一种鱼腥草发酵液及其制备方法与应用与流程

本发明涉及微生物发酵，尤其涉及一种具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液及其制备方法与应用。

背景技术：

1、鱼腥草为三白草科植物蕺菜houttuynia cordatathunb的全草。鱼腥草味辛，性微寒，归肺经，具有清热解毒，消痈排脓，利尿通淋等功效。中药药理研究表明，鱼腥草具有抗病毒、提高机体免疫力、利尿等作用，并具有一定程度的抗辐射和抗癌防癌作用。鱼腥草的主要有效成分是挥发油和黄酮，其中以鱼腥草素、檞皮素含量最高。

2、目前对鱼腥草化妆品的原料开发大都用植物提取的手段进行，提取的原理都是通过机械外力破坏植物细胞壁，使有效成分溶解出来，此方法效率不高，还会造成活性分子因机械外力的作用使其结构被破坏，导致活性分子的溶出率较低。

3、现有技术中鱼腥草主要以提取的方式为主，利用生物发酵的方式研究内容较少；在化妆品方面的应用文献比较少，多以专利的形式呈现，且专利中以多种植物组合物的形式出现居多。现有技术中存在发酵过程较为工艺流程繁琐，需多次调配、多次发酵；耗时长且活性物未能充分提取出来。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液及其制备方法和应用。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

3、第一方面，本发明提供了一种紫红曲霉，所述紫红曲霉命名为紫红曲霉（monascusanka）mf02，所述紫红曲霉于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为cctcc no.m 2023750。

4、第二方面，本发明提供了一种具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液，所述具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液由紫红曲霉发酵制得，所述紫红曲霉的保藏编号为cctcc no.2023750。

5、第三方面，本发明提供了上述具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液的制备方法，所述具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液的制备方法包括以下步骤：

6、（1）将紫红曲霉二级种子液接种至含鱼腥草的发酵基质中，在25-30℃、100-150r/min下发酵24-72 h，得到发酵产物；所述紫红曲霉的保藏编号为cctcc no. m 2023750；

7、（2）对步骤（1）所得发酵产物进行灭菌、过滤，得到处理后的发酵液；

8、（3）将防腐剂加入至步骤（2）所得处理后的发酵液中，静置后过滤，得到具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液。

9、本发明通过紫红曲霉（保藏编号为cctcc no. m 2023750）在含鱼腥草的发酵基质中发酵得到鱼腥草发酵液，所得鱼腥草发酵液含有的活性成分槲皮素最高可达177.3ppm，远高于水提法或酶解法得到的鱼腥草提取液的槲皮素含量，说明通过本发明提取方法得到的鱼腥草发酵液所含活性成分更高。此外，本发明的鱼腥草发酵液具有优异的舒缓、修护、抗炎的效果，透明质酸钠抑制率高达92.6%，皮肤血红素变化率最低可达-20.75%，均优于水提液或酶解法得到的鱼腥草提取液。此外，本发明的鱼腥草发酵液还具有较好的马拉色菌抑制效果，抑菌圈平均直径最高可达12.92mm，与传统抗生素5wt%卡那霉素的效果相当。

10、在实验过程中，发明人发现当发酵条件为25-30℃、100-150 r/min和发酵时间为24-72 h时得到的鱼腥草发酵液具有更优异的舒缓、抗炎、修护和抗菌的效果。在发酵过程中设置一定的转速，可以使得发酵液的溶氧量增高，为紫红曲霉带来氧气，发酵过程为好氧发酵，使得紫红曲霉更好利用地含鱼腥草的发酵基质中的营养成分，提高发酵液的活性成分；发酵温度在25-30℃的范围内能够使紫红曲霉在最适温度下生长发育，使发酵液中的活性成分含量提高，从而提高鱼腥草发酵液的效果。

11、本发明通过对鱼腥草发酵产物进行过滤、加入防腐剂、以及二次过滤处理，得到的鱼腥草发酵液在不同温度环境下储存3个月，其外观和气味无显著变化，表明本发明的鱼腥草发酵液具有较好的稳定性，放置一段时间后的鱼腥草发酵液仍具有很好的舒缓、修护、抗炎和抗菌的功效。

