增产生的大量核酸气溶胶分子会进入到环境中，从而导致环境中大量的核酸气溶胶污染，这些气溶胶分子导致后面的检测出现假阳性的概率大大升高，影响其他检测的检测结果。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种能降低污染的基于核酸试纸条的核酸检测装置及核酸检测方法，并通过将不同试剂和操作步骤在检测卡的整合，让整个检测过程操作更简单，使用更方便，利于该快速检测技术进入家庭实现自测。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种基于核酸试纸条的核酸检测装置，包括：

3、检测试剂收容组件，所述检测试剂收容组件被配置为能够形成用于收容待测试剂的密封腔室，且形成的所述密封腔室具有薄弱膜；

4、检测卡，所述检测卡包括壳体和核酸检测试纸条，所述核酸检测试纸条收容于所述壳体内，所述壳体设有用于显露所述核酸检测试纸条的透明观察窗；

5、所述壳体还设有待测试剂滴入口，所述壳体上环绕所述待测试剂滴入口设置有结合部，所述结合部被配置为能够以可拆卸的方式与所述检测试剂收容组件密封连接；

6、还包括顶针，所述顶针设置于所述结合部内和/或所述检测试剂收容组件内，所述顶针被配置为当所述检测试剂收容组件与所述结合部密封连接时，所述顶针能够刺破所述检测试剂收容组件薄弱膜，以使所述密封腔室与所述待测试剂滴入口连通。

7、在本发明的一可选实施例中，所述检测试剂收容组件包括第一密封仓和第二密封仓，所述第一密封仓和所述第二密封仓之间具有共用壁。

8、在本发明的一可选实施例中，所述薄弱膜包括第一薄弱膜和第二薄弱膜，所述第一薄弱膜位于所述第一密封仓的仓壁，所述第二薄弱膜位于所述共用壁。

9、在本发明的一可选实施例中，所述检测试剂收容组件包括：

10、第一容器，所述第一容器的一端设有开口；

11、第二容器，所述第二容器以可拆卸的方式密封连接于所述第一容器的开口，以使所述第一容器和所述第二容器围合成所述第一密封仓，所述第二容器内预制形成有所述第二密封仓。

12、在本发明的一可选实施例中，所述第二容器与所述第一容器连接时，所述第二容器的一端凸伸至所述第一容器内。

13、在本发明的一可选实施例中，所述第一薄弱膜位于所述第一容器的远离所述开口的一端。

14、在本发明的一可选实施例中，所述第二薄弱膜位于所述第二容器的凸伸至所述第一容器内的一端。

15、在本发明的一可选实施例中，所述检测试剂收容组件还包括连接盖，所述连接盖被配置为能够以可拆卸的方式与所述第一容器和所述第二容器组成的组合体连接，且所述连接盖能够以可拆卸的方式与所述结合部密封连接；所述连接盖与所述结合部连接时，所述第一容器和所述第二容器组成的组合体位于所述连接盖与所述结合部围合成的密封空间内，且所述第一薄弱膜和所述第二薄弱膜朝向所述待测试剂滴入口设置。

16、在本发明的一可选实施例中，所述第一容器与所述第二容器通过螺纹连接。

17、在本发明的一可选实施例中，所述连接盖与所述结合部通过螺纹连接。

18、在本发明的一可选实施例中，所述顶针位于所述结合部内，且所述顶针相对于所述连接盖的轴线偏心设置。

19、在本发明的一可选实施例中，所述连接盖内设有卡槽，所述第一容器和所述第二容器组成的组合体与所述卡槽形成过盈配合。

20、在本发明的一可选实施例中，所述第一容器和所述第二容器组成的组合体与所述连接盖之间设有限位单元，所述限位单元被配置为当所述组合体与所述连接盖连接时，所述限位单元能够阻止所述组合体相对于所述连接盖转动。

21、在本发明的一可选实施例中，所述限位单元包括限位块和限位槽，所述限位块和所述限位槽中的其中一者位于所述组合体，另一者位于所述连接盖。

22、为实现上述目的及其他相关目的，本发明还提供一种核酸检测方法，包括如下步骤：

23、提供所述的基于核酸试纸条的核酸检测装置；

24、将反应试剂体系冻干球、反应液和样本核酸液加入所述第一容器内混合均匀；

25、将预先封装有稀释液的所述第二容器连接于所述第一容器；

26、将所述第一容器和所述第二容器组成的组合体放到恒温孵育仪上完成等温扩增反应；

27、将所述组合体与所述连接盖连接，再将所述连接盖与所述结合部连接，此过程中顶针刺穿所述薄弱膜，以使所述稀释液与所述反应液混合后流入所述检测液滴入口；

28、静置一段时间后通过透明观察窗观察检测结果，根据试纸条的条带判定检测的阳性或阴性。

29、本发明的技术效果在于：本发明的封闭式检测卡能够将核酸样本封存在密闭容器中进行等温扩增，且扩增完成后直到样本与核酸检测试纸条接触之前，样本都处于密封环境中，从而大大降低了测试环境被核酸气溶胶污染的风险，进而提高了后续核酸检测结果的准确性。并且通过将不同试剂和操作步骤在检测卡的整合，让整个检测过程操作更简单，使用更方便，利于该快速检测技术进入家庭实现自测。