针对TIGIT的单域抗体和其变体的制作方法

本发明涉及包含特异性识别tigit的单域抗体(sdab)部分的构建体，以及其制备和使用方法。
背景技术：
/发明背景具有ig和itim域的t细胞免疫受体(tigit，也称为vstm3或wucam)是属于cd28家族的免疫受体。这种26kda蛋白含有细胞外igv域，i型跨膜区，细胞内免疫球蛋白尾酪氨酸(itt)样基序，以及细胞质中基于c末端免疫受体酪氨酸的抑制基序(itim)基序。在原生t细胞和nk细胞中，tigit在细胞表面几乎检测不到，但在t细胞和nk细胞活化时上调。在肿瘤微环境中，tigit在调节性t细胞(treg)、耗竭的t细胞和nk细胞上被高度检测到。tigit具有多种配体，包括cd155(necl-5或脊髓灰质炎病毒受体(pvr))、cd112(连接蛋白-2或脊髓灰质炎病毒受体相关2(pvrl2))和cd113(连接蛋白-3或pvrl3)。tigit可以高亲和力结合至cd155(pvr)，而以较低的亲和力结合至cd112和cd113。最近的报道也表明tigit顺式地与cd226(pta1或dnam-1)相互作用。tigit经由几种机制发挥其抑制性免疫检查点功能。首先，在与其主要配体cd155(pvr)结合后，随后tigit在其itim域中的磷酸化转导抑制信号，从而经由nf-κb途径来下调t细胞和nk细胞中的ifn-γ表达。其次，由于tigit以比cd226更高的亲和力与pvr相互作用，因此它与cd226竞争并减弱由cd226转导的刺激信号。第三，pvr与树突细胞上的tigit结合可导致il-10表达的上调和il-12表达的下调，因此损害树突细胞的抗肿瘤免疫应答。最后，最近的研究表明，tigit可以直接顺式地与cd226结合，以便抑制cd226二聚化，所述二聚化是t细胞活化所必需的。因此，tigit在感染和癌症的免疫应答中充当重要的负调节因子，并且已经提出阻断tigit信号传导作为增强用于癌症治疗的t细胞和nk细胞免疫的方法。程序性细胞死亡受体1(pd-1)是另一种抑制性免疫检查点分子，对t细胞功能具有重要的负调节作用。当pd-1与调节t细胞受体(tcr)信号传导的程序性细胞死亡配体1(pd-l1)和/或程序性细胞死亡配体2(pd-l2)结合时，pd-1信号传导可以减弱t细胞应答。使用靶向pd-1或pd-l1的抗体来阻断pd-1/pd-l1轴已经证明可促进肿瘤特异性t细胞免疫，对癌症患者具有显著的临床益处。然而，由于pd-1/pd-l1阻断后的抗性或复发，仍然存在巨大的未满足的临床需求。本文所提及的所有出版物、专利、专利申请和公开专利申请的公开内容特此通过引用整体并入本文。

背景技术

技术实现思路

1、本发明涉及抗tigit构建体，其包含特异性识别tigit的sdab部分(下文称为“抗tigit sdab”)，例如抗tigit sdab，抗tigit sdab-fc融合蛋白，其包含与人类免疫球蛋白g(igg)的结晶片段(fc)片段融合的抗tigit sdab，以及多特异性(例如双特异性)抗原结合蛋白，其包含例如与其它sdab融合或与全长四链抗体融合的抗tigit sdab；以及其制备和使用方法。

2、本技术的一个方面提供分离的抗tigit构建体，其包含特异性识别tigit的sdab部分，其中所述sdab部分包含cdr1，所述cdr1包含seq id no:36-42、54、56-59、63、65-67、69-70中的任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；cdr2，所述cdr2包含seq id no:106-112、124、126-129、133、135-137、139-140中的任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；和cdr3，所述cdr3包含seq id no:176-182、194、196-199、203、205-207、209-210中的任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体包含特异性识别tigit的sdab部分，其中所述sdab部分包含cdr1，所述cdr1包含seq id no:36-42、54、56-59、63、65-67、69-70中的任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；cdr2，所述cdr2包含seq id no:106-112、124、126-129、133、135-137、139-140中的任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；和cdr3，所述cdr3包含seq id no:176-182、194、196-199、203、205-207、209-210中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分包含cdr1，所述cdr1包含seq id no:36-42、54、56-59、63、65-67、69-70中的任一者的氨基酸序列；cdr2，所述cdr2包含seq id no:106-112、124、126-129、133、135-137、139-140中的任一者的氨基酸序列；和cdr3，所述cdr3包含seq id no:176-182、194、196-199、203、205-207、209-210中的任一者的氨基酸序列；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体。在一些实施方案中，氨基酸取代在cdr1和/或cdr2中，其中cdr3包含seq id no:176-182、194、196-199、203、205-207、209-210中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分包含cdr1，所述cdr1包含seq id no:36-42、54、56-59、63、65-67、69-70中的任一者的氨基酸序列；cdr2，所述cdr2包含seq id no:106-112、124、126-129、133、135-137、139-140中的任一者的氨基酸序列；和cdr3，所述cdr3包含seq id no:176-182、194、196-199、203、205-207、209-210中的任一者的氨基酸序列。

