一种与血蚶弧菌抗性相关联的分子标记的制作方法

本发明属于水产养殖遗传育种标记筛选，具体涉及一种与血蚶弧菌抗性相关联的分子标记。

背景技术：

1、血蚶，又名泥蚶(tegillarca granosa)，属于软体动物的瓣鳃类，它的介壳形状，作心脏形，两壳质厚而隆起，左右同形，表面有垄沟，如瓦屋棱，约有三四十条，均由壳嘴而散射。肉柱紫赤色，多血，味极鲜美。血蚶是价格很高的经济作物，对水质的要求相当高，现在许多地方都是筑塘引水养殖。

2、随着人口的增长和生活水平的提高，消费者对高品质、高保真、健康的海产品的需求不断增加。泥蚶肉质鲜美，因此深受人们的喜爱，其在国内市场上的销售情况良好尤其是在南方市场销售火爆，未来市场前景广阔。据统计，我国的泥蚶市场需求超过了40亿元，每年的消费量高达数千万吨。

3、浙江台州市三门县的海岸线曲折，港湾众多，滩涂广阔，是泥蚶生长繁殖的优良场所，其所出产的泥蚶由于肉脆微咸，汁多血红，味道鲜美而被命名为三门血蚶。三门血蚶的贝壳极坚硬，卵圆形，两壳相等，相当膨胀，壳表白色，被褐色壳皮，壳内面灰白色。蚶肉含多量蛋白质和维生素(b1、b2)，壳可入药，有消血块和化痰积的功效，三门血蚶蛋白质≥8.95g/100g；含16种氨基酸(总含量7.79％)；含10种脂肪酸，不饱和脂肪酸占36.45％；脂肪含量0.9％，维生素b1≥0.0158mg/100g，维生素b2≥0.0933mg/100g，含丰富的矿物质。与《中国食物成分表》(中国疾病预防控制中心营养与健康所编著)公布的其他产地血蚶相比，三门血蚶蛋白质含量高1.4％、氨基酸高2.78％，三门血蚶的营养价值更高、更健康。

4、泥蚶养殖的核心技术是如何控制其生长周期和养殖环境，以获取高品质、健康的泥蚶产品。近年来，随着科技水平的提升，泥蚶养殖技术也得到了很大的提高，不断地创新和发展。现今的泥蚶养殖已经实现了规模化和工业化生产，并且其产量和品质得到了大幅提升，满足了不同消费者的需求。但随着养殖年限的增加，养殖规模的扩大，一些病害也逐渐出现，对泥蚶养殖的健康发展造成了危害。

5、自2000年以来，养殖泥蚶的流行性疾病和大规模死亡时有发生,其中,弧菌性疾病最为常见,并且导致的死亡最为严重,已然成为制约泥蚶养殖产业健康发展的瓶颈问题之一。弧菌普遍分布于河口、海湾、近岸海域的海水和海洋动物体内其中主要致病菌有副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(vibrio harveyi)、鳗弧菌(vibrioanguillarum)、创伤弧菌(vibrio vulnificus)、溶藻弧菌(vibrio alginolyticus)等，但对关泥蚶感染哈维氏弧菌后,机体免疫响应的研究报道较少。

6、为了克服微生物病害对泥蚶养殖的影响，一方面是提供良好的饲养管理可以增强水产品的免疫力和抗病能力，例如合理的养殖密度和更适合的养殖环境。另一方面就是通过遗传选育方式来获得具有特定抗病性的个体进行育种，从而提高养殖品种对特定病源的抗逆性。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种与血蚶弧菌抗性相关联的分子标记，从而用于筛选具有抗弧菌特性的血蚶个体进行后续的遗传育种。

2、本发明首先提供一种与血蚶弧菌抗性相关联的分子标记，所述的分子标记为微卫星标记tmp12，其核苷酸序列如下：

3、ttcttgtaggtttgtccgctaaatctatgtcttttttcttgttctccttcctttcctttcttgcacgtctttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttctgctttttcttcttcttttttttcttcttcttcataaatatttgatt(seq id no:1)；

4、用于扩增上述微卫星标记tmp12的引物对，其一种引物对的序列信息如下：

5、上游引物：5′-ttcttgtaggtttgtccgct-3′(seq id no:2)、

6、下游引物：5′-aatcaaatatttatgaag-3′(seq id no:3)；

7、本发明再一个方面还提供所述的微卫星标记tmp12在筛选具有弧菌抗性泥蚶个体中的应用；

8、本发明再一个方面还提供另一种分子标记，所述的分子标记为微卫星标记tmp-hq-03，其核苷酸序列如下：

9、tctcagtccaatcaaatctgcatccaaattttgataaaagcttacattcaccttgtggtggctagctgctatatatcatcatttattattagattagattaagatagtgctttattccccagataatctttcacgagagagagagagagagagagagagagagagtatgtatgtttcatgagcatgagagggagagagatctaaag(seq id no:4)；

10、用于扩增上述微卫星标记tmp-hq-03的引物对，其一种引物对的序列信息如下：

11、上游引物：5′-tctcagtccaatcaaatctgc-3′(seq id no:5)、

12、下游引物：5′-ctttagatctctctccctc-3′(seq id no:6)。

13、本发明再一个方面还提供所述的微卫星标记tmp-hq-03在筛选具有弧菌抗性泥蚶个体中的应用；

14、本发明第三个方面还提供一种分子标记，所述的分子标记为微卫星标记tmp-yqw-21，其核苷酸序列如下：

15、cgaaacagtgataatttaacaaaattattaacctcattttaactaaaagaataaaaagtagtatccattttggtgatatatcgcacacacagacacacctgagagtaatgatgaagccctatgtagcgttatataaccattcattgatatatatatatatatatatatatatatacagtggaatctgtttaaactaaacaccttcagtactgaagaatttgttcagattagacaggtattcagtttagac(seq id no:7)；

16、用于扩增上述微卫星标记tmp-yqw-21的引物对，其一种引物对的序列信息如下：

17、上游引物：5′-cgaaacagtgataatttaac-3′(seq id no:8)、

18、下游引物：5′-gtctaaactgaatacctgtc-3′(seq id no:9)；

19、所述的微卫星标记tmp-yqw-21可用于筛选具有弧菌抗性的泥蚶个体；

20、本发明还提供一种筛选弧菌抗性泥蚶个体的方法，是通过检测待筛选个体中所述的微卫星标记的基因型，筛选具有特异性片段的泥蚶个体作为亲本；

21、所述的基因型，其中使用序列为seq id no:2和seq id no:3的引物对来扩增微卫星标记tmp12的扩增产物中包含有长度为171bp的扩增产物；微卫星标记tmp-hq-03使用序列为seq id no:5和seq id no:6的引物对扩增的微卫星标记tmp-hq-03的扩增产物中包含有长度为208bp的扩增产物；而tmp-yqw-21标记使用序列为seq id no:8和seq id no:9的引物对进行扩增的产物中包含有长度为250bp的扩增片段。

22、本发明所提供的与血蚶弧菌抗性相关联的分子标记可以用于筛选具有弧菌抗性的血蚶个体作为育种亲本，从而为泥蚶的遗传育种提供有效的分子标记。