一种猴痘病毒A29L蛋白单克隆抗体及其应用

本发明属于分子免疫学领域，更具体地，涉及一种猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、猴痘病毒(monkeypox virus，mpxv)亦称猴天花，是一种人畜共患的包膜双链dna病毒，属于痘病毒科的正痘病毒属。猴痘病毒发源于非洲热带雨林，其病毒大小为200-300nm，外周有30nm的外膜，内核为匀质的核心体，表现出卵球形或矩形砖状特征，可以独立复制。感染猴痘病毒后可引起类似于天花病的症状如水疱疹、全身症状如发烧、全身僵硬、头痛、肌肉疼痛和淋巴结肿大，虽这些症状通常是轻微的，但在免疫功能低下的人群中可能更为严重，由于其症状与天花病的症状类似，目前临床上难以准确区分猴痘和天花病的病例。

2、至今全球已有超过2.6万例猴痘病例，在80多个国家发现了这种病毒，2023年7月23日，世界卫生组织宣布猴痘为国际突发公共卫生事件。目前猴痘已经列入我国传染病控制管理体系中，其中对mpxv感染病例的诊断是疫情防控过程中的关键环节，如血清学诊断方法，即利用猴痘病毒特异性抗原检测猴痘血清抗体，但血清学诊断方法适合于疾病爆发的流行病学评估以及回顾性人群研究，可以回顾性地确定爆发的范围。

3、目前社会对于猴痘病毒治疗机制还处于研究阶段，而基于猴痘病毒关键靶点抗原抗体的免疫学检测试剂也在逐步研究推进中，如专利cn 115975012 a一种抗猴痘病毒a29l蛋白的单克隆抗体及其用途，该专利中抗体为单抗，其检测猴痘病毒时通常需纯化抗原，一般难以满足mpxv临床诊断的需求；专利cn 116239680 a猴痘病毒a29小鼠单克隆包被抗体及检测抗体，该专利中抗体包括包被抗体和检测抗体，可以用于制备含有这两种抗体的双抗检测试剂盒，但目前猴痘病毒检测试剂盒种类较少，且往往只针对一种动物，另外正痘病毒属还包括天花病毒、痘苗病毒和牛痘病毒，这些病毒在病毒形态、生命周期和结构上表现出高度的相似性，蛋白组之间的同源性达到92-95％。因此，寻找更多能有效识别猴痘病毒的抗体具有重要意义，尤其是能够配对的双抗抗体，利于准确、快速的筛查和诊断猴痘病例。

技术实现思路

1、针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体及其应用，其目的在于通过免疫原a29l蛋白刺激小鼠，结果在其体内发现两种高效价的抗体，且这两种抗体能够配对，通过该对抗体可变区基因克隆及测序，获得该对抗体对应重链和轻链互补决定区的氨基酸序列以及其重链和轻链的氨基酸序列，以此为基础制备猴痘病毒单克隆抗体并制备猴痘病毒检测试剂盒，由此解决现有猴痘病毒检测试剂盒种类较少，尤其是双抗检测试剂盒少的技术问题。

2、为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其包括抗体一号；

3、所述抗体一号，其重链cdr1包括seq id no:1所示的氨基酸序列或由其组成，重链cdr2包括seq id no:2所示的氨基酸序列或由其组成，重链cdr3包括seq id no:3所示的氨基酸序列或由其组成；

4、所述抗体一号，其轻链cdr1包括seq id no:4所示的氨基酸序列或由其组成，轻链cdr2包括seq id no:5所示的氨基酸序列或由其组成，轻链cdr3包括seq id no:6所示的氨基酸序列或由其组成。

5、优选地，所述猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其所述抗体一号，其重链可变区还包括以下氨基酸序列或由其序列组成：

6、包括如seq id no:7，8，9，10所示的氨基酸序列；

7、或者与seq id no:7，8，9，10所示的序列具有至少80％，85％，或90％序列同一性的序列，优选具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列；

8、或者与seq id no:7，8，9，10所示的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变的序列，优选具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的氨基酸序列。

9、优选地，所述猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其所述抗体一号，其轻链可变区还包括以下氨基酸序列或由其序列组成：

10、包括如seq id no:11，12，13，14所示的氨基酸序列；

11、或者与seq id no:11，12，13，14所示的序列具有至少80％，85％，或90％序列同一性的序列，优选具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列；

12、或者与seq id no:11，12，13，14所示的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变的序列，优选具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的氨基酸序列。

13、优选地，所述猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其所述抗体一号，其重链如seq idno:15所示的氨基酸序列，其轻链如seq id no:16所示的氨基酸序列。

14、按照本发明的另一方面还提供了一种猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其包括抗体二号；

15、所述抗体二号，其重链cdr1包括seq id no:17所示的氨基酸序列或由其组成，重链cdr2包括seq id no:18所示的氨基酸序列或由其组成，重链cdr3包括seq id no:19所示的氨基酸序列或由其组成；

16、所述抗体二号，其轻链cdr1包括seq id no:20所示的氨基酸序列或由其组成，轻链cdr2包括seq id no:21所示的氨基酸序列或由其组成，轻链cdr3包括seq id no:22所示的氨基酸序列或由其组成。

17、优选地，所述猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其所述抗体二号，其重链可变区还包括以下氨基酸序列或由其序列组成：

18、包括如seq id no:23，24，25，26所示的氨基酸序列；

19、或者与seq id no:23，24，25，26所示的序列具有至少80％，85％，或90％序列同一性的序列，优选具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列；

20、或者与seq id no:23，24，25，26所示的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变的序列，优选具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的氨基酸序列。

21、优选地，所述猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其所述抗体二号，其轻链可变区还包括以下氨基酸序列或由其序列组成：

22、包括如seq id no:27，28，29，30所示的氨基酸序列；

23、或者与seq id no:27，28，29，30所示的序列具有至少80％，85％，或90％序列同一性的序列，优选具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列；

24、或者与seq id no:27，28，29，30所示的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变的序列，优选具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的氨基酸序列。

25、优选地，所述猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，其所述抗体二号，其重链如seq idno:31所示的氨基酸序列，其轻链如seq id no:32所示的氨基酸序列。

26、按照本发明的另一方面，还提供了一种猴痘病毒检测试剂盒，其包括如本发明所述抗体一号和/或抗体二号。

27、优选地，所述猴痘病毒检测试剂盒，其所述检测试剂盒，包括抗体一号和抗体二号，其中抗体一号为包被抗体，抗体二号为标记抗体；或者抗体一号为标记抗体，抗体二号为包被抗体。

28、总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，由于本发明在免疫原a29l蛋白刺激小鼠后，其体内发现两种高效价的可以配对的抗体，通过抗体可变区基因测序和克隆获得猴痘病毒单克隆抗体，能够取得下列有益效果：

29、本发明提供的猴痘病毒a29l蛋白单克隆抗体，包括抗体一号和/或抗体二号，其中抗体一号，其重链cdr1、cdr2、cdr3分别包括seq id no:1所示的氨基酸序列或由其组成、seq id no:2所示的氨基酸序列或由其组成、seq id no:3所示的氨基酸序列或由其组成；其轻链cdr1、cdr2、cdr3分别包括seq id no:4所示的氨基酸序列或由其组成、seq id no:5所示的氨基酸序列或由其组成、seq id no:6所示的氨基酸序列或由其组成，单克隆抗体一号的效价为4.63×105，单克隆抗体二号的效价为4.85×105，能够用于制备猴痘病毒检测试剂盒。

30、另外，由于本发明提供的猴痘病毒的两种单克隆抗体可以配比，能够用于制备猴痘病毒双抗检测试剂盒。