心肌肌钙蛋白I特异性抗体、试剂盒和用途的制作方法

本发明属于分子免疫学领域。具体地，涉及一种特异性靶向心肌肌钙蛋白i的抗体，及包括该抗体的抗体对、试剂盒以及其用途。

背景技术：

1、肌钙蛋白(tn)是肌肉组织收缩的调节蛋白，位于收缩蛋白的细肌丝上，在肌肉收缩和舒张过程中起着重要的调节作用；肌钙蛋白含有3种亚型：快反应型、慢反应型和心肌肌钙蛋白(ctn)。前两者与骨骼肌相关，而心肌肌钙蛋白则仅存在于心肌细胞中，是由心肌肌钙蛋白t(ctnt)、心肌肌钙蛋白i(ctni)、肌钙蛋白c(tnc)三种亚单位组成的复合物。心肌肌钙蛋白在心肌细胞损伤时从心肌纤维上降解下来并释放到血液循环中。血液中ctn升高反映了心肌细胞受损。心肌肌钙蛋白i常用于检测心肌损伤，例如，心肌梗塞、冠状动脉硬化综合征、心肌炎、心包炎等。

2、cummins等开发了用于测量血清中心肌肌钙蛋白i的方法(cummins et al.,amheart journal 113:1333-1344(1987))。然而，在该方法中使用的多克隆抗体会对骨骼肌的肌钙蛋白i(stni)起明显的交叉反应。bodar等开发了测量心肌肌钙蛋白i的夹心elisa方法(bodar et al.,clinical chemistry 38:2203-2214(1992)；us 7285418)，但其准确性较低。

3、因此，存在对以高灵敏度和高准确性检测心肌肌钙蛋白i的需求，并且其不会与骨骼肌的肌钙蛋白i发生交叉反应。通过这样的免疫测试方法，以便治疗医师可以使用适当的治疗，从而为受其影响的患者提供可能的最佳预后。本发明满足了这些需求。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明公开了一种特异性靶向心肌肌钙蛋白i的抗体或其抗原结合片段，及相关的组合物、试剂以及方法。

2、第一方面，本发明提供一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合心肌肌钙蛋白i，包括重链和轻链，其中，重链包括重链可变区，轻链包括轻链可变区；

3、其中，

4、所述重链可变区包括：

5、a.cdr-h1，其包括如seq id no.1所示的序列；

6、b.cdr-h2，其包括如seq id no.2所示的序列；以及

7、c.cdr-h3，其包括如seq id no.3所示的序列；

8、所述轻链可变区包括：

9、a.cdr-l1，其包括如seq id no.4所示的序列；

10、b.cdr-l2，其包括如seq id no.5所示的序列；以及

11、c.cdr-l3，其包括如seq id no.6所示的序列。

12、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段，其中，

13、所述重链可变区包括：

14、如seq id no.1所示的cdr-h1、如seq id no.2所示的cdr-h2，

15、以及如seq id no.3所示的cdr-h3。

16、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段，其中，

17、所述轻链可变区包括：

18、如seq id no.4所示的cdr-l1、如seq id no.5所示的cdr-l2，

19、以及如seq id no.6所示的cdr-l3。

20、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段，其中，

21、所述抗体或其抗原结合片段的重链包括3个上述的重链cdr，即cdr-h1、cdr-h2，和cdr-h3。

22、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段，其中，

23、所述抗体或其抗原结合片段的轻链包括3个上述的轻链cdr，即cdr-l1、cdr-l2，和cdr-l3。

24、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段，其包括：

25、如seq id no.1所示的cdr-h1、如seq id no.2所示的cdr-h2，以及如seq id no.3所示的cdr-h3；和

26、如seq id no.4所示的cdr-l1、如seq id no.5所示的cdr-l2，以及如seq id no.6所示的cdr-l3。

27、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段具有小于20nm的kd值。例如，小于15nm、12nm、10nm、8nm、5nm、4nm、3nm、2nm、1nm、0.5nm的kd值。优选的，所述kd值通过生物膜干涉技术测得。

28、在一些具体的实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。

29、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括非-cdr区(non-cdrregion)。

30、在一些具体的实施方案中，所述非-cdr区(non-cdr region)可以与cdr区同源或者不同源。

31、在一些具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段选自fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体(例如，scfv)、人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。

32、又一方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包括编码如前所述的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。

