抑制去唾液酸糖蛋白受体基因表达的siRNA、其缀合物和药物组合物及用途的制作方法

本技术涉及抑制去唾液酸糖蛋白受体1(asgpr1)基因表达的sirna、sirna缀合物、包含其的药物组合物、其制备方法和用途。

背景技术：

1、心血管疾病(cardiovascular disease,cvd)严重危害人类健康。动脉粥样硬化(atherosclerosis,as)作为cvd的主要病理和生理基础，其发生发展是多个危险因素相互作用的结果，其中血脂代谢紊乱发挥着重要的作用。大量的临床研究表明，纠正血脂代谢紊乱对缓解动脉粥样硬化有明显的益处。除此之外，炎症的激活和血栓的形成也能促进动脉粥样硬化的进展。

2、先前已知去唾液酸糖蛋白受体1(asgpr1)又称为ashwell-morell受体。asgpr1是发挥结合、内化去唾液酸糖蛋白和从循环清除去唾液酸糖蛋白的主要生理作用的跨膜蛋白。asgpr1通过去唾液酸糖蛋白受体1基因(asgpr1基因)主要表达于肝脏中。目前已经明确有许多asgpr1配体参与了糖蛋白代谢、脂质代谢、凝血以及自身免疫性炎症等过程。越来越多的研究表明asgpr1在动脉粥样硬化中发挥着重要作用。流行病学研究表明asgpr1基因突变会降低cvd的患病风险，动物实验研究发现asgpr1缺失可以减缓动脉粥样硬化斑块的形成。另外，asgpr1第4内含子的功能缺失突变，即asgpr1del12突变，可影响血液中低密度脂蛋白胆固醇(ldlc)水平。有证据表明asgpr1与动脉粥样硬化的其他危险因素，如炎症激活、血小板异常等存在联系。因此，能够靶向asgpr1基因并降低asgpr1蛋白表达水平的治疗剂代表治疗心血管疾病(包括冠状动脉疾病)的新型方式。

3、目前尚无靶向asgpr1的产品获批上市，但是有两项处于临床阶段项目，均为临床1期，其中一项为inst nuclear energy res(originator)公司开发的诊断试剂，另一项为安进公司开发的单克隆抗体，适应症为心血管紊乱。

4、本发明旨在提供sirna、sirna缀合物及其药物组合物，其可以抑制肝脏中asgpr1基因的表达，从而实现疾病治疗的目的。

技术实现思路

1、本发明提供了一种抑制去唾液酸糖蛋白受体1(asgpr1)基因表达的sirna，所述sirna包含正义链与反义链，其中所述sirna中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，其中所述正义链含有核苷酸序列i，反义链含有核苷酸序列ii，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii至少部分地反向互补形成双链区，其中所述核苷酸序列i和核苷酸序列ii选自以下序列：

2、(1)所述核苷酸序列i包含seq id no:141所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:142所示的核苷酸序列：

3、5’-gucugugugaucgga-3’(seq id no:141)

4、5’-uccgaucacacagac-3’(seq id no:142)；

5、(2)所述核苷酸序列i包含seq id no:143所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:144所示的核苷酸序列：

6、5’-agagucccagcuggagaaa-3’(seq id no:143)

7、5’-uuucuccagcugggacucu-3’(seq id no:144)；

8、(3)所述核苷酸序列i包含seq id no:145所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:146所示的核苷酸序列：

9、5’-cugacgccgacaacua-3’(seq id no:145)

10、5’-uaguugucggcgucag-3’(seq id no:146)；

11、(4)所述核苷酸序列i包含seq id no:147所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:148所示的核苷酸序列：

12、5’-acgagacgggcuucaag-3’(seq id no:147)

13、5’-cuugaagcccgucucgu-3’(seq id no:148)；

14、(5)所述核苷酸序列i包含seq id no:149所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:150所示的核苷酸序列：

15、5’-ggacugugcccacu-3’(seq id no:149)

16、5’-agugggcacagucc-3’(seq id no:150)；

17、(6)所述核苷酸序列i包含seq id no:151所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:152所示的核苷酸序列：

18、5’-gggucugcgagaca-3’(seq id no:151)

19、5’-ugucucgcagaccc-3’(seq id no:152)；

20、(7)所述核苷酸序列i包含seq id no:153所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:154所示的核苷酸序列：

21、5’-gggaaggauagggugau-3’(seq id no:153)

