检测大肠杆菌O157抗原的杂交瘤细胞及其应用的制作方法

本发明涉及检测领域，具体涉及检测大肠杆菌o157抗原的杂交瘤细胞，还涉及由该杂交瘤细胞分泌的抗体，以及在检测o157抗原中的应用。

背景技术：

1、肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic escherichia coli，ehec)感染可引起出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征和血栓性血小板减少性紫癜等，严重威胁人类健康，其中o157：h7是最为常见的血清型，具有感染剂量低，感染后病情发展快，疾病致死率较高的特点。受动物粪便污染的食物和水是大肠杆菌o157∶h7的主要来源，大肠杆菌o157∶h7的低剂量和高毒力往往使感染严重，危及生命，特别是对幼儿、老年人和免疫系统减弱的人危害严重。自1982年美国首次被报告后，在加拿大、瑞典、澳大利亚、苏格兰、威尔士等国家和地区也相继报道了ehec的散发性感染和暴发流行，在世界范围内得到普遍关注。我国自1986年首次报告大肠杆菌o157∶h7的感染病例以来，已先后有十几个省市发现大肠杆菌o157∶h7感染的散发病例，存在潜在的流行的威胁。因此建立特异、灵敏及快速的ehec o157：h7检测方法显得尤为重要。

2、大肠杆菌o157∶h7中o是指o抗原，也就是菌体抗原，指包埋在细菌细胞壁中的脂多糖类；h是指h抗原，也称之为鞭毛抗原，属于蛋白质类，其结构具有较强免疫能力。除常见的两类抗原之外，还有k抗原，指荚膜抗原，大部分是多糖；还有m抗原，类似于粘蛋白、多糖类。临床上主要通过这4类不同抗原类型来对大肠杆菌进行血清学分类。大肠杆菌o157：h7检测方法包括传统分离鉴定法、分子生物学法和免疫学法等。其中免疫学方法具有快速便捷、准确可靠的特点，广泛用于各类微生物的检测预防之中。要实现对o157∶h7的快速准确免疫学检测，就需要高特异、高灵敏的单克隆抗体。优异的大肠杆菌o157:h7单克隆抗体，能够用于elisa、胶体金试纸条、化学发光等不同用途的免疫学试验。

3、开发高特异灵敏的o157∶h7单克隆抗体，对大肠杆菌o157∶h7及时检测和有效预防具有重要意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种检测大肠杆菌o157抗原单克隆抗体杂交瘤细胞cf6；本发明的目的之二在于提供杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体cf6；本发明的目的之三在于提供所述单克隆抗体cf6在制备检测大肠杆菌o157抗原的检测试剂中的应用；本发明的目的之四在于提供含有所述单克隆抗体cf6的检测试剂。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、1、检测大肠杆菌o157抗原单克隆抗体杂交瘤细胞cf6，所述杂交瘤细胞保藏编号为gdmcc no：63527，保藏日期为2023年06月06日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心。

4、2、所述杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体cf6。

5、3、所述单克隆抗体cf6在制备检测大肠杆菌o157抗原的检测试剂中的应用。

6、本发明优选的，所述检测试剂的检测原理为胶体金法、免疫荧光层析法、酶联免疫法或化学发光法。

7、4、含有所述单克隆抗体cf6的检测试剂。

8、本发明优选的，所述检测试剂为western blot试剂。

9、本发明优选的，所述检测试剂包括单克隆抗体cf6和hrp标记羊抗鼠igg。

10、本发明的有益效果在于：本发明公开了检测大肠杆菌o157抗原的杂交瘤细胞，还公开了由该杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体cf6，分泌的抗体能够用于大肠杆菌o157抗原检测，可检测到o157血清型大肠杆菌，且对其他非o157血清型大肠杆菌和常见菌不呈现交叉反应，特异性好；按1：1000稀释，仍能检测到o157血清型大肠杆菌，说明抗体cf6有良好的检测灵敏度，为大肠杆菌o157抗原的检测提供了新的工具。

11、生物材料保藏

12、本发明的大肠杆菌o157抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株da3保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址位于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所，其保藏编号为gdmcc no：63528，保藏日期为2023年06月06日，分类命名为balb/c小鼠杂交瘤细胞。

13、大肠杆菌o157抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株cf6进行保藏，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址位于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所，其保藏编号为gdmcc no.63527，保藏日期为2023年06月06日，分类命名为balb/c小鼠杂交瘤细胞。

技术特征：

1.检测大肠杆菌o157抗原单克隆抗体杂交瘤细胞cf6，其特征在于：所述杂交瘤细胞保藏编号为gdmcc no：63527，保藏日期为2023年06月06日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心。

2.权利要求1所述杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体cf6。

3.权利要求2所述单克隆抗体cf6在制备检测大肠杆菌o157抗原检测试剂中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述检测试剂的检测原理为胶体金法、免疫荧光层析法、酶联免疫法或化学发光法。

5.含有权利要求2所述单克隆抗体cf6的检测试剂。

6.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂为western blot试剂。

7.根据权利要求6所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂包括单克隆抗体cf6和hrp标记羊抗鼠igg。

技术总结
本发明公开了检测大肠杆菌O157抗原的杂交瘤细胞CF6及单抗和应用，杂交瘤细胞保藏编号为GDMCC No：63527，保藏日期为2023年06月06日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，该杂交瘤细胞能够分泌单克隆抗体CF6，用于大肠杆菌O157抗原的检测，具有特异性好和灵敏度高的优点，因此可作为检测大肠杆菌O157抗原的检测试剂。

技术研发人员：郑建,张娟,国锦琳,袁作为,朱传琳
受保护的技术使用者：重庆奥创生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15