用于抑制纤维粘连蛋白与LILRB4的结合的抗LILRB4抗体或其衍生物的制作方法

本发明涉及免疫检查点抑制剂、免疫检查点相关疾病的治疗剂、免疫抑制剂、抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、纤维粘连蛋白类似物、用于检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的试剂盒和检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的方法。本技术主张基于2019年8月13日在日本技术的特愿2019-148423号的优先权，并将其内容并入本文。

背景技术：

1、近年来，使用免疫检查点抑制剂的癌症免疫疗法受到关注。免疫检查点抑制剂是指与具有抑制对自身的免疫应答、抑制过度免疫反应的作用的免疫检查点分子或其配体结合，并通过抑制免疫抑制信号的传递而解除免疫检查点分子对t细胞的活化抑制的试剂。

2、本发明的发明人发现，通过使用作为对未知配体的免疫抑制性受体的lilrb4(白细胞ig样受体(leukocyte ig-like receptor)b4，以下也称为b4)，能够判定由感染或自身免疫引起的炎症性疾病(专利文献1)。

3、作为lilrb4的配体，最近报告了cd166、apoe、angptls等(非专利文献1-3)。然而，这些化合物是生理配体的证明还不够充分。

4、纤维粘连蛋白(fibronectin，以下也称为fn)是存在于细胞外基质(extracellular matrix，以下也称为ecm)、细胞表面上和体液中的约259kda的糖蛋白。纤维粘连蛋白通过作为蛋白水解酶的热溶素(thermolysin)处理分成6个区域(结构域)。这些区域基于它们各自的特异性分子结合能力被称为1.纤维蛋白-肝素结合域(fibrin/heparin binding-fn)、2.胶原蛋白结合域(collagen binding-fn)、3.肝素结合域(heparin binding-fn)、4.细胞/整合素结合域(cell/integrin-binding-domain(cbd)-fn)、5.第二肝素结合域(second heparin binding-fn)、6.第二纤维蛋白结合域(secondfibrin binding-fn)。像这样，fn由具有不同结合生理分子能力的多个结构域组成。迄今为止，在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，sle)、类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，ra)这样的部分自身免疫病中，除了观察到血浆中、体液(例如关节液)中的fn浓度的变动以外，也报告了使用单克隆抗体来评价fn的片段化(fragmentation)的结构域分析对于疾病的诊断或严重程度评价是有用的(非专利文献4-6)。特别地，fibrin/heparinbinding-fn浓度与健康人(61±18μg/ml)相比，sle为24±12μg/ml(p<0.003)，ra为36±22μg/ml(p<0.00002)，并且预期用于诊断。另外，报道了fn促进肺癌细胞株的转移能力和浸润能力(非专利文献7)。但是，在上述任意一篇文献中都没有报告fn是lilrb4的配体。

5、现有技术文件

6、专利文献

7、专利文献1：日本特开2018-25554号公报

8、非专利文献

9、非专利文献1：j immunol.2018feb1；200(3):1207-1219。

10、非专利文献2：blood.2014aug；124(6):924-935。

11、非专利文献3：nature.2018oct；562(7728):605-609。

12、非专利文献4：rheumatology(oxford).2007jul；46(7):1071-1075。

13、非专利文献5：j rheumatol.1987oct:14(5):1052-1054。

14、非专利文献6：rheumatol int.2013jan；33(1):37-43。

15、非专利文献7：br j cancer 2009jul 21；101(2):327-334。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供免疫检查点抑制剂、免疫检查点相关疾病的治疗剂、免疫抑制剂、抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、纤维粘连蛋白类似物、用于检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的试剂盒和检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的方法。

2、本发明的发明人发现lilrb4的生理配体是作为ecm的主要构成蛋白之一的纤维粘连蛋白，鉴定纤维粘连蛋白中的lilrb4的靶序列，发现抑制该靶序列与纤维粘连蛋白的结合的物质作为免疫检查点抑制剂、免疫检查点相关疾病的治疗剂和免疫抑制剂是有用的，从而完成了本发明。

3、本发明包括以下方式。

4、[1]一种免疫检查点抑制剂，其含有抑制纤维粘连蛋白与免疫抑制性受体lilrb4的结合的物质作为有效成分。

5、[2]根据[1]所述的免疫检查点抑制剂，其中，所述纤维粘连蛋白通过所述纤维粘连蛋白中的序列编号1所示的氨基酸序列与免疫抑制性受体lilrb4结合。

6、[3]根据[1]或[2]所述的免疫检查点抑制剂，其中，所述抑制纤维粘连蛋白与免疫抑制性受体lilrb4的结合的物质为抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、抗免疫抑制性受体lilrb4抗体或其衍生物、或者纤维粘连蛋白类似物。