3、在根据上述任一种分离的抗tigit构建体的一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分包括以下任何一种：

4、(1)包含seq id no:36的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:106的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:176的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

5、(2)包含seq id no:37的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:107的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:177的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

6、(3)包含seq id no:38的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:108的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:178的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

7、(4)包含seq id no:39的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:109的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:179的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

8、(5)包含seq id no:40的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:110的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:180的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

9、(6)包含seq id no:41的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:111的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:181的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

10、(7)包含seq id no:42的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:112的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:182的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

11、(8)包含seq id no:54的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:124的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:194的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

12、(9)包含seq id no:56的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:126的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:196的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

13、(10)包含seq id no:57的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:127的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:197的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

14、(11)包含seq id no:58的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:128的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:198的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

15、(12)包含seq id no:59的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:129的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:199的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

16、(13)包含seq id no:63的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:133的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:203的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

17、(14)包含seq id no:65的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:135的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:205的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

18、(15)包含seq id no:66的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:136的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:206的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

19、(16)包含seq id no:67的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:137的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:207的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；

20、(17)包含seq id no:69的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:139的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:209的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体；或

21、(18)包含seq id no:70的氨基酸序列的cdr1；包含seq id no:140的氨基酸序列的cdr2；和包含seq id no:210的氨基酸序列的cdr3；或所述cdr的在cdr区域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体。

22、在根据上述任一种分离的抗tigit构建体的一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分包含vhh域，所述vhh域包含以下任一者的氨基酸序列：a-1)37位的氨基酸残基选自由以下组成的组：f、y、v、l、a、h、s、i、w、c、n、g、d、t和p(例如f、y、l、i或v，例如f或y，或例如f)；a-2)44位的氨基酸残基选自由以下组成的组：e、q、g、d、a、k、r、l、p、s、v、h、t、n、w、m和i(例如a、g、e、d、q、r、s或l，或例如g、e或q)；a-3)45位的氨基酸残基选自由以下组成的组：l、r、p、h、f、g、q、s、e、t、y、c、i、d和v(例如l、c或r，或例如l或r)；a-4)103位的氨基酸残基选自由以下组成的组：w、r、g、s、k、a、m、y、i、f、t、n、v、q、p、e和c(例如w、g或r，或例如w)；和a-5)108位的氨基酸残基选自由以下组成的组：q、l、r、p、e、k、s、t、m、a和h(例如q)；或b-1)37位的氨基酸残基选自由以下组成的组：f、y、l、i和v(例如f或y，或例如f)；b-2)44位的氨基酸残基选自由以下组成的组：e和q；b-3)45位的氨基酸残基选自由以下组成的组：r和l(例如r)；b-4)103位的氨基酸残基选自由以下组成的组：w、r、g和s(例如w)；和b-5)108位的氨基酸残基选自由以下组成的组：q和l(例如q)；或c-1)37位的氨基酸残基选自由以下组成的组：f、y、l、i和v(例如f或y，或例如f)；c-2)44位的氨基酸残基选自由以下组成的组：a、g、e、d、q、r、s和l(例如g、e或q)；c-3)45位的氨基酸残基选自由以下组成的组：l、r和c(例如l或r)；c-4)103位的氨基酸残基选自由以下组成的组：p、r和s(例如r或s)；和c-5)108位的氨基酸残基选自由以下组成的组：q和l(例如q)；其中氨基酸位置是根据kabat编号。在一些实施方案中，当108位为q时，108位可以任选地人源化为l。