12、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，包括（ⅰ）~（ⅱ）中的至少一种：

13、（ⅰ）步骤（1）中，所述含鱼腥草的发酵基质包括以下组分：鱼腥草粉、碳源、氮源、无机盐和水；

14、所述碳源为葡萄糖、蔗糖和麦芽糖中的至少一种；

15、所述氮源为大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏中的至少一种；

16、所述无机盐为硫酸盐和/或磷酸盐；

17、（ⅱ）步骤（1）中，所述紫红曲霉二级种子液和含鱼腥草的发酵基质的体积比为紫红曲霉二级种子液：含鱼腥草的发酵基质=（0.5-2）：100。

18、在优选参数条件下，本发明通过实验证明，含鱼腥草的发酵基质中的碳源、氮源和无机盐均需要在特定的种类范围下才能够实现较好的舒缓、修护、抗炎和抗菌的效果。在实验过程中发明人发现，以乳糖作为碳源得到的鱼腥草发酵液在舒缓、抗炎、修护和抗菌效果上均差于采用葡萄糖、蔗糖或麦芽糖作为碳源的鱼腥草发酵液。此外，发明人还发现，葡萄糖、蔗糖和麦芽糖中的至少一种作为碳源时，葡萄糖的效果最佳，蔗糖和麦芽糖次之；大豆蛋白胨、胰蛋白胨和酵母浸膏中的至少一种作为氮源时，大豆蛋白胨的效果最佳，胰蛋白胨和酵母浸膏次之，说明本发明的含鱼腥草的发酵基质碳源最优选为葡萄糖、氮源最优选为大豆蛋白胨、无机盐最优选为磷酸二氢钾。

19、在优选配比范围下，本发明得到的鱼腥草发酵液的舒缓、抗炎、修护和抗菌效果更佳，这是由于紫红曲霉二级种子液的接种量会对鱼腥草活性成分产生影响，实验发现紫红曲霉二级种子液的接种量为1v/v%，即紫红曲霉二级种子液：含鱼腥草的发酵基质=1:100（体积比）时，得到的鱼腥草发酵液效果最佳。

20、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，所述含鱼腥草的发酵基质包括以下质量份的组分：鱼腥草粉0.1-2.5份、碳源1-3份、氮源0.5-3份和无机盐0.1-1份，水补足至总质量份为100份。

21、在优选配比范围下，本发明鱼腥草发酵液的舒缓、抗炎、修护和抗菌效果更好。实验表明，本发明的含鱼腥草的发酵基质中的鱼腥草粉、碳源、氮源、无机盐的配比与发酵液的效果密切相关，并且发明人已证实当发酵基质中各质量份组分为鱼腥草粉1份、碳源2份、氮源1份、无机盐0.3份时，所得到的鱼腥草发酵液的效果最佳。

22、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，步骤（1）中，所述紫红曲霉二级种子液的制备方法包括以下步骤：

23、s1、挑取紫红曲霉mf02接种至麦芽汁液体培养基中，在20-30℃下培养1-4天，得到紫红曲霉一级种子液；

24、s2、将步骤s1所得的紫红曲霉一级种子液接种至麦芽汁液体培养基中，20-30℃下培养1-4天，得到紫红曲霉二级种子液；所述紫红曲霉一级种子液的接种量为0.5-5v/v%。

25、本发明选用紫红曲霉二级种子液作为接种菌液，是由于二级种子液的生长速度、发育状态一致，属于同步培养，能够最大程度地提高紫红曲霉利用含鱼腥草的发酵基质中的各个营养成分，使鱼腥草发酵液的活性成分含量提高。

26、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，包括（ⅲ）~（ⅴ）中的至少一种：

27、（ⅲ）步骤（2）中，所述灭菌的方法为：将发酵产物置于85-115℃的环境中保温15-30 min；

28、（ⅳ）步骤（3）中，所述静置为在20-35℃下静置5-10天；

29、（ⅴ）步骤（2）和步骤（3）中，所述过滤的方法为：采用硅藻土过滤器进行过滤。

30、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，步骤（3）中，所述防腐剂的体积占处理后的发酵液总体积的2-12%；所述防腐剂包括丁二醇、戊二醇和乙二醇中的至少一种。

31、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，所述防腐剂包括丁二醇、戊二醇和乙二醇；所述防腐剂中的丁二醇、戊二醇和乙二醇的体积百分比为丁二醇：戊二醇：乙二醇=（3-6）:（1-3）:1。

32、在优选配比范围下，本发明所述防腐剂中的丁二醇、戊二醇和乙二醇最优选的体积百分比为丁二醇：戊二醇：乙二醇=5:2:1。

33、第四方面，本发明提供了上述具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液在制备日化用品中的应用。

34、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

35、（1）本发明利用“植物内生真菌+药用植物”液态发酵，通过微生物的活动与代谢，以温和的方式生物转化鱼腥草原料，得到的发酵液活性物质含量高，具有较好的舒缓、修护、抗炎和抗菌的功效。

36、（2）本发明是以鱼腥草植株的内生真菌紫红曲霉mf02作为发酵菌种，对鱼腥草进行发酵，因该菌种从鱼腥草中分离得到，其与鱼腥草的匹配性更好，能更好地利用鱼腥草植物的活性物质，从而使得鱼腥草发酵液中生物活性成分含量高且稳定性好，本发明通过采用植物内生真菌发酵鱼腥草粉，对鱼腥草的发酵过程和发酵条件进行了详细的探索，确定了最佳的发酵工艺，得到具有舒缓、修护、抗炎和抗菌功效的鱼腥草发酵液。