22、5’-aucacccuauccuuccc-3’(seq id no:154)；

23、(8)所述核苷酸序列i包含seq id no:155所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:156所示的核苷酸序列：

24、5’-gggugauguuccgaag-3’(seq id no:155)

25、5’-cuucggaacaucaccc-3’(seq id no:156)；

26、(9)所述核苷酸序列i包含seq id no:157所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:158所示的核苷酸序列：

27、5’-caguuugcagguuaucau-3’(seq id no:157)

28、5’-augauaaccugcaaacug-3’(seq id no:158)；

29、(10)所述核苷酸序列i包含seq id no:1所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:2所示的核苷酸序列；

30、(11)所述核苷酸序列i包含seq id no:44所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:45所示的核苷酸序列；

31、(12)所述核苷酸序列i包含seq id no:71所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:72所示的核苷酸序列；

32、(13)所述核苷酸序列i包含seq id no:75所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:76所示的核苷酸序列；

33、(14)所述核苷酸序列i包含seq id no:89所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:90所示的核苷酸序列；

34、(15)所述核苷酸序列i包含seq id no:91所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:92所示的核苷酸序列；

35、(16)所述核苷酸序列i包含seq id no:359所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:360所示的核苷酸序列：

36、5’-gggcuugagca-3’(seq id no:359)

37、5’-ugcucaagccc-3’(seq id no:360)；

38、(17)所述核苷酸序列i包含seq id no:361所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:362所示的核苷酸序列：

39、5’-ugcuccacgugaa-3’(seq id no:361)

40、5’-uucacguggagca-3’(seq id no:362)；

41、(18)所述核苷酸序列i包含seq id no:363所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:364所示的核苷酸序列：

42、5’-gcaguucgugucu-3’(seq id no:363)

43、5’-agacacgaacugc-3’(seq id no:364)；

44、(19)所述核苷酸序列i包含seq id no:365所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:366所示的核苷酸序列：

45、5’-gagccugagcugucaga-3’(seq id no:365)

46、5’-ucugacagcucaggcuc-3’(seq id no:366)；

47、(20)所述核苷酸序列i包含seq id no:367所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:368所示的核苷酸序列：

48、5’-gaugggccuccacgaccaaa-3’(seq id no:367)

49、5’-uuuggucguggaggcccauc-3’(seq id no:368)；

50、(21)所述核苷酸序列i包含seq id no:369所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:370所示的核苷酸序列：

51、5’-acccguggcg-3’(seq id no:369)

52、5’-cgccacgggu-3’(seq id no:370)；

53、(22)所述核苷酸序列i包含seq id no:371所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:372所示的核苷酸序列：

54、5’-acuacgagacgggcuu-3’(seq id no:371)

55、5’-aagcccgucucguagu-3’(seq id no:372)；

56、(23)所述核苷酸序列i包含seq id no:187所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:188所示的核苷酸序列；

57、(24)所述核苷酸序列i包含seq id no:258所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:259所示的核苷酸序列；

58、(25)所述核苷酸序列i包含seq id no:260所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:261所示的核苷酸序列；

59、(26)所述核苷酸序列i包含seq id no:296所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:297所示的核苷酸序列。

60、在一个实施方案中，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii基本上反向互补、实质上反向互补或完全反向互补；所述基本上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于3个的碱基错配；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配。

61、在一个实施方案中，所述正义链还含有核苷酸序列iii，所述反义链还含有核苷酸序列iv，核苷酸序列iii和核苷酸序列iv的长度各自独立地为0-9个核苷酸，其中所述核苷酸序列iii连接在核苷酸序列i的5'末端，核苷酸序列iv连接在核苷酸序列ii的3'末端，所述核苷酸序列iii和所述核苷酸序列iv长度相等并且实质上反向互补或完全反向互补；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配；和/或，所述核苷酸序列iii连接在核苷酸序列i的3'末端，核苷酸序列iv连接在核苷酸序列ii的5'末端，所述核苷酸序列iii和所述核苷酸序列iv长度相等并且实质上反向互补或完全反向互补；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配。