23、在根据如上所述的分离的抗tigit构建体中的任一者的一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分包含vhh域，所述vhh域包含seq id no:253-259、271、273-276、280、282-284、286-287中的任一者的氨基酸序列，或其与seq id no:253-259、271、273-276、280、282-284、286-287中的任一者具有至少约80％(例如至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一者)序列同一性的变体。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分包含vhh域，所述vhh域包含seq id no:253-259、271、273-276、280、282-284、286-287中的任一者的氨基酸序列，或其在vhh域中包含至多约3个(例如约1个、2个或3个中的任一者)氨基酸取代的变体。在一些实施方案中，氨基酸取代在seq id no:253-259、271、273-276、280、282-284、286-287中的任一者的cdr，例如cdr1和/或cdr2和/或cdr3中。在一些实施方案中，氨基酸取代在seq id no:253-259、271、273-276、280、282-284、286-287中的任一者的fr，例如fr1和/或fr2和/或fr3和/或fr4中。在一些实施方案中，氨基酸取代在cdr和fr中。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分包含vhh域，所述vhh域包含seq id no:253-259、271、273-276、280、282-284、286-287中的任一者的氨基酸序列。

24、在根据上述任一种分离的抗tigit构建体的一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分与tigit之间结合的kd为约10-5m至约10-12m(例如约10-5m至约10-12m，约10-7m至约10-12m，或约10-8m至约10-12m)。

25、在根据上述任一种分离的抗tigit构建体的一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分是骆驼科的、嵌合的、人类的、部分人源化的或完全人源化的。

26、在根据上述任一种分离的抗tigit构建体的一些实施方案中，分离的抗tigit构建体是sdab-fc融合蛋白。在一些实施方案中，sdab-fc融合蛋白是单体的。在一些实施方案中，sdab-fc融合蛋白是二聚体的。在一些实施方案中，fc片段是人类igg1(higg1)fc、无效应子(effectorless)(惰性)higg1 fc或higg4fc。在一些实施方案中，fc片段包含seq idno:355、356和389中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分和fc片段任选地通过肽接头来连接，例如包含seq id no:324和370-378中的任一者的氨基酸序列的肽接头。在一些实施方案中，sdab-fc融合蛋白包含seq id no:288-294、306、308-311、315、317-319、321-322和365-367中的任一者的氨基酸序列。