33、在一些具体的实施方案中，所述核酸分子包括核酸分子a：

34、其编码如前所述的抗体或其抗原结合片段的重链，其中，所述重链包括cdr-h1、cdr-h2，和cdr-h3。

35、在一些具体的实施方案中，所述核酸分子包括核酸分子b：

36、其编码如前所述的抗体或其抗原结合片段的轻链，其中，所述轻链包括cdr-l1、cdr-l2，和cdr-l3。

37、在一些具体的实施方案中，所述核酸分子包括核酸分子c：

38、前述的核酸分子a，以及前述的核酸分子b；可选地，核酸分子c还包括连接序列，其用于连接核酸分子a和核酸分子b。

39、又一方面，本发明提供了一种载体，其包括上述的核酸分子。

40、在一些具体的实施方案中，所述载体包括上述核酸分子a、核酸分子b，或者核酸分子c。

41、又一方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包括上述的核酸分子，或者载体。

42、在一些具体的实施方案中，所述宿主细胞包括上述核酸分子a、核酸分子b、核酸分子c，或者上述载体。

43、又一方面，本发明提供了一种偶联物，其包括单克隆抗体或其抗原结合片段以及偶联部分，其中，所述单克隆抗体为本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述偶联部分为可检测的标记；优选地，所述偶联部分为放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。

44、又一方面，本发明提供了一种抗体对，包括捕获抗体和检测抗体，其中，所述捕获抗体和检测抗体靶向心肌肌钙蛋白i的不同表位，其中，捕获抗体和检测抗体中至少一个选自如上所述的抗体或其抗原结合片段，另一个选自已知抗体1、已知抗体2、已知抗体3，或已知抗体4。

45、所述已知抗体1为包括如seq id no.7～9所示的cdr-h1～3和seq id no.10～12所示的cdr-l1～3的抗体；

46、所述已知抗体2为包括如seq id no.13～15所示的cdr-h1～3和seq id no.16～18所示的cdr-l1～3的抗体；

47、所述已知抗体3为包括如seq id no.19～21所示的cdr-h1～3和seq id no.22～24所示的cdr-l1～3的抗体；

48、所述已知抗体4为包括如seq id no.25～27所示的cdr-h1～3和seq id no.28～30所示的cdr-l1～3的抗体。

49、捕获抗体和检测抗体可以互相交换，即某一抗体即可以作为检测抗体使用，也可以作为检测捕获抗体使用。

50、优选地，所述抗体对包括捕获抗体和检测抗体，所述捕获抗体为包括如seq idno.1所示的cdr-h1、如seq id no.2所示的cdr-h2，以及如seq id no.3所示的cdr-h3；和如seq id no.4所示的cdr-l1、如seq id no.5所示的cdr-l2，以及如seq id no.6所示的cdr-l3的抗体；所述检测抗体为已知抗体4。

51、又一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或者本发明的偶联物。

52、优选地，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别所述抗体或其抗原结合片段；可选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。

53、本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明所述的抗体对；可选地，所述检测抗体包括可检测的标记，例如放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。

54、又一方面，本发明提供了本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者本发明的抗体对或者本发明的偶联物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测心肌肌钙蛋白i在受试者样品中的存在或其水平。

55、在一个具体的实施方案中，本发明提供了本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者本发明的抗体对或者本发明的偶联物在制备辅助诊断心肌损伤的试剂盒中的用途。

56、在一些具体的实施方案中，心肌损伤是由心肌梗塞、冠状动脉硬化综合征、心肌炎、心包炎等引起的。

57、在一个具体的实施方案中，本发明提供了本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者本发明的偶联物在制备辅助诊断心肌梗塞的试剂盒中的用途。

58、又一方面，本发明提供了一种本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的生产方法，其包括在合适的条件下培养本发明的宿主细胞，以及从细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段的步骤。又一方面，本发明提供了一种抗体或其抗原结合片段，包括按照如上所述抗体或其抗原结合片段生产方法生产所获得的抗体或其抗原结合片段。

59、在一个具体的实施方案中，本发明提供一种抗体或其抗原结合片段，包括保藏号为vkpm h202的杂交瘤细胞分泌的抗体。

60、又一方面，本发明提供了一种辅助诊断心肌损伤的方法，包括对受试者样本使用本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的步骤。

61、本发明保藏情况如下所示：

62、新抗体1(na1)的杂交瘤，保藏号为vkpm-h202，于2023年09月14日保藏于俄罗斯国家工业微生物保藏中心。