62、在一个实施方案中，所述正义链还含有核苷酸序列v和/或所述反义链还含有核苷酸序列vi，核苷酸序列v和vi的长度为0至3个核苷酸，核苷酸序列v连接在所述正义链的3'末端构成正义链的3'突出端，和/或核苷酸序列vi连接在所述反义链的3'末端构成反义链的3'突出端。在一个优选的实施方式中，所述核苷酸序列v或vi的长度为2个核苷酸。在一个优选的实施方案中，所述核苷酸序列v或vi为连续的两个胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸或连续的两个尿嘧啶核糖核苷酸。在一个优选的实施方案中，所述核苷酸序列v或vi与靶mrna相应位置的核苷酸错配或互补。

63、在一个实施方案中，该双链区的长度是15-30个核苷酸对。在一个优选的实施方案中，双链区的长度是17-23个核苷酸对。在一个更优选的实施方案中，双链区的长度是19-21个核苷酸对。

64、在一个实施方案中，正义链或反义链具有15-30个核苷酸。在一个优选的实施方案中，正义链或反义链具有19-25个核苷酸。在一个更优选的实施方案中，正义链或反义链具有19-23个核苷酸。

65、在一个实施方案中，所述正义链或所述反义链中的至少一个核苷酸为修饰的核苷酸，和/或至少一个磷酸酯基为具有修饰基团的磷酸酯基；优选地，所述含有修饰基团的磷酸酯基为磷酸酯基中的磷酸二酯键中的至少一个氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。

66、在一个实施方案中，所述sirna包括不包含3’突出端核苷酸的正义链。

67、在一个实施方案中，所述正义链的5’末端核苷酸连接5’磷酸基团或5’磷酸衍生基团，和/或所述反义链的5’末端核苷酸连接5’磷酸基团或5’磷酸衍生基团。

68、在一个实施方案中，所述修饰的核苷酸选自2’-氟代修饰的核苷酸，2’-烷氧基修饰的核苷酸，2’-取代的烷氧基修饰的核苷酸，2’-烷基修饰的核苷酸，2’-取代的烷基修饰的核苷酸，2’-脱氧核苷酸，2’-氨基修饰的核苷酸，2’-取代的氨基修饰的核苷酸，核苷酸类似物或其中任意两种以上的组合。

69、在一个实施方案中，所述修饰的核苷酸选自2’-f修饰的核苷酸，2’-o-ch3修饰的核苷酸，2’-o-ch2-ch2-o-ch3修饰的核苷酸，2’-o-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸，2’-ch2-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸，2’-脱氧核苷酸，核苷酸类似物或其中任意两种以上的组合。

70、在一个实施方案中，所述正义链和所述反义链中的每一个核苷酸独立地为2’-氟代修饰的核苷酸或非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、8、9、14和16位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、14和16位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个实施方案中，每一个非氟代修饰的核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，所述2’-甲氧基修饰的核苷酸指核糖基的2'-羟基被甲氧基取代而形成的核苷酸。

71、在一个实施方案中，每一个非氟代修饰的核苷酸独立地选自核苷酸的核糖基2'位的羟基被非氟基团取代形成的核苷酸或核苷酸类似物中的一种，核苷酸类似物选自异核苷酸、lna、ena、cet bna、una和gna中的一种。

72、在一个实施方案中，所述正义链和所述反义链中的每一个核苷酸独立地为2’-氟代修饰的核苷酸，2’-甲氧基修饰的核苷酸，gna修饰的核苷酸或其中任意两种以上的组合。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、8、9、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第6位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第7位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

73、在一些实施方案中，所述sirna中以下核苷酸之间的连接中至少一个为硫代磷酸酯基连接：

74、所述正义链的5’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

75、所述正义链的5’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接；

76、所述正义链的3’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

77、所述正义链的3’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接；

78、所述反义链的5’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

79、所述反义链的5’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接；

80、所述反义链的3’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

81、所述反义链的3’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接。

82、在一些实施方案中，所述sirna沿5’末端向3’末端方向，所述正义链包含位于如下所示位置处的硫代磷酸酯基：

83、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

84、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

85、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

86、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

87、或者，

88、所述正义链包含位于如下所示位置处的硫代磷酸酯基：

89、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

90、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

91、在一些实施方案中，所述sirna沿5’末端向3’末端方向，反义链包含位于如下所示位置处的硫代磷酸酯基：

92、所述反义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

93、所述反义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

94、所述反义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

95、所述反义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

96、在一个实施方案中，所述正义链和所述反义链中的每一个核苷酸独立地为2’-氟代修饰的核苷酸，2’-甲氧基修饰的核苷酸，gna修饰的核苷酸或其中任意两种以上的组合。

