一种从微藻多次诱导采收甘油葡糖苷的方法

本发明涉及微藻养殖领域，更特别地，涉及一种从微藻多次诱导采收gg的方法。

背景技术：

1、螺旋藻等微藻在培养过程中如果进行高盐胁迫，细胞内可积累高含量的2-α构型甘油葡糖苷(gg)，该化合物可作为多功能的化妆品原料以及功能性保健品，具有很高的经济价值。

2、但是，常规使用液体培养方法需要首先对螺旋藻进行培养，培养到合适浓度后，加入高盐直接进行胁迫，使细胞合成gg。当细胞积累了gg之后，再次采收细胞，然后进行浸提操作。浸提完成后，通过离心或过滤等手段将藻细胞与浸提液进行分离。整个过程操作繁复，采收成本高。

3、我们通过将微藻贴壁后进行诱导和浸提，可方便地实现藻水分离，大大降低了藻水分离的难度和成本。如果一批微藻培养物只进行一轮诱导采收，即未能对微藻培养物进行充分利用。但是在我们实践过程中发现，如果用高盐培养基诱导，再用纯水浸提，一轮诱导采收后，下一轮中藻细胞积累的gg含量大幅降低。如果能够实现一批培养多诱导采收，即可大大降低藻种需求，节约采收接种时间，提高gg产能，因此需要探索新的诱导和浸提方法。

技术实现思路

1、为解决以上问题，本发明提供了一种从微藻多次诱导采收甘油葡糖苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2、s1：获得微藻培养物，使用高盐培养基诱导所述微藻培养物积累甘油葡糖苷；

3、s2：使用含有盐的浸提液对所述微藻培养物进行甘油葡糖苷浸提，所述含有盐的浸提液中的离子强度低于所述高盐培养基的离子强度。

4、在一个具体实施方案中，所述高盐培养基为基础培养基中加入300-1500mm氯化钠或相同离子强度的其他盐。除了氯化钠之外，还可以使用其他盐来提供离子强度，例如，可使用相同当量的碳酸钠、碳酸氢钠、氯化铵等无机盐，或乙酸钠等有机盐，或者这些盐中的一种或多种的组合。

5、在一个具体实施方案中，所述含有盐的浸提液中的离子强度不高于所述高盐培养基中加入的盐对应的离子强度减去200mm对应的离子强度。

6、在一个具体实施方案中，所述含有盐的浸提液中的离子强度不低于所述高盐培养基中加入的盐对应的离子强度减去700mm对应的离子强度，并且不低于100mm氯化钠对应的离子强度。

7、本发明通过提高浸提液的离子强度的方式，减小诱导培养基与浸提液之间的离子强度差，从而降低了gg诱导-浸提循环对微藻的伤害，使得能够进行至少5轮以上的gg诱导-浸提循环，尽管浸提的效率有所降低，但总gg产能仍然远高于一次胁迫的gg产能。并且，如果后续能够在此基础上解决浸提效率的问题，就可以爆发式地提高gg产能。

8、在一个具体实施方案中，s1中，对所述微藻培养物进行诱导培养1-3天。

9、在一个具体实施方案中，s2中，浸提时间为10-120min。

10、在一个具体实施方案中，所述微藻培养物为液体培养物或贴壁培养物。

11、在一个具体实施方案中，所述微藻的贴壁培养物的持藻介质为渗透性持藻介质。

12、通过将多轮诱导-浸提与贴壁培养组合，可大幅提高一个批次的微藻培养物的gg产能，并大幅降低操作成本，有利于利用螺旋藻等微藻进行gg的工业化生产。

13、本发明具体实施方案中虽然给出了螺旋藻进行举例说明，但是本领域技术人员应理解，所有可胞内积累甘油葡糖苷微藻均可通过本发明的方法进行甘油葡糖苷浸提。例如，螺旋藻、节旋藻、波斯枝藻、结线藻、颤藻、集胞藻、聚球藻、phorimidesmis sp.。

技术特征：

1.一种从微藻多次诱导采收甘油葡糖苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高盐培养基为基础培养基中加入300-1500mm氯化钠或相同离子强度的其他盐。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述含有盐的浸提液中的离子强度不高于所述高盐培养基中加入的盐对应的离子强度减去200mm对应的离子强度。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述含有盐的浸提液中的离子强度不低于所述高盐培养基中加入的盐对应的离子强度减去700mm对应的离子强度，并且不低于100mm氯化钠对应的离子强度。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s1中，对所述微藻培养物进行诱导培养1-3天。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s2中，浸提时间为10-120min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微藻培养物为液体培养物或贴壁培养物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述微藻的贴壁培养物的持藻介质为渗透性持藻介质。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述可胞内积累甘油葡糖苷的微藻选自螺旋藻、节旋藻、波斯枝藻、结线藻、颤藻、集胞藻、聚球藻、phorimidesmis sp.。

技术总结
本发明涉及一种从微藻多次诱导采收甘油葡糖苷的方法，包括以下步骤：获得微藻培养物，使用高盐培养基诱导所述微藻培养物积累甘油葡糖苷；使用含有盐的浸提液对所述微藻培养物进行甘油葡糖苷浸提，所述含有盐的浸提液中的离子强度低于所述高盐培养基的离子强度。本发明通过提高浸提液的离子强度的方式，减小诱导培养基与浸提液之间的离子强度差，从而降低了GG诱导‑浸提循环对微藻的伤害，使得能够进行至少5轮以上的GG诱导‑浸提循环，尽管浸提的效率有所降低，但总GG产能仍然远高于一次胁迫的GG产能。并且，如果后续能够在此基础上解决浸提效率的问题，就可以爆发式地提高GG产能。

技术研发人员：吕雪峰,刘天中,李璐,陈林,栾国栋
受保护的技术使用者：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15