7、[4]根据[3]所述的免疫检查点抑制剂，其中，所述抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物与纤维粘连蛋白中的序列编号1所示的氨基酸序列结合。

8、[5]根据[3]所述的免疫检查点抑制剂，其中，所述纤维粘连蛋白类似物为以下(a)-(c)中任意一种的肽，

9、(a)含有序列编号1所示的氨基酸序列的肽；

10、(b)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中缺失、插入、取代或添加了1至数个氨基酸的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽；

11、(c)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中具有80％以上同一性的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽。

12、[6]一种免疫检查点相关疾病的治疗剂，其含有抑制纤维粘连蛋白与免疫抑制性受体lilrb4的结合的物质作为有效成分。

13、[7]根据[6]所述的治疗剂，其中，所述纤维粘连蛋白通过所述纤维粘连蛋白中的序列编号1所示的氨基酸序列与免疫抑制性受体lilrb4结合。

14、[8]根据[6]或[7]所述的治疗剂，其中，所述抑制纤维粘连蛋白与免疫抑制性受体lilrb4的结合的物质为抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、抗免疫抑制性受体lilrb4抗体或其衍生物、或者纤维粘连蛋白类似物。

15、[9]根据[8]的治疗剂，其中，所述抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物与纤维粘连蛋白中的序列编号1所示的氨基酸序列结合。

16、[10]根据[8]所述的治疗剂，其中，所述纤维粘连蛋白类似物为以下(a)-(c)中任意一种的肽，

17、(a)含有序列编号1所示的氨基酸序列的肽；

18、(b)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中缺失、插入、取代或添加了1至数个氨基酸的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽；

19、(c)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中具有80％以上同一性的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽。

20、[11]根据[6]-[10]中任意一项所述的治疗剂，其中，所述免疫检查点相关疾病选自自身免疫病、癌症、炎症性疾病和过敏性疾病。

21、[12]根据[11]所述的治疗剂，其中，所述癌症由癌转移引起。

22、[13]一种免疫检查点相关疾病的治疗剂，其含有活化免疫抑制性受体lilrb4的物质作为有效成分。

23、[14]根据[13]所述的治疗剂，其中，所述活化免疫抑制性受体lilrb4的物质为抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、抗免疫抑制性受体lilrb4抗体或其衍生物、或者纤维粘连蛋白或纤维粘连蛋白类似物。

24、[15]根据[14]所述的治疗剂，其中，所述纤维粘连蛋白类似物为以下(a)-(c)中任意一种的肽，

25、(a)含有序列编号1所示的氨基酸序列的肽；

26、(b)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中缺失、插入、取代或添加了1至数个氨基酸的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽；

27、(c)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中具有80％以上同一性的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽。

28、[16]根据[13]-[15]中任意一项所述的治疗剂，其中，所述免疫检查点相关疾病为骨疾病。

29、[17]一种免疫抑制剂，其含有活化免疫抑制性受体lilrb4的物质作为有效成分。

30、[18]根据[17]所述的免疫抑制剂，其中，所述活化免疫抑制性受体lilrb4的物质为抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、抗免疫抑制性受体lilrb4抗体或其衍生物、或者纤维粘连蛋白或纤维粘连蛋白类似物。

31、[19]根据[18]所述的免疫抑制剂，其中，所述纤维粘连蛋白类似物为以下(a)-(c)中任意一种的肽，

32、(a)含有序列编号1所示的氨基酸序列的肽；

33、(b)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中缺失、插入、取代或添加了1至数个氨基酸的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽；

34、(c)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中具有80％以上同一性的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽。

35、[20]一种抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物，其与序列编号1所示的氨基酸序列结合。

36、[21]一种纤维粘连蛋白类似物，其由以下(a)-(c)中任意一种的肽与免疫球蛋白g的fc区融合而成。

37、(a)含有序列编号1所示的氨基酸序列的肽；

38、(b)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中缺失、插入、取代或添加了1至数个氨基酸的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽；

39、(c)含有在序列编号1所示的氨基酸序列中具有80％以上同一性的氨基酸序列、且对免疫抑制性受体lilrb4的纤维粘连蛋白结合位点具有结合能力的肽。

40、[22]一种试剂盒，其用于检测生物样品中包含的含有序列编号1所示的氨基酸序列的纤维粘连蛋白或其部分蛋白质，含有[20]所述的抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物。

41、[23]一种检测生物样品中的纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的方法，其使用[22]所述的试剂盒。

42、根据本发明，可以提供免疫检查点抑制剂、免疫检查点相关疾病的治疗剂、免疫抑制剂、抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、纤维粘连蛋白类似物、用于检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的试剂盒和检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的方法。