97、在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。优选地，所述序列为n-er-fy018001m1、n-er-fy018022m1、n-er-fy018002m1、n-er-fy018003m1、n-er-fy018004m1、n-er-fy018026m1、n-er-fy018005m1、n-er-fy018006m1、n-er-fy018030m1、n-er-fy018007m1、n-er-fy018008m1、n-er-fy018032m1、n-er-fy018010m1、n-er-fy018034m1、n-er-fy018012m1、n-er-fy018015m1、n-er-fy018038m1、n-er-fy018017m1、n-er-fy018040m1、n-er-fy018043m1、n-er-fy018020m1。

98、在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接，3’末端除去突出端；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。优选地，所述序列为n-er-fy018001md2、n-er-fy018022md2、n-er-fy018002md2、n-er-fy018026md2、n-er-fy018030md2、n-er-fy018007md2、n-er-fy018032md2、n-er-fy018034md2、n-er-fy018012md2、n-er-fy018015md2、n-er-fy018038md2、n-er-fy018017md2、n-er-fy018040md2、n-er-fy018043md2、n-er-fy018020md2。

99、在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接，3’末端除去突出端；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。优选地，所述序列为n-er-fy018001m2d2、n-er-fy018002m2d2、n-er-fy018020m2d2、n-er-fy018022m2d2、n-er-fy018030m2d2、n-er-fy018038m2d2。

100、在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。优选地，所述序列为n-er-fy018001m2、n-er-fy018002m2、n-er-fy018020m2、n-er-fy018022m2、n-er-fy018030m2、n-er-fy018038m2、n-er-fy018043m2、n-er-fy018045m2、n-er-fy018046m2、n-er-fy018047m2、n-er-fy018049m2、n-er-fy018056m2、n-er-fy018057m2、n-er-fy018061m2、n-er-fy018064m2、n-er-fy018066m2、n-er-fy018067m2、n-er-fy018071m2、n-er-fy018072m2、n-er-fy018073m2、n-er-fy018074m2、n-er-fy018075m2、n-er-fy018076m2、n-er-fy018077m2、n-er-fy018078m2、n-er-fy018079m2、n-er-fy018080m2。

101、在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、8、9、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。优选地，所述序列为n-er-fy018001m3、n-er-fy018002m3、n-er-fy018020m3、n-er-fy018022m3、n-er-fy018030m3、n-er-fy018038m3、n-er-fy018043m3、n-er-fy018045m3、n-er-fy018046m3、n-er-fy018047m3、n-er-fy018049m3、n-er-fy018056m3、n-er-fy018057m3、n-er-fy018061m3、n-er-fy018064m3、n-er-fy018066m3、n-er-fy018067m3、n-er-fy018071m3、n-er-fy018072m3、n-er-fy018073m3、n-er-fy018074m3、n-er-fy018075m3、n-er-fy018076m3、n-er-fy018077m3、n-er-fy018078m3、n-er-fy018079m3、n-er-fy018080m3。

102、在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第6位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。优选地，所述序列为n-er-fy018001m4、n-er-fy018002m4、n-er-fy018020m4、n-er-fy018022m4、n-er-fy018030m4、n-er-fy018038m4、n-er-fy018043m4、n-er-fy018045m4、n-er-fy018046m4、n-er-fy018047m4、n-er-fy018049m4、n-er-fy018056m4、n-er-fy018057m4、n-er-fy018061m4、n-er-fy018064m4、n-er-fy018066m4、n-er-fy018067m4、n-er-fy018071m4、n-er-fy018072m4、n-er-fy018073m4、n-er-fy018074m4、n-er-fy018075m4、n-er-fy018076m4、n-er-fy018077m4、n-er-fy018078m4、n-er-fy018079m4、n-er-fy018080m4。

103、在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第7位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。优选地，所述序列为n-er-fy018001m5、n-er-fy018002m5、n-er-fy018020m5、n-er-fy018022m5、n-er-fy018030m5、n-er-fy018038m5、n-er-fy018043m5、n-er-fy018045m5、n-er-fy018046m5、n-er-fy018047m5、n-er-fy018049m5、n-er-fy018056m5、n-er-fy018057m5、n-er-fy018061m5、n-er-fy018064m5、n-er-fy018066m5、n-er-fy018067m5、n-er-fy018071m5、n-er-fy018072m5、n-er-fy018073m5、n-er-fy018074m5、n-er-fy018075m5、n-er-fy018076m5、n-er-fy018077m5、n-er-fy018078m5、n-er-fy018079m5、n-er-fy018080m5。

