Neuroligin-2蛋白敲低及其应用

本发明属于神经生物医药，尤其涉及一种neuroligin-2蛋白敲低及其应用。

背景技术：

1、神经元通过突触相互连接，形成复杂的神经网络。neuroligin-2蛋白是一种突触粘附蛋白，参与突触的形成和功能调节。该蛋白在神经元间的突触发育、突触可塑性和神经递质释放等方面发挥关键作用。因此，neuroligin-2蛋白的敲低可能会对神经系统功能产生显著影响，对一系列神经系统疾病的治疗和研究具有潜在价值。

2、现有技术在敲低neuroligin-2蛋白方面可能存在以下缺陷和急需解决的技术问题：

3、1.传统基因敲除技术的局限性：传统的基因敲除技术需要通过转基因方法来改变目标基因的dna序列，这种方法可能会导致不可逆的基因变异，且操作复杂，适用性有限。对于神经系统疾病研究，特别是涉及到活体动物模型的研究，需要一种更精准、可逆的敲低方法。

4、2.靶向性和特异性：对于neuroligin-2蛋白的敲低，需要确保所采用的方法具有高度的靶向性和特异性，只影响目标蛋白的表达，而不影响其他相关蛋白或神经元功能。

5、3.敲低效率和稳定性：敲低方法应该具有高效率和稳定性，能够在长期实验中持续地抑制neuroligin-2蛋白的表达，以确保对神经系统功能的影响能够得到可靠和持久的研究结果。

6、4.细胞类型特异性：在神经系统中，不同类型的神经元可能对neuroligin-2蛋白的敲低有不同的反应。因此，需要一种方法可以实现对特定类型神经元的选择性敲低。

7、5.实验操作简便性：为了提高实验的效率和可操作性，敲低方法应该是简单、快速的，可以广泛适用于不同的神经系统疾病研究。

8、解决这些问题的技术创新将有助于更深入地理解neuroligin-2蛋白在神经系统中的功能，为神经系统疾病的治疗和药物研发提供新的方向和手段。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的问题，本发明提供了neuroligin-2蛋白敲低及其应用。

2、本发明是这样实现的，neuroligin-2蛋白敲低，其特征在于，一种利用shrna序列构建病毒敲低neuroligin-2蛋白的方法，所述shrna序列为f:ggagctagtggaccaggatgt和r:cctcgatcacctggtcctaca。

3、进一步，利用shrna序列构建病毒敲低neuroligin-2蛋白的方法包括：

4、步骤一，构建表达载体；

5、步骤二，将构建的载体导入适合病毒复制的宿主细胞中；

6、步骤三，从感染的宿主细胞中纯化neuroligin-2蛋白敲低病毒；

7、步骤四，验证目标蛋白敲低效果。

8、进一步，步骤一表达载体的构建方法包括采用引物退火合成shrna序列；将合成的shrna序列克隆到慢病毒表达载体中。

9、进一步，步骤一中载体包括报告基因或标签。

10、进一步，步骤二通过适当的培养和扩增，确保病毒载体在宿主细胞中得到复制和扩散。

11、进一步，步骤三中病毒纯化方法包括离心、超滤和柱层析等步骤。

12、进一步，步骤四中将纯化的病毒样品用于感染目标细胞系，并通过western blot或定量pcr来验证目标蛋白的敲低效果。

13、本发明的另一目的在于提供一种neuroligin-2蛋白敲低在神经系统疾病治疗和药物研发的应用。

14、结合上述的技术方案和解决的技术问题，本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：

15、第一，本发明提供了一种构建病毒敲低蛋白的方法。通过利用特异性shrna序列，构建适当的载体，以及病毒复制和纯化步骤，本发明实现高效的目标蛋白敲低。

16、本发明的shrna序列具有高度特异性和有效性，能确保最佳的目标蛋白敲低效果。

17、本发明的技术方案转化后的预期收益和商业价值为：本发明敲低neuroligin-2蛋白对于神经系统疾病治疗和药物研发具有潜在的临床应用和商业价值。

18、第二，作为本发明的权利要求的创造性辅助证据，还体现在以下几个重要方面：

19、(1)每条权利要求带来的显著技术进步如下：

20、权利要求1这项技术进步使得研究人员可以通过病毒介导的方法高效、准确地降低neuroligin-2蛋白的表达水平。相比传统的基因敲除或药物抑制方法，病毒敲低可以更精准地调节目标蛋白的表达水平，同时减少对其他基因或蛋白的干扰。

