一种青霉菌株、代谢物及其制备方法和应用

本发明属于海洋微生物，具体涉及一种青霉菌株、代谢物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、海洋中的各种微生物在生物地化循环中起了非常重要的作用。由于海洋环境的特性，物种间密切的生态关系，因此海洋微生物中相当普遍存在某些有特殊作用的生物活性物质，而且其活性一般大大超过陆栖微生物。海洋微生物的多样性为人类提供了种类繁多、分子结构新颖、化学组成复杂和生理活性特异的海洋天然产品，它是药物、保健食品和生物材料的巨大宝库。所以开发利用海洋微生物具有重大的意义。

2、目前，海洋微生物天然活性物质的开发应用已取得了很多成果。且主要体现在海洋药物的开发应用，例如已经从海洋细菌、放线菌、真菌等微生物体内分离到多种具有较强生物活性的物质，结构类型涉及生物碱、肽、萜类、甾体聚酮和大环内酯等，生物活性包括抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗凝血和酶抑制等活性。

3、然而，随着各种致病菌耐药性的增加，很多抗生素效果在减弱甚至消失，改进抗生素和寻找新的抗生素成为科学家们关注的关键问题，通过微生物发酵寻找新的抗生素是一条具有研究意义的道路。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种青霉菌株、代谢物及其制备方法和应用，所述青霉素为产红青霉(penicillium rubens)btbu20213035菌株，及其发酵分离得到的代谢产物能够应用于制备抗真菌菌剂，与雷帕霉素有非常显著的协同抗真菌活性的作用。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供了一株产红青霉(penicillium rubens)btbu20213035菌株，保藏编号为cgmcc no.40157。

4、本发明提供了上述产红青霉btbu20213035菌株的代谢产物，所述代谢产物包括结构式如式i和/或ii所示的物质：

5、

6、本发明提供了上述代谢产物的制备方法，包括以下步骤：

7、将上述产红青霉btbu20213035菌株接种于大米培养基中，培养10～30d，得到发酵产物，所述发酵产物中包含所述代谢产物。

8、优选的，得到所述发酵产物后，还包括分离纯化步骤，所述分离纯化步骤包括：

9、(1)将发酵产物依次进行提取，得到粗提物；

10、(2)将粗提物进行正相硅胶柱分离，依次采用正己烷-二氯甲烷体系和二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，按照组分的流出顺序，分别得到a～m馏分；

11、(3)将其中i和j馏分分别进行葡聚糖凝胶柱分离，采用二氯甲烷-甲醇体系进行洗脱，所得洗脱液经薄层色谱分析，分别得到i1～i9、j1～j9馏分；

12、(4)将i5和j6馏分分别进行高效液相色谱分离，得到所述化合物。

13、优选的，所述步骤(1)中提取的提取剂为乙酸乙酯和甲醇混合液，所述混合液中乙酸乙酯和甲醇的体积比为4:1。

14、优选的，所述步骤(2)中正己烷-二氯甲烷体系中正己烷和二氯甲烷的体积比依次为50:50、30:70、20:80、5:95、2:98、0:100；所述二氯甲烷-甲醇体系中二氯甲烷和甲醇的体积比依次为99:1、98:2、97:3、95:5、90:10、87:13、80:20。

15、优选的，所述步骤(3)中二氯甲烷-甲醇体系中二氯甲烷和甲醇的体积比为2:1。

16、优选的，所述步骤(4)中高相液相色谱分离的色谱柱为c8反相色谱柱，流动相为乙腈-水体系，洗脱为梯度洗脱；

17、所述步骤(4)中i5馏分进行高效液相色谱分离的梯度洗脱程序为：

18、0～25min：所述流动相中乙腈的体积百分含量由40％匀速增加至70％；

19、25～35min：所述流动相中乙腈的体积百分含量由70％匀速增加至100％；

20、所述步骤(4)中j6馏分进行高效液相色谱分离的梯度洗脱程序为：

21、0～8min：所述流动相中乙腈的体积百分含量为30％；

22、8～25min：所述流动相中乙腈的体积百分含量由30％匀速增加至50％；

23、25～40min：所述流动相中乙腈的体积百分含量由50％匀速增加至100％。

24、本发明还提供了上述产红青霉btbu20213035菌株或上述代谢产物在制备抗真菌菌剂中的应用。

25、优选的，所述抗真菌菌剂的活性成分包括上述产红青霉btbu20213035菌株或上述代谢产物，或雷帕霉素和上述产红青霉btbu20213035菌株，或雷帕霉素和上述代谢产物。

26、有益效果：本发明提供了一株产红青霉btbu202133035菌株，所述菌株的保藏编号为cgmcc no.40157。

27、本发明提供了产红青霉btbu20213035菌株的代谢产物及其制备方法，通过发酵、萃取、分离、层析得到代谢产物，所述代谢产物为两种环己烯酮化合物，化合物结构稳定。

28、本发明还提供上述产红青霉btbu20213035菌株或上述代谢产物在制备抗真菌菌剂中的应用，所述产红青霉btbu20213035菌株及其代谢产物均具有抗真菌活性，并且与雷帕霉素合用能够取得非常显著的协同抗真菌活性，能够应用于制备抗真菌菌剂。

29、生物保藏信息

30、产红青霉btbu20213035菌株，拉丁名为penicillium rubens，已于2022年4月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称cgmcc，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.40157。

技术特征：

1.一株产红青霉(penicillium rubens)btbu20213035菌株，其特征在于，保藏编号为cgmcc no.40157。

2.权利要求1所述产红青霉btbu20213035菌株的代谢产物，其特征在于，所述代谢产物包括结构式如式i和/或ii所示的物质：

3.权利要求2所述代谢产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，得到所述发酵产物后，还包括分离纯化步骤，所述分离纯化步骤包括：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取的提取剂为乙酸乙酯和甲醇混合液，所述混合液中乙酸乙酯和甲醇的体积比为4:1。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中正己烷-二氯甲烷体系中正己烷和二氯甲烷的体积比依次为50:50、30:70、20:80、5:95、2:98、0:100；所述二氯甲烷-甲醇体系中二氯甲烷和甲醇的体积比依次为99:1、98:2、97:3、95:5、90:10、87:13、80:20。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中二氯甲烷-甲醇体系中二氯甲烷和甲醇的体积比为2:1。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中高相液相色谱分离的色谱柱为c8反相色谱柱，流动相为乙腈-水体系，洗脱为梯度洗脱；

9.权利要求1所述产红青霉btbu20213035菌株或权利要求2所述代谢产物在制备抗真菌菌剂中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述抗真菌菌剂的活性成分包括权利要求1所述产红青霉btbu20213035菌株或权利要求2所述代谢产物，或雷帕霉素和权利要求1所述产红青霉btbu20213035菌株，或雷帕霉素和权利要求2所述代谢产物。

技术总结
本发明属于海洋微生物技术领域，具体涉及一种青霉菌株、代谢物及其制备方法和应用，所述青霉菌株为产红青霉(Penicillium rubens)BTBU20213035菌株，保藏编号为CGMCC NO.40157。本发明所述产红青霉BTBU20213035菌株及其代谢产物，能够用于制备抗真菌菌剂，与雷帕霉素有非常显著的协同抗真菌活性的作用。

技术研发人员：宋福行,董怡飞,杨金鹏
受保护的技术使用者：北京工商大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15