104、在一个具体实施方案中，本发明提供了选自表1的sirna；优选地，所述sirna选自n-er-fy018001、n-er-fy018001m1、n-er-fy018001md2、n-er-fy018001m2、n-er-fy018001m2d2、n-er-fy018001m3、n-er-fy018001m4、n-er-fy018001m5、n-er-fy018002、n-er-fy018002m1、n-er-fy018002md2、n-er-fy018002m2、n-er-fy018002m2d2、n-er-fy018002m3、n-er-fy018002m4、n-er-fy018002m5、n-er-fy018007、n-er-fy018007m1、n-er-fy018007md2、n-er-fy018012、n-er-fy018012m1、n-er-fy018012md2、n-er-fy018015、n-er-fy018015m1、n-er-fy018015md2、n-er-fy018017、n-er-fy018017m1、n-er-fy018017md2、n-er-fy018020、n-er-fy018020m1、n-er-fy018020md2、n-er-fy018020m2、n-er-fy018020m2d2、n-er-fy018020m3、n-er-fy018020m4、n-er-fy018020m5、n-er-fy018022、n-er-fy018022m1、n-er-fy018022md2、n-er-fy018022m2、n-er-fy018022m2d2、n-er-fy018022m3、n-er-fy018022m4、n-er-fy018022m5、n-er-fy018026、n-er-fy018026m1、n-er-fy018026md2、n-er-fy018030、n-er-fy018030m1、n-er-fy018030md2、n-er-fy018030m2、n-er-fy018030m2d2、n-er-fy018030m3、n-er-fy018030m4、n-er-fy018030m5、n-er-fy018032、n-er-fy018032m1、n-er-fy018032md2、n-er-fy018034、n-er-fy018034m1、n-er-fy018034md2、n-er-fy018038、n-er-fy018038m1、n-er-fy018038md2、n-er-fy018038m2、n-er-fy018038m2d2、n-er-fy018038m3、n-er-fy018038m4、n-er-fy018038m5、n-er-fy018040、n-er-fy018040m1、n-er-fy018040md2、n-er-fy018043、n-er-fy018043m1、n-er-fy018043md2、n-er-fy018043m2、n-er-fy018043m3、n-er-fy018043m4、n-er-fy018043m5、n-er-fy018045、n-er-fy018045m2、n-er-fy018045m3、n-er-fy018045m4、n-er-fy018045m5、n-er-fy018046、n-er-fy018046m2、n-er-fy018046m3、n-er-fy018046m4、n-er-fy018046m5、n-er-fy018047、n-er-fy018047m2、n-er-fy018047m3、n-er-fy018047m4、n-er-fy018047m5、n-er-fy018049、n-er-fy018049m2、n-er-fy018049m3、n-er-fy018049m4、n-er-fy018049m5、n-er-fy018056、n-er-fy018056m2、n-er-fy018056m3、n-er-fy018056m4、n-er-fy018056m5、n-er-fy018057、n-er-fy018057m2、n-er-fy018057m3、n-er-fy018057m4、n-er-fy018057m5、n-er-fy018061、n-er-fy018061m2、n-er-fy018061m3、n-er-fy018061m4、n-er-fy018061m5、n-er-fy018064、n-er-fy018064m2、n-er-fy018064m3、n-er-fy018064m4、n-er-fy018064m5、n-er-fy018066、n-er-fy018066m2、n-er-fy018066m3、n-er-fy018066m4、n-er-fy018066m5、n-er-fy018067、n-er-fy018067m2、n-er-fy018067m3、n-er-fy018067m4、n-er-fy018067m5、n-er-fy018071、n-er-fy018071m2、n-er-fy018071m3、n-er-fy018071m4、n-er-fy018071m5、n-er-fy018072、n-er-fy018072m2、n-er-fy018072m3、n-er-fy018072m4、n-er-fy018072m5、n-er-fy018073、n-er-fy018073m2、n-er-fy018073m3、n-er-fy018073m4、n-er-fy018073m5、n-er-fy018074、n-er-fy018074m2、n-er-fy018074m3、n-er-fy018074m4、n-er-fy018074m5、n-er-fy018075、n-er-fy018075m2、n-er-fy018075m3、n-er-fy018075m4、n-er-fy018075m5、n-er-fy018076、n-er-fy018076m2、n-er-fy018076m3、n-er-fy018076m4、n-er-fy018076m5、n-er-fy018077、n-er-fy018077m2、n-er-fy018077m3、n-er-fy018077m4、n-er-fy018077m5、n-er-fy018078、n-er-fy018078m2、n-er-fy018078m3、n-er-fy018078m4、n-er-fy018078m5、n-er-fy018079、n-er-fy018079m2、n-er-fy018079m3、n-er-fy018079m4、n-er-fy018079m5、n-er-fy018080、n-er-fy018080m2、n-er-fy018080m3、n-er-fy018080m4、n-er-fy018080m5。

