结合补体成分C5或血清白蛋白的多肽及其融合蛋白的制作方法

背景技术：

1、补体成分5(c5)是补体的第五个成分，在炎症和细胞杀伤过程中起重要作用。活化肽c5a是具有有效的痉挛和趋化活性的过敏毒素，它是通过c5转化酶裂解而衍生自α多肽的。c5b大分子裂解产物可以与c6补体成分形成复合物，而该复合物是形成膜攻击复合物(mac)的基础，其中包括额外的补体成分。

2、c5调节不当会导致免疫功能受损的患者或以细胞过度降解为特征的疾病(例如，由c5介导的溶血引起的溶血性疾病)。

3、由于c5调节失调会导致严重的破坏性表型，因此需要具有良好药物特性(例如半衰期)的c5活性调节剂。

技术实现思路

1、本公开提供了特异性结合补体成分c5或血清白蛋白的工程化多肽，其中此类工程化多肽可以是sdab或ig可变结构域。在一些实施方案中，工程化多肽不显著降低或抑制血清白蛋白与fcrn的结合或不显著降低血清白蛋白的半衰期。本公开还提供了包含此类工程化多肽的融合蛋白，其中所述融合蛋白可以是多价和多特异性融合蛋白。本公开进一步提供了编码这样的工程化的多肽或融合蛋白的核酸分子，以及制备这样的工程化的多肽或融合蛋白的方法。本公开进一步提供了包含这样的工程化多肽或融合蛋白的药物组合物，以及使用这样的工程化多肽或融合蛋白的治疗方法。

2、在一个实施方案中，本公开涉及一种融合蛋白，其包含特异性结合人补体成分c5的工程化多肽和特异性结合人血清白蛋白的工程化多肽，其中特异性结合人补体成分c5的工程化多肽直接或通过肽接头与人血清白蛋白特异性结合的多肽融合。在一个特定的实施方案中，将特异性结合人血清白蛋白的多肽的c末端残基直接融合或通过接头与特异性结合人补体成分c5的多肽的n末端残基融合。在一个具体的实施方案中，将特异性结合人补体成分c5的多肽的c末端残基直接融合或通过接头与特异性结合人血清白蛋白的多肽的n末端残基融合。在一个特定的实施方案中，与人补体成分c5特异性结合的多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no:1-12及其片段组成的组；并且特异性结合人血清白蛋白的多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no:22-34及其片段组成的组。在一个特定的实施方案中，特异性结合人补体成分c5的多肽包含seq id no:11的氨基酸序列，并且特异性结合人血清白蛋白的多肽包含seq id no:26的氨基酸序列。在一个特定的实施方案中，本文所述的融合蛋白还包含具有氨基酸序列seq id no:102或103的肽接头。在一个特定的实施方案中，融合蛋白包含序列，所述序列是选自由seq id no:96-101组成的组中至少95％相同的序列。在一个特定的实施方案中，融合蛋白由选自由seq id no:96-101组成的组中的序列组成。在一个特定的实施方案中，融合蛋白由seq id no:96的多肽序列组成。在一个具体的实施方案中，特异性结合人补体成分c5的所述多肽包括三个互补决定区，cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1包含seq id no:13-17中的任何一个氨基酸序列，cdr2包含seq id no:18或19的氨基酸序列，并且cdr3包含seq id no:20或21的氨基酸序列。在一个特定的实施方案中，与人血清白蛋白特异性结合的多肽包含三个互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1包含seq id no:35-43中的任何一个氨基酸序列，cdr2包含seq id no:44-51中的任何一个氨基酸序列，并且cdr3包含seq id no:52-63中的任何一个氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗原结合结构域可以被工程化或进一步工程化以ph依赖性方式结合抗原，例如在高ph下对抗原的高亲和力和在较低ph下对抗原结合的低亲和力，反之亦然。

3、在一个实施方案中，本公开涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的本文所述的融合蛋白和药学上可接受的载体。在一个具体的实施方案中，药物组合物可以包含降解或灭活透明质酸的试剂，例如透明质酸酶或重组透明质酸酶。

