一株假小链双歧杆菌及其在改善自闭症谱系障碍中的应用的制作方法

本发明涉及生物医药，尤其涉及一株假小链双歧杆菌(bifidobacteriumpseudocatenulatum)及其在改善自闭症谱系障碍中的应用，上述菌株从临床粪菌移植(fecal microbiota transplantation，fmt)供体菌液中分离获得。

背景技术：

1、自闭症谱系障碍(autism spectrum disorder，asd)是一类以严重孤独、缺乏情感反应、语言发育障碍、刻板重复动作等反应为特征的发育障碍疾病。美国疾控中心2018年统计数据显示，自闭症发病率高达1/59。在中国自闭症逐渐呈高发趋势，发病率高达1％。研究发现肠道菌群失调与自闭症谱系障碍的发生发展具有相关性。

2、传统批准和推荐的asd治疗主要包括康复、教育治疗和心理药理学方法。现在与肠道菌群有关的益生菌疗法显示出了巨大的潜在效益，但由于益生菌治疗方案选择的多样性，目前仍处于临床探索阶段。

3、肠道微生物可以通过代谢、内分泌和神经系统影响脑发育和行为，他们之间的作用构成了微生物-肠-脑轴。而asd发生的时间点与肠道微生物发育的时间点相近，研究证实肠道微生物失衡是asd的风险因素。肠道微生物可以通过其代谢产物、免疫功能、神经内分泌调节、迷走神经等途径影响肠道细胞和肠神经系统以及中枢神经系统的发育及成熟，从而影响asd患者的行为症状。

4、益生菌也可以通过调节肠道菌群来降低和预防asd风险。有研究指出，由环境或遗传因素导致的母体微生态群落失调决定后代自闭症和其他神经发育障碍疾病的风险，通过食用益生菌或“粪便移植”等，可能会阻断自闭症病情发展，这也为防治自闭症提供了的可能途径，即通过改变饮食习惯或服用益生菌来维持肠道菌群平衡。

5、假小链双歧杆菌是革兰阳性厌氧菌，存在于健康成年人肠道内，是优势双歧杆菌，其已被证明具有改善免疫系统紊乱、改善糖脂代谢、调节机体免疫等的益生功能。但目前为止，尚缺乏确切的研究指出假小链双歧杆菌益生菌改善asd的可行性，且其特定作用机制也还未有透彻研究。

技术实现思路

1、为了克服现有技术中的至少一个问题，本发明提供一株分离自临床fmt供体菌液的假小链双歧杆菌分离株，该菌株对asd模型小鼠的探索行为和自发活动行为有显著促进作用，能改善asd小鼠的焦虑抑郁样表现和社交新颖性缺陷，可用于改善自闭症谱系障碍的研究和应用。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一个方面是提供一株假小链双歧杆菌f1-2cb2，其保藏编号为cctccno：m20231056，其分类命名为bifidobacterium pseudocatenulatum f1-2cb2，保藏日期为2023年06月19日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(简称cctcc)，保藏单位地址为中国.武汉.武汉大学。

4、进一步地，所述粪肠球菌f1gam5的16s rrna的序列如seq id no.1所示。

5、进一步地，所述粪肠球菌f1gam5的形态特征为：在哥伦比亚血平板培养呈较小、圆形、光滑、半透明白色菌落；经革兰染色后镜下呈紫色、典型双歧杆菌形态。

6、本发明的第二个方面是提供一种微生物菌剂，其包含本发明的第一个方面中任一所述的假小链双歧杆菌的菌体、芽胞、培养液中的至少一种。

7、进一步地，所述微生物菌剂为假小链双歧杆菌的冻干菌粉，所述冻干菌粉的制备包括步骤：将发酵所得菌液离心浓缩，与抗冻剂及赋形剂混合，预冻，冷冻干燥，磨细混匀。具体地，将发酵所得菌液4℃离心浓缩，与抗冻剂(甘露醇，10-100g/l)以及赋形剂(脱脂乳粉，50-200g/l)等混合后，-40℃预冻1-2小时，放入真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥15-25小时，磨细混匀。可理解的是，上述抗冻剂和赋形剂也可为本领域其他常规使用的试剂。

8、进一步地，所述冻干菌粉的活菌浓度为1×107～1×109cfu/g；具体地，可为：1×107～5×107cfu/g、5×107～1×108cfu/g、1×108～5×108cfu/g、5×108～1×109cfu/g等等；更优选更优选地，选取1×108～1×109cfu/g的冻干菌粉用于制备菌悬液。

9、进一步地，所述微生物菌剂可用于制备假小链双歧杆菌的菌悬液，所述菌悬液的制备包括步骤：将假小链双歧杆菌的冻干菌粉悬浮于pbs溶液中制备pbs菌悬液，所述pbs菌悬液中的活菌浓度为1×108～1×1010cfu/ml(例如108-109cfu/ml、109-1010cfu/ml等)。

10、本发明的第三个方面是提供一种如本发明第一个方面中任一所述的假小链双歧杆菌、或如本发明第二个方面中任一所述的微生物菌剂在制备用于改善自闭症谱系障碍的产品中的应用。可理解的是，上述改善自闭症谱系障碍包括预防和/或治疗自闭症谱系障碍疾病。

11、进一步地，所述产品可用于患有自闭症的哺乳动物，所述哺乳动物选自啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等。

12、进一步地，所述啮齿目动物优选鼠；所述灵长目动物优选为猴、猿或人。

13、进一步地，所述应用为制备用于促进asd患者探索行为和自发活动行为的产品。

14、进一步地，所述应用为制备用于改善asd患者焦虑抑郁样表现和/或改善asd患者社交新颖性缺陷的产品。

15、进一步地，所述产品包括食品、保健品或药物。

16、进一步地，所述产品的剂型包括固体、液体、凝胶、半流质、气雾或粉剂。

17、进一步地，所述药物中还包括药学上可接受的载体或辅料。

18、“药学上可接受的”是指当药物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。“药学上可接受的载体或辅料”应当与有效成分相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物的效果，上述载体或辅料均为本领域常规使用的物质，根据实际需要以用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。

19、进一步地，在一具体实施方式中，在上述应用中，给予asd小鼠假小链双歧杆菌f1-2cb2菌株灌胃处理；每次108-109cfu/ml(使用pbs悬浮菌液)，每两天灌胃一次，其中pbs悬浮菌液中活菌浓度为109-1010cfu/ml，每次灌胃量为0.1-0.2ml。

20、与现有技术相比，本发明采用上述技术方案具有以下有益效果：

21、现有技术中用于asd治疗研究的益生菌菌株主要为双歧杆菌属，但每个菌种具体的发挥作用尚未确定；本发明首次从临床粪菌移植(fecal microbiota transplantation，fmt)健康供体菌液中分离筛选出一株假小链双歧杆菌f1-2cb2，并在此基础上首次验证了假小链双歧杆菌在改善asd中的应用，上述菌株对asd小鼠的探索行为和自发活动行为有显著促进作用，能改善asd小鼠的焦虑抑郁样表现和社交新颖性缺陷，这为假小链双歧杆菌在改善asd的临床应用及作用机制上提供了研究方向。