芸苔素内酯的纯化方法与流程

本发明涉及芸苔素内酯的纯化方法，更具体地，涉及去除芸苔素内酯中未知杂质的方法。

背景技术：

1、芸苔素内酯是多功能型植物生长调节剂，广泛存在于植物的花粉、种子、茎和叶等器官内，与早期发现的生长素、赤霉酸、细胞分裂素、脱落酸、乙烯利5种生长调节剂相比，因功能更加多样，不仅能促进生长，还能促进开花坐果，提高座果率、促进果实膨大，提高产量和品质，用量小而效果高，被称为第6类植物激素。

2、芸苔素内酯是高效、广谱的植物生长调节剂。目前我国登记使用的主要是24-表芸苔素内酯、24-表芸·三表芸苔素内酯(包含24-表芸苔素内酯和22,23,24-表芸苔素内酯两种成分，二者是同分异构体)、28-高芸苔素内酯、28-表高芸苔素内酯，结构分别如下：

3、

4、目前，通过人工合成得到的芸苔素内酯纯度低，难以满足要求，因此需要对其进行纯化。

技术实现思路

1、本申请发明人在合成芸苔素内酯时发现，化合物在液相色谱检测中存在多种未知杂质，通过两次以上结晶都未能有效去除这些杂质。

2、本发明旨在提供一种芸苔素内酯的纯化方法，通过该方法可以有效去除芸苔素内酯中包含的上述多种未知杂质，获得高纯度的芸苔素内酯。

3、具体地，本发明涉及：

4、(1)芸苔素内酯的纯化方法，该方法包括以下步骤：

5、(i)衍生：将芸苔素内酯和芳基硼酸溶于溶剂中进行反应，结晶过滤，得芸苔素内酯芳基硼酸酯化合物；

6、(ii)脱保护：将上述芸苔素内酯芳基硼酸酯化合物在碱性条件下通过双氧水氧化进行脱芳基硼酸，使芸苔素内酯芳基硼酸酯化合物变成游离的芸苔素内酯；

7、(iii)重结晶：脱保护后游离的芸苔素内酯使用溶剂进行重结晶，得到纯化后的芸苔素内酯。

8、(2)根据上述(1)所述的纯化方法，其特征在于，所述芸苔素内酯为所述芸苔素内酯为24-表芸苔素内酯、22,23,24-三表芸苔素内酯、24-表芸·三表芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯、28-表高芸苔素内酯中的一种或任意两种以上的混合物，优选为24-表芸苔素内酯、22,23,24-三表芸苔素内酯或24-表芸·三表芸苔素内酯。

9、(3)根据上述(2)所述的纯化方法，其特征在于，第(i)步中芳基硼酸为苯硼酸或者萘硼酸，优选为苯硼酸；更优选地，第(i)步中芳基硼酸加入量为芸苔素内酯的2.0摩尔当量以上，优选2.2-2.6摩尔当量。

10、(4)根据上述(1)至(3)中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(i)步中溶剂为甲醇、乙醇或者叔丁醇，优选甲醇。

11、(5)根据上述(1)至(4)中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(i)步中溶剂的加入量为芸苔素内酯的5-60质量倍，优选为10-20质量倍。

12、(6)根据上述(1)至(5)中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(ii)步中脱保护的溶剂为甲醇、乙醇或乙二醇，优选乙二醇。

13、(7)根据上述(1)至(6)中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(ii)步中脱保护的碱为碱金属碳酸盐或氢氧化钠，优选氢氧化钠。

14、(8)根据上述(7)所述的纯化方法，其特征在于，碱的质量浓度为1％-20％，优选5％。

15、(9)根据上述(1)至(8)中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(iii)步中重结晶乙醇和水的混合溶剂，优选乙醇和水的质量比约为1:1.4。

16、(10)根据上述(1)至(9)中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，纯化后的芸苔素内酯中未知杂质的纯度均小于0.1％。

技术特征：

1.芸苔素内酯的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述芸苔素内酯为为24-表芸苔素内酯、22,23,24-三表芸苔素内酯、24-表芸·三表芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯、28-表高芸苔素内酯中的一种或任意两种以上的混合物，优选为24-表芸苔素内酯、22,23,24-三表芸苔素内酯或24-表芸·三表芸苔素内酯。

3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，第(i)步中芳基硼酸为苯硼酸或者萘硼酸，优选为苯硼酸；更优选地，第(i)步中芳基硼酸加入量为芸苔素内酯的2.0摩尔当量以上，优选2.2-2.6摩尔当量。

4.根据权利要求1至3中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(i)步中溶剂为甲醇、乙醇或者叔丁醇，优选甲醇。

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(i)步中溶剂的加入量为芸苔素内酯的5-60质量倍，优选为10-20质量倍。

6.根据权利要求1至5中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(ii)步中脱保护的溶剂为甲醇、乙醇或乙二醇，优选乙二醇。

7.根据权利要求1至6中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(ii)步中脱保护的碱为碱金属碳酸盐或氢氧化钠，优选氢氧化钠。

8.根据权利要求7所述的纯化方法，其特征在于，碱的质量浓度为1％-20％，优选5％。

9.根据权利要求1至8中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，第(iii)步中重结晶溶剂为乙醇和水的混合溶剂，优选乙醇和水的质量比为1：1至1：2，更优选为1:1.4。

10.根据权利要求1至9中任意一项所述的纯化方法，其特征在于，纯化后的芸苔素内酯中未知杂质的纯度均小于0.1％。

技术总结
本发明涉及芸苔素内酯的纯化方法，包括以下步骤：(I)衍生：将芸苔素内酯和芳基硼酸溶于溶剂中进行反应，结晶过滤，得芸苔素内酯芳基硼酸酯化合物；(II)脱保护：将上述芸苔素内酯芳基硼酸酯化合物在碱性条件下通过双氧水氧化进行脱芳基硼酸，使芸苔素内酯芳基硼酸酯化合物变成游离的芸苔素内酯；(III)重结晶：脱保护后游离的芸苔素内酯使用乙醇水混合溶剂进行结晶，得到纯化后的芸苔素内酯。

技术研发人员：王石华,宋书琴,郭红永,张涛,荣德茂,鲍志存,郭庆春
受保护的技术使用者：兰升生物科技集团股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15