105、本发明还提供了一种sirna缀合物，所述sirna缀合物含有本发明的sirna以及缀合至该sirna的缀合基团(如下图所示，双螺旋结构表示所述sirna，并且所述缀合基团连接至所述sirna的正义链3'末端)：

106、

107、上述缀合物结构中x可选择为o或s，在一个实施方案中，x为o。

108、在一个实施方案中，所述缀合基团包含药学上可接受的靶向基团和接头，并且所述sirna、所述接头和所述靶向基团依次共价或非共价连接；

109、优选地，在所述sirna缀合物中，sirna的正义链与反义链互补形成所述sirna缀合物的双链区，且所述正义链的3’末端形成平末端，所述反义链的3’末端具有1-3个延伸出所述双链区的突出的核苷酸；

110、或者，

111、在所述sirna缀合物中，sirna的正义链与反义链互补形成所述sirna缀合物的双链区，且所述正义链的3’末端形成平末端，所述反义链的3’末端形成平末端。

112、在一个实施方案中，所述缀合基团为下式的l96：

113、

114、在一个具体实施方案中，所述sirna缀合物为选自表2的sirna缀合物。

115、本发明还提供了一种药物组合物，其包含本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，以及药学上可接受的载体。

116、本发明还提供了试剂盒，其包含本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物。

117、本发明还提供了本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物用于制备抑制asgpr1基因表达的药剂的用途。

118、本发明还提供了本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物用于制备预防和/或治疗asgpr1基因过表达相关的疾病的药剂的用途。

119、在一个实施方案中，所述疾病为肥胖症、代谢综合征、高脂质血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、异常脂质和/或胆固醇代谢、动脉粥样硬化、糖尿病、心血管疾病、冠状动脉疾病、心肌梗塞、外周血管疾病或脑血管疾病；优选地，所述疾病是动脉粥样硬化。

120、本发明还提供了抑制asgpr1基因表达的方法，包括将治疗有效量的本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物与表达asgpr1的细胞接触或给予有需要的受试者。

121、本发明还提供了治疗和/或预防asgpr1基因过表达相关的疾病的方法，包括将治疗有效量的本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物给予有需要的受试者。

122、在一个实施方案中，所述疾病为肥胖症、代谢综合征、高脂质血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、异常脂质和/或胆固醇代谢、动脉粥样硬化、糖尿病、心血管疾病、冠状动脉疾病、心肌梗塞、外周血管疾病或脑血管疾病；优选地，所述疾病是动脉粥样硬化。

123、有益效果

124、本技术提供的sirna、药物组合物和sirna缀合物在体外细胞实验中显示出优异的asgpr1基因表达抑制活性，具有良好的治疗asgpr1基因过表达相关的疾病的潜力。例如，本技术公开的sirna及其缀合物能够降低肝脏中asgpr1 mrna的表达，毒副作用低，血浆稳定性好，具有良好的临床应用前景。

125、本技术提供的sirna在hepg2细胞中显示出对asgpr1基因良好的抑制效果。在一些具体实施方式中，本技术提供的sirna在1nm和0.1nm下均可显著抑制asgpr1基因的表达，其中在1nm下48h抑制率最高达94.71％，在0.1nm下48h抑制率最高达88.20％。

126、在一些具体实施方式中，本技术提供的sirna在hepg2细胞中有较高的asgpr1基因抑制活性，例如，ic50约0.0018-1.4669nm，最低至0.0018nm。

127、在一些具体实施方式中，本技术提供的sirna缀合物在phh细胞中具有较高的asgpr1基因抑制活性，例如，在sirna缀合物通过自由摄取进入phh的情况下，ic50可低至0.109nm；在sirna缀合物通过转染进入phh的情况下，ic50可低至0.004nm。