4、在一个实施方案中，本公开涉及一种分离的核酸分子，其包含编码本文所述的融合蛋白的核苷酸序列。核酸分子可以是例如表达载体。本公开涉及包含或利用本文所述的编码融合蛋白的核酸的宿主细胞(例如，中国仓鼠卵巢(cho)细胞、hek293细胞、巴斯德毕赤酵母细胞(pichia pastoris cells)、哺乳动物细胞、酵母细胞、植物细胞)和表达系统。

5、在一个实施方案中，本发明涉及结合人补体成分c5的工程化多肽，其中该工程化多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no:1-12及其片段组成的组。在一个具体的实施方案中，所述工程化多肽包含序列，所述序列是选自由seq id no:1-12组成的组中至少90％(例如与90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％相同)相同的氨基酸序列。例如，在一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:1所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:2所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq idno:3所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:4所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:5所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:6所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:7所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:8所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:9所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:10所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:11所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seqid no:12所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。

6、在另一个实施方案中，提供了结合人补体成分c5的工程化多肽，其中该工程化多肽由选自由seq id no:1-12及其片段组成的组中的氨基酸序列组成。例如，在一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:1所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:2所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:3所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:4所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:5所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:6所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:7所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:8所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:9所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:10所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:11所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，工程化多肽由seq id no:12所示的氨基酸序列组成。

7、在一个实施方案中，本发明涉及一种特异性结合人血清白蛋白的工程化多肽，其中所述多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no:22-34及其片段组成的组。在一个特定的实施方案中，该工程化多肽包含与seq id no:22-34中的任一氨基酸序列至少90％相同(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％相同)的氨基酸序列。例如，在一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:22所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:23所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:24所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seqid no:25所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:26所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:27所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:28所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:29所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:30所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:31所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq idno:32所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:33所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，工程化多肽包含seq id no:34所示的氨基酸序列或与其至少90％相同的序列。

8、在另一个实施方案中，与人血清白蛋白特异性结合的工程化多肽由选自由seq idno:22-34及其片段组成的组中的氨基酸序列组成。例如，在一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:22所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seqid no:23所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:24所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:25所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:26所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:27所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:28所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:29所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:30所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:31所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seqid no:32所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:33所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，所述工程化多肽由seq id no:34所示的氨基酸序列组成。

9、在一个具体的实施方案中，与人血清白蛋白特异性结合的工程化多肽包含三个互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no:35-43组成的组，cdr2包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no:44-51组成的组，并且cdr3包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由seq id no:52-63组成的组。在一个特定的实施方案中，该多肽特异性结合到人血清白蛋白上与alb1相同的表位。

10、在一个实施方案中，本公开内容涉及一种用于制备本文所述的融合蛋白的方法，其包含在宿主细胞中表达至少一个核酸分子，所述核酸分子包含编码所述融合蛋白的核苷酸序列。

11、在一个实施方案中，本公开涉及一种治疗试剂盒，其包含：(a)包含标签的容器；(b)包含本文所述融合蛋白的组合物；其中所述标签指示所述组合物将被施用于患有补体介导的疾病或怀疑患有补体介导的疾病的患者。试剂盒可以任选地包含降解或灭活透明质酸的试剂，例如透明质酸酶或重组透明质酸酶。

12、在一个实施方案中，本公开内容涉及一种用于治疗患有补体介导的疾病的患者的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的本文所述的融合蛋白。在一个具体的实施方案中，补体介导的疾病选自：类风湿性关节炎；狼疮性肾炎；哮喘；缺血再灌注损伤；非典型溶血性尿毒症综合征；致密物沉积病(dense deposit disease)；阵发性夜间血红蛋白尿；黄斑变性；溶血、肝酶升高和血小板减少(hellp)综合征；格林巴雷综合征(guillain-barrésyndrome)；chaple综合征；重症肌无力；视神经脊髓炎；造血干细胞移植后血栓性微血管病(post-hsct-tma)；骨髓移植后血栓性微血管病(post-bmt tma)；德戈斯病(degosdisease)；高雪氏病(gaucher’s disease)；肾小球肾炎(glomerulonephritis)；血栓性血小板减少性紫癜(ttp)；自然流产；包西免疫性血管炎(pauci-immune vasculitis)；大疱性表皮松解症(epidermolysis bullosa)；反复胎儿流产(recurrent fetal loss)；多发性硬化症(ms)；创伤性脑损伤；以及因心肌梗塞、体外循环和血液透析引起的伤害。