本发明涉及生物医药领域,具体涉及牙周梭杆菌fadal在食管鳞状细胞癌诊断和治疗中的应用。
背景技术:
1、食管癌是全世界范围高发且严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。食管癌主要分为鳞癌和腺癌,其中鳞癌占全世界食管癌病例的80%以上,在东亚和非洲地区尤为高发。食管癌的发病是多种因素共同作用的复杂过程,其中环境因素起主导作用,包括亚硝胺,霉变食品,多环芳烃,口腔健康不佳及不良生活习惯等。随着医学技术快速发展,靶向及免疫治疗等新兴疗法也越来越多地被应用于临床,逐渐为escc的治疗带来了新的契机,但其总体5年生存率仍不足20%。因此,识别食管癌的潜在致癌因素对建立早期食管癌筛检体系及食管癌防治具有重大意义。
2、口腔中具有种类复杂,数量庞大的微生物群,唾液微生物群通过吞咽被输送到消化道,有研究指出这些细菌可能与各种消化道癌症有关。而食道之前一直被误认为是无菌的,随人类微生物组计划和高通量测序技术发展,彻底改变了直接研究人类微生物组对人类健康和疾病的作用困局,不同器官中微生物群的丰富性、多样性和确切组成可能有助于食管癌研究的发展。前期本申请的发明人发现了食管癌高发区患者癌和癌旁组织中牙周梭杆菌丰度差异较为显著。但目前牙周梭杆菌及其毒力基因fadal与食管癌的关系及作用机制尚存空白。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足,本发明提出了牙周梭杆菌fadal在食管鳞状细胞癌诊断和治疗中的应用。
2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现:
3、本发明的第一方面,涉及的试剂,所述fadal的dna序列为seq id no.1。
4、可选地,所述试剂为用于检测fadal表达量的rt-qpcr试剂。
5、可选地,所述rt-qpcr的两条特异性引物序列分别为seq id no.3与seq id no.4。
6、本发明的第二方面,涉及一种用于治疗食管癌的药物,包括flot1的抑制剂。
7、可选地,所述抑制剂为抑制flot1表达的sirna,
8、可选地,所述sirna的核苷酸序列为seq id no.5。
9、本发明的第三方面,涉及一种用于牙周梭杆菌毒力基因fadal功能分析的细胞模型的构建方法,包括以下步骤:
10、制备fadal重组蛋白;
11、使用fadal重组蛋白处理食管癌细胞;
12、检测并评估fadal重组蛋白对于食管癌细胞脂质代谢重塑的影响。
13、可选地,所述fadal重组蛋白原核表达系统为pet28a-fadal-his。
14、本发明的第四方面,涉及牙周梭杆菌毒力基因fadal特异性靶点flot1的抑制剂在制备用于治疗食管癌的药物中的应用。
15、本发明的第五方面,涉及flot1作为靶点在筛选抗食管癌潜在药物中的应用。
16、本发明的有益效果:
17、本发明揭示了牙周梭杆菌fadal显著高表达于食管鳞状细胞癌组织内的现象,进一步构建pet28a-fadal-his原核表达载体以诱导fadal重组蛋白,而fadal重组蛋白可靶向宿主细胞flot1重塑食管鳞状细胞癌细胞脂代谢而促进食管癌演进。基于fadal特异性宿主细胞靶点flot1,可制备特异性的抑制flot1的sirna药物以阻断fadal介导食管癌恶性进展。因此,fadal可作为食管鳞状细胞癌早期诊断的分子标志物,而针对fadal特异性靶点flot1的抑制剂可作为食管癌一种新的有效治疗方法,减少患者的治疗成本且提高了其生存率,具有很好的药物开发前景。
1.一种用于诊断食管鳞状细胞癌的试剂盒,其特征在于,包括用于检测牙周梭杆菌毒力因子fadal的试剂,所述fadal的dna序列为seq id no.1。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂为用于检测fadal表达量的rt-qpcr试剂。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述rt-qpcr的两条特异性引物序列分别为seq id no.3与seq id no.4。
4.一种用于治疗食管鳞状细胞癌的药物,包括flot1的抑制剂。
5.根据权利要求4所述的药物,其特征在于,所述抑制剂为抑制flot1表达的sirna。
6.根据权利要求4所述的药物,其特征在于,所述sirna的核苷酸序列为seq id no.5。
7.一种用于牙周梭杆菌毒力基因fadal功能分析的细胞模型的构建方法,包括以下步骤:
8.根据权利要求7所述的细胞模型的构建方法,其特征在于,所述fadal重组蛋白原核表达系统为pet28a-fadal-his。
9.牙周梭杆菌毒力基因fadal特异性靶点flot1的抑制剂在制备用于治疗食管鳞状细胞癌的药物中的应用。
10.flot1作为靶点在筛选抗食管鳞状细胞癌潜在药物中的应用。