21、权利要求2该技术进步提供了一个完整的实验流程，使得neuroligin-2蛋白敲低的过程更加规范化和高效化。研究人员可以按照这一流程进行实验，并在实验中验证敲低效果，确保实验结果的可靠性和可重复性。

22、权利要求3这项技术进步简化了表达载体的构建过程，提高了构建效率和成功率。引物退火合成方法可以准确地合成所需的shrna序列，而慢病毒表达载体作为有效的载体可以确保shrna的稳定表达和高效导入宿主细胞。

23、权利要求4该技术进步使得研究人员可以在实验中加入报告基因或标签，用于追踪病毒敲低的效果或检测目标蛋白的表达变化。报告基因或标签的引入可以提供更直观、可视化的数据，帮助研究人员更好地理解敲低效果。

24、权利要求5通过适当的培养和扩增，确保病毒载体在宿主细胞中得到复制和扩散。这项技术进步优化了病毒复制和扩散过程，保证了足够的病毒产量，从而确保敲低实验的成功进行。适当的培养和扩增条件可以提高病毒复制的效率，降低实验的失败率。

25、权利要求6这项技术进步改进了病毒纯化的方法，使得纯化过程更加高效、快速和准确。离心、超滤和柱层析等步骤可以有效地提取纯化目标病毒，去除无关成分，从而得到高质量的病毒样品。

26、权利要求7将纯化的病毒样品用于感染目标细胞系，并通过westernblot或定量pcr来验证目标蛋白的敲低效果。这项技术进步提供了一种有效的敲低效果验证方法。通过western blot或定量pcr可以准确地检测目标蛋白的表达水平，从而验证敲低的效果，并进一步分析敲低后对细胞的影响。

技术特征：

1.一种neuroligin-2蛋白敲低的方法，其特征在于，利用shrna序列构建病毒用于敲低neuroligin-2蛋白；

2.根据权利要求1的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2的方法，其特征在于，所述表达载体构建方法包括采用引物退火合成shrna序列，并将其克隆到慢病毒表达载体中。

4.根据权利要求2或3的方法，其特征在于，所述载体包括报告基因或标签。

5.根据权利要求2的方法，其特征在于，确保病毒载体在宿主细胞中得到复制和扩散的步骤通过适当的培养和扩增实现。

6.根据权利要求2的方法，其特征在于，病毒纯化方法包括离心、超滤和柱层析步骤。

7.根据权利要求2的方法，其特征在于，将纯化的病毒样品用于感染目标细胞系，并通过westernblot或定量pcr来验证目标蛋白的敲低效果。

8.一种敲低大脑皮层神经细胞中的neuroligin-2蛋白，其特征在于，包括：

9.一种neuroligin-2蛋白敲低在神经系统疾病治疗和药物研发的应用，其特征在于，利用权利要求1至7中的任一项方法进行neuroligin-2蛋白的敲低。

技术总结
本发明属于神经生物医药技术领域，公开了一种Neuroligin‑2蛋白敲低及其应用，包括利用特异性shRNA序列，即F:GGAGCTAGTGGACCAGGATGT和R:CCTCGATCACCTGGTCCTACA，构建适当的载体，以及病毒复制和纯化步骤，实现高效的目标蛋白敲低。通过神经元调节蛋白neuroligin‑2的敲低，我们有望开辟新的神经学研究领域，并为神经疾病的治疗提供创新的解决方案。

技术研发人员：刘伟柱,潘秉兴,张文华,刘甜,王志浩
受保护的技术使用者：南昌大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1