绒山羊肌肉生长发育功能基因MSTN和IGFBP-3的分型应用

本发明涉及绒山羊肌肉生长发育功能基因，具体为绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用。

背景技术：

1、辽宁绒山羊，作为绒肉兼用的著名山羊品种，不仅产绒性能具有超高水平，其体型在众多山羊品种中也位居前列，以体型硕大著称，相对较大的骨架必将造成肌肉总产量的上升，所以辽宁绒山羊在产肉性能上也有显著优势。

2、在以往的研究过程中，科研人员主要集中在辽宁绒山羊的产绒性能上，对产肉和产奶性能的研究相对较少，中国羊肉消费水平位于世界前列，产肉性能是养殖者看重的关键特征，然而这受遗传和环境等因素控制。多年来，一些研究试图理解与肌肉生长相关的分子和遗传机制，通过序列比对和pcr-seq多态性检测辽宁绒山羊中mstn和igfbp-3基因的潜在单核苷酸多态性(snps)，并通过spss软件分析其对体尺性能的影响，从而提高家畜的产肉性能。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用，以解决上述背景技术中提出的通过序列比对和pcr-seq多态性检测辽宁绒山羊中mstn和igfbp-3基因的潜在单核苷酸多态性snps，并通过spss软件分析其对体尺性能的影响的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案，绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用，包括：

3、绒山羊血样采集：

4、所述提取dna的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有edta的采血管中，-20℃保存。

5、dna的提取：

6、所述dna提取使用ez-10旋转柱血液基因组dna纯化试剂盒，-20℃保存。

7、体尺性能数据：

8、体尺测量数据根据家畜育种实验方法测量。

9、引物设计：

10、所述根据mstn和igfbp-3序列设计引物，得到目的基因片段。

11、产物扩增：

12、所述按照对应程序进行产物扩增，所述扩增结束以后取pcr扩增产物通过在1％琼脂糖凝胶中使用溴化乙锭的电泳进行评估。

13、优选的，所述使用ezup柱式血液基因组dna抽提试剂盒提取绒山羊血液中的dna。

14、优选的，所述pcr反应结束后，选择一个清晰的、单一的目的片段，测序结果与nstn和igfbp-3基因序列进行比较，发现两个突变位点，在mstn基因中检测到1个snp，在igfbp-3基因中检测到1个snp。

15、优选的，所述snp序列分析检测到2个等位基因(u，u)和3个基因型，两种所述多肽在辽宁绒山羊群体中的基因频率和基因型频率存在显著差异，所述tt和cc基因型为优势等位基因。

16、优选的，所述两个位点的杂合度(he)相对适中，表明遗传变异可能更大，所述群体中的有效等位基因数(ne)也相对较低，表明当发生选择、突变或遗传漂变时，群体维持其等位基因的能力相对较差，所述χ2值小于1，p值大于0.5，属于非平衡状态，所述世代遗传中基因频率和基因型频率不稳定，人工选择强度高。

17、优选的，所述加入5ulmarker作为对照，所述电泳条件设置为120v，20min，所述电泳结束之后将胶板取出放在照胶仪器中观察目的条带，所述把清晰的条带进行拍照记录，随后将合格的产物送往上海生工单向测序，进行序列比对，snp图谱分析，突变位点碱基识别和基因型确定。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

19、利用snp对绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3进行基因分型，找到snp位点并对snp位点进行遗传多样性分析，而且与生产性能进行相关性分析，确定影响体尺性能的基因型及单倍型组合，有利于促进辽宁绒山羊的选育及改良，推动了绒用羊基因育种工作的进展，为培育更优质绒山羊提供理论支撑。

技术特征：

1.绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用，其特征在于：所述使用ezup柱式血液基因组dna抽提试剂盒提取绒山羊血液中的dna。

3.根据权利要求1所述的绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用，其特征在于：所述pcr反应结束后，选择一个清晰的、单一的目的片段，测序结果与nstn和igfbp-3基因序列进行比较，发现两个突变位点，在mstn基因中检测到1个snp，在igfbp-3基因中检测到1个snp。

4.根据权利要求3所述的绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用，其特征在于：所述snp序列分析检测到2个等位基因(u，u)和3个基因型，两种所述多肽在辽宁绒山羊群体中的基因频率和基因型频率存在显著差异，所述tt和cc基因型为优势等位基因。

5.根据权利要求4所述的绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3分型应用，其特征在于：所述两个位点的杂合度(he)相对适中，表明遗传变异可能更大，所述群体中的有效等位基因数(ne)也相对较低，表明当发生选择、突变或遗传漂变时，群体维持其等位基因的能力相对较差，所述χ2值小于1，p值大于0.5，属于非平衡状态，所述世代遗传中基因频率和基因型频率不稳定，人工选择强度高。

6.根据权利要求1所述的绒山羊肌肉生长发育功能基因mstn和igfbp-3的分型应用，其特征在于：所述加入5ulmarker作为对照，所述电泳条件设置为120v，20min，所述电泳结束之后将胶板取出放在照胶仪器中观察目的条带，所述把清晰的条带进行拍照记录，随后将合格的产物送往上海生工单向测序，进行序列比对，snp图谱分析，突变位点碱基识别和基因型确定。

技术总结
本发明涉及绒山羊肌肉生长发育功能基因技术领域，具体为绒山羊肌肉生长发育功能基因MSTN和IGFBP‑3的分型应用，包括：绒山羊血样采集：所述提取DNA的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有EDTA的采血管中，‑20℃保存。DNA的提取：所述DNA提取使用EZ‑10旋转柱血液基因组DNA纯化试剂盒，‑20℃保存。体尺性能数据：体尺测量数据根据家畜育种实验方法测量。本发明利用SNP对绒山羊肌肉生长发育功能基因MSTN和IGFBP‑3进行基因分型，找到SNP位点并对SNP位点进行遗传多样性分析，确定影响体尺性能的基因型及单倍型组合，有利于促进辽宁绒山羊的选育及改良，推动了绒用羊基因育种工作的进展，为培育更优质绒山羊提供理论支撑。

技术研发人员：王泽英,孙迎港,潘媛,孔令超,陈芮,吴彦智,乔艳军,李茜,汪小微,张秋,李帅彤,李思沂,刘一宁,刘庆坤,侯思冰,李嘉琪
受保护的技术使用者：沈阳农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16