参与七叶皂苷A合成的酰基转移酶AcBAHD6及其编码基因及应用

本发明涉及生物，特别地涉及参与七叶皂苷a合成的酰基转移酶acbahd6及其编码基因及应用。

背景技术：

1、七叶树为无患子目七叶树科七叶树属落叶乔木，2015年版《中国药典》收载的娑罗子为七叶树的干燥成熟种子。娑罗子的主要有效成分为七叶皂苷，目前以七叶皂苷为主的多种新型制剂已被国内外广泛应用于临床，如“reparil”(德国，注射剂)，“qescusan、germad”(德国，片剂或栓剂)，“venostascin”(德国，注射剂、胶囊或软膏)，“tochikinon”(日本，片剂)和国内的七叶皂苷钠注射剂、片剂等。伴随着国际国内市场对七叶皂苷类产品的需求不断增长，仅从娑罗子中获得七叶皂苷已不能满足生产需求，为推动七叶皂苷产业化发展，亟需寻找提高七叶皂苷产量的方法。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提出参与七叶皂苷a合成的酰基转移酶acbahd6及其编码基因及应用。本发明提供了七叶树中催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元的酰基转移酶或催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a的酰基转移酶编码基因acbahd6的筛选及功能鉴定方法，验证acbahd6具有催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元，以及催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a的功能，对阐明七叶皂苷的生物合成途径提供分子基础，同时具有重大的应用价值。

2、本发明的技术方案如下：

3、本发明提供了一种蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。

4、本发明还提供了所述蛋白的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。

5、将该基因命名为acbahd6，将其编码的蛋白命名为acbahd6。具体信息如下：acbahd6基因序列如序列表中序列1所示，序列1含有1239个核苷酸，其编码序列表中序列2所示的蛋白，序列2由412个氨基酸组成。

6、含有所述编码基因的表达盒、重组表达载体、转基因细胞系或重组菌也属于本发明的保护范围。扩增所述编码基因全长的引物对也属于本发明的保护范围，所述引物对中，一条引物序列如序列表中序列3所示，另一条引物序列如序列表中序列4所示。

7、所述的蛋白在作为酰基转移酶中的应用也属于本发明的保护范围。

8、所述酰基转移酶为催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元的酰基转移酶或催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a的酰基转移酶。

9、所述蛋白在催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元中应用也属于本发明的保护范围。

10、所述蛋白在催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a中的应用也属于本发明的保护范围。

11、所述编码基因在催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元中应用也属于本发明的保护范围。

12、所述编码基因在催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a中的应用也属于本发明的保护范围。

13、本发明基于七叶树基因组和转录组数据筛选获得acbahd6基因，通过构建pet28a-acbahd6原核表达载体并诱导表达，分别以原七叶皂苷元和去乙酰七叶皂苷a为底物在体外验证acbahd6的酰基化功能。结果证明acbahd6具有催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元，以及催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a的功能，为具有重要药用价值的七叶皂苷类成分的合成生物学研究奠定基础。

技术特征：

1.一种蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。

2.权利要求1所述蛋白的编码基因，其特征在于：所述编码基因的核苷酸序列如seq idno:1所示。

3.含有权利要求2所述编码基因的表达盒、重组表达载体、转基因细胞系或重组菌。

4.扩增权利要求2所述编码基因全长的引物对，所述引物对中，一条引物序列如seq idno:3所示，另一条引物序列如seq id no:4所示。

5.权利要求1所述的蛋白在作为酰基转移酶中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述酰基转移酶为催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元的酰基转移酶或催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a的酰基转移酶。

7.权利要求1所述的蛋白在催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元中应用。

8.权利要求1所述的蛋白在催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a中的应用。

9.权利要求2所述的编码基因在催化原七叶皂苷元生成22-o-乙酰原七叶皂苷元中应用。

10.权利要求2所述的编码基因在催化去乙酰七叶皂苷a生成七叶皂苷a中的应用。

技术总结
本发明公开了参与七叶皂苷A合成的酰基转移酶AcBAHD6及其编码基因及应用。所述酰基转移酶蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述酰基转移酶蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明基于七叶树基因组和转录组数据筛选获得AcBAHD6基因，通过构建pET28a‑AcBAHD6原核表达载体并诱导表达，分别以原七叶皂苷元和去乙酰七叶皂苷A为底物在体外验证AcBAHD6的酰基化功能。结果证明AcBAHD6具有催化原七叶皂苷元生成22‑O‑乙酰原七叶皂苷元，以及催化去乙酰七叶皂苷A生成七叶皂苷A的功能，为具有重要药用价值的七叶皂苷类成分的合成生物学研究奠定基础。

技术研发人员：高冉冉,万会花,解雪华,孙伟,徐志超,秦晨,米要磊,陈伟强,陈士林,尹青岗,王艺帆,孟祥霄,曹雪
受保护的技术使用者：中国中医科学院中药研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16