27、在根据上述任一种分离的抗tigit构建体的一些实施方案中，分离的抗tigit构建体还包含特异性识别第二表位的第二抗体部分。在一些实施方案中，第二抗体部分是全长抗体、fab、fab'、(fab')2、fv、单链fv(scfv)、scfv-scfv、微抗体、双抗体(diabody)或sdab。在一些实施方案中，抗tigit构建体是单特异性的。在一些实施方案中，抗tigit构建体是多特异性的(例如双特异性的)。在一些实施方案中，第二表位不来自tigit。在一些实施方案中，第二表位来自tigit但不同于由抗tigit sdab部分特异性识别的表位。在一些实施方案中，第二表位与抗tigit sdab部分特异性识别的表位相同。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分和第二抗体部分任选地通过肽接头来连接，例如包含seq id no:324和370-378中的任一者的氨基酸序列的肽接头。在一些实施方案中，第二抗体部分是sdab。在一些实施方案中，第二抗体部分是fab。在一些实施方案中，第二抗体部分是scfv。在一些实施方案中，第二抗体部分是由两条重链和两条轻链组成的全长抗体。在一些实施方案中，重链的fc片段是igg1fc、无效应子的igg1 fc、igg2 fc或igg4 fc。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分的n末端与全长抗体的重链中的至少一者的c末端融合。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分的c末端与全长抗体的重链中的至少一者的n末端融合。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分的n末端与全长抗体的轻链中的至少一者的c末端融合。在一些实施方案中，特异性识别tigit的sdab部分的c末端与全长抗体的轻链中的至少一者的n末端融合。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体包含四个相同的如上所述的特异性识别tigit的sdab部分，每个抗tigit sdab部分的c末端经由任选的肽接头与全长抗体的每个链的n末端融合。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体包含四个相同的如上所述的特异性识别tigit的sdab部分，两个抗tigit sdab部分经由任选的肽接头彼此融合，另外两个抗tigit sdab部分经由任选的肽接头彼此融合，并且每个抗tigitsdab部分融合多肽的c末端经由任选的肽接头与全长抗体的每条重链的n末端融合。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)vl-cl；(2)抗tigit sdab-vh-ch1-ch2-ch3；(3)抗tigit sdab-vh-ch1-ch2-ch3；和(4)vl-cl，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)vl-cl；(2)vh-ch1-ch2-ch3-抗tigit sdab；(3)vh-ch1-ch2-ch3-抗tigitsdab；和(4)vl-cl，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)抗tigit sdab-vl-cl；(2)vh-ch1-ch2-ch3；(3)vh-ch1-ch2-ch3；和(4)抗tigit sdab-vl-cl，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)vl-cl-抗tigit sdab；(2)vh-ch1-ch2-ch3；(3)vh-ch1-ch2-ch3；和(4)vl-cl-抗tigit sdab，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)抗tigit sdab-vl-cl；(2)抗tigit sdab-vh-ch1-ch2-ch3；(3)抗tigit sdab-vh-ch1-ch2-ch3；和(4)抗tigit sdab-vl-cl，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)vl-cl；(2)抗tigitsdab-抗tigit sdab-vh-ch1-ch2-ch3；(3)抗tigit sdab-抗tigit sdab-vh-ch1-ch2-ch3；和(4)vl-cl，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)vl-cl；(2)vh-ch1-抗tigit sdab-ch2-ch3；(3)vh-ch1-抗tigit sdab-ch2-ch3；和(4)vl-cl，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由两条多肽链组成，每条链具有如下从n末端至c末端的结构：vl-vh-抗tigit sdab-ch2-ch3，其中每个多肽链的vh和vl形成scfv域，其特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的拷贝，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，所述多肽链具有如下从n末端至c末端的结构：(1)vl-cl-抗tigit sdab-cl；(2)vh-ch1-抗tigit sdab-ch1-ch2-ch3；(3)vh-ch1-抗tigit sdab-ch1-ch2-ch3；和(4)vl-cl-抗tigit sdab-cl，其中多肽链(1)和(2)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第一拷贝的抗原结合位点，多肽链(3)和(4)的vh和vl形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的第二拷贝的抗原结合位点，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，分离的抗tigit构建体由四条多肽链组成，其具有如下从n末端至c末端的结构：(1)抗tigit sdab-cl；(2)vl-vh-抗tigit sdab-ch1-ch2-ch3；(3)vl-vh-抗tigit sdab-ch1-ch2-ch3；和(4)抗tigit sdab-cl，其中多肽链(2)和(3)的vh和vl各自形成特异性结合第二表位(例如pd-1、pd-l1)的拷贝的scfv，并且每个抗tigit sdab特异性结合tigit的拷贝。在一些实施方案中，全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)特异性识别pd-1。在一些实施方案中，抗pd-1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包括包含氨基酸序列seq id no:385的vh和包含氨基酸序列seq idno:386的vl。在一些实施方案中，抗pd-1全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:325的重链和包含氨基酸序列seq id no:326的轻链。在一些实施方案中，抗pd-1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包括包含氨基酸序列seq id no:387的vh和包含氨基酸序列seq idno:388的vl。在一些实施方案中，抗pd-1全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:390的重链和包含氨基酸序列seq id no:391的轻链。在一些实施方案中，抗pd-1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包括包含氨基酸序列seq id no:406的vh和包含氨基酸序列seq idno:407的vl。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:390的重链和包含氨基酸序列seq id no:391的轻链，其中全长抗体的重链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中重链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:394或396。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:390的重链和包含氨基酸序列seq id no:391的轻链，其中全长抗体的轻链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中轻链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:399或401。在一些实施方案中，全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)特异性识别pd-l1。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包含1)vh，其包括包含氨基酸序列seq id no:349的hc-cdr1，包含氨基酸序列seq id no:350的hc-cdr2，和包含氨基酸序列seq id no:351的hc-cdr3，和2)vl，其包括包含氨基酸序列seq id no:352的lc-cdr1，包含氨基酸序列seq id no:353的lc-cdr2，和包含氨基酸序列seq id no:354的lc-cdr3。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包括包含氨基酸序列seq id no:339的vh和包含氨基酸序列seq id no:340的vl。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:323或327的重链和包含氨基酸序列seq id no:328的轻链。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:329的重链和包含氨基酸序列seq id no:330的轻链。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包括包含氨基酸序列seq id no:379的vh和包含氨基酸序列seq idno:380的vl。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包括包含氨基酸序列seq id no:383的vh和包含氨基酸序列seq id no:384的vl。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体(或包含vh和vl的抗原结合部分)包括包含氨基酸序列seq id no:381的vh和包含氨基酸序列seq id no:382的vl。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:331的重链和包含氨基酸序列seq id no:332的轻链。在一些实施方案中，抗pd-l1全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:333的重链和包含氨基酸序列seqid no:334的轻链。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:327的重链和包含氨基酸序列seq id no:328的轻链，其中全长抗体的重链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中重链融合多肽包含氨基酸序列seq idno:343。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:323的重链和包含氨基酸序列seq id no:328的轻链，其中全长抗体的重链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中重链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:357或359。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:329的重链和包含氨基酸序列seq id no:330的轻链，其中全长抗体的重链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中重链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:341或402。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:323的重链和包含氨基酸序列seqid no:328的轻链，其中全长抗体的轻链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中轻链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:362或364。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:329的重链和包含氨基酸序列seq idno:330的轻链，其中全长抗体的轻链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中轻链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:405。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:331的重链和包含氨基酸序列seq id no:332的轻链，其中全长抗体的重链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中重链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:347。在一些实施方案中，全长抗体包括包含氨基酸序列seq id no:333的重链和包含氨基酸序列seq id no:334的轻链，其中全长抗体的重链中的至少一者与如上所述的特异性识别tigit的sdab部分融合，并且其中重链融合多肽包含氨基酸序列seq id no:345。

28、在根据上述任一种分离的抗tigit构建体的一些实施方案中，分离的抗tigit构建体还包含生物活性蛋白质或其片段。

29、此外提供了一种分离的抗tigit构建体，其包含特异性识别tigit的sdab部分，其中所述sdab部分包含seq id no:253-259、271、273-276、280、282-284、286-287中的任一者的cdr1、cdr2和cdr3。

30、此外提供了一种分离的抗tigit构建体(例如，抗tigit sdab、抗tigit sdab-fc融合体、pd-1×tigit babp或pd-l1×tigit babp)，其与上述分离的抗tigit构建体中的任何一种竞争性地特异性结合tigit。

31、此外提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含任何一种上述分离的抗tigit构建体和任选地药学上可接受的载体。

32、本技术的另一方面提供了治疗具有tigit相关疾病(例如癌症或免疫相关疾病)的个体的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的任何一种上述药物组合物。在一些实施方案中，tigit相关疾病是癌症。在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤，例如结肠癌。在一些实施方案中，tigit相关疾病是免疫相关疾病。在一些实施方案中，免疫相关疾病与t细胞功能障碍病症相关。在一些实施方案中，t细胞功能障碍病症的特征在于t细胞耗竭。在一些实施方案中，免疫相关疾病选自由以下组成的组：未解决的急性感染、慢性感染和肿瘤免疫。在一些实施方案中，tigit相关疾病是病原性感染。在一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用另外的疗法(例如，癌症疗法)，例如手术、放射、化学疗法、免疫疗法、激素疗法或其组合。在一些实施方案中，另外的疗法是免疫疗法。在一些实施方案中，免疫疗法包括向所述个体施用有效量的第二药物组合物，其包含免疫调节剂，例如免疫检查点抑制剂(例如，特异性识别pd-1或pd-l1的抗体)。在一些实施方案中，全身(例如静脉内(i.v.)或腹膜内(i.p.))施用药物组合物。在一些实施方案中，局部(例如肿瘤内)施用药物组合物。在一些实施方案中，个体是人类。

33、此外提供了一种分离的核酸，所述核酸编码上述任一种分离的抗tigit构建体。在一些实施方案中，分离的核酸包含seq id no:246-252中的任一者的核酸序列。

34、此外提供了一种载体，所述载体包含上述任一种分离的核酸。

35、此外提供了一种分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含上述分离的核酸或载体中的任一者。

36、此外提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含上述分离的抗tigit构建体、分离的核酸、载体或分离的宿主细胞中的任一者。

37、本技术的另一方面提供了产生上述任一种分离的抗tigit构建体的方法，所述方法包括在有效表达所编码的抗tigit构建体的条件下，培养包含上述分离的核酸或载体中的任一者的宿主细胞，或培养任何一种上述的分离的宿主细胞；以及从所述宿主细胞中获得所表达的抗tigit构建体。在一些实施方案中，所述方法还包括产生包含上述分离的核酸或载体中的任一者的宿主细胞。