一种脐带间充质干细胞的制备方法与流程

本发明属于细胞制备，涉及一种细胞制备方法，具体地说涉及一种可提高存活率的脐带间充质干细胞的制备方法。

背景技术：

1、脐带间充质干细胞是一种存在于新生儿脐带组织中的多功能干细胞，具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化，脐带干细胞还具有来源充足、易于获取、免疫原性低等多方面有点，在细胞治疗、组织工程学和再生医学以及药物和生物技术应用上有着巨大的应用前景。

2、为获取大量用于科研、临床的细胞，传统方法是采用人工体外细胞培养，主要通过手工操作，但是这种方法存在人员成本高、培养效率低、人为因素导致细胞的质量及稳定性难以保证的问题。

3、因此，随着生物科学的不断发展，全自动细胞制备系统应运而生，全自动细胞制备系统可以大规模地培养、生产细胞，但是这种制备系统在产量大的同时伴随着制备时间长的问题，导致脐带间充质干细胞的存活率低于传统的人工培养方式。

4、有鉴于此，有必要提供一种可提高全自动细胞制备系统制备的细胞活率的方法。

技术实现思路

1、为此，本发明所要解决的技术问题在于现有全自动细胞制备系统制备的脐带间充质干细胞的活率较低，从而提出一种可提高细胞活率的脐带间充质干细胞的制备方法。

2、为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

3、本发明提供一种脐带间充质干细胞的制备方法，其包括如下步骤：

4、s1、将收集的脐带间充质干细胞与缓冲溶液混合均匀后，加入保护剂，得到混合溶液；

5、s2、将所述混合溶液在200-400g的离心力下离心处理4-8min，得到第一次离心上清液和第一次细胞产物；

6、s3、将所述第一次离心上清液在100-300g的离心力下离心处理1-5min，得到第二次离心上清液和第二次细胞产物；

7、s4、收集所述第一次细胞产物与所述第二次细胞产物，取样计数。

8、作为优选，所述步骤s1中，所述混合溶液中，所述脐带间充质干细胞的浓度为1*106个/ml-3*106个/ml。

9、作为优选，所述保护剂为海藻糖，所述海藻糖的加入量为所述混合溶液的1-5％。

10、作为优选，所述步骤s2中，离心处理包括第一提速段和第一减速段，其中，所述第一提速段的加速度为50-100g/min，所述第一减速段的加速度为100-200g/min。

11、作为优选，所述步骤s3中，离心处理包括第二提速段和第二减速段，其中，所述第二提速段的加速度为50-100g/min，所述第二减速段的加速度为100-200g/min。

12、作为优选，所述步骤s1中，还包括通过全自动灌装系统吹打所述脐带间充质干细胞与缓冲溶液混合物的步骤。

13、作为优选，所述步骤s3中，所述上清液通过全自动灌装系统收集并转移。

14、作为优选，所述步骤s3中，还包括通过全自动上清收集系统收集所述第二次离心上清液的步骤。

15、作为优选，所述步骤s4中，还包括通过全自动细胞合管系统将收集的所述第一次细胞产物与所述第二次细胞产物混合的步骤。

16、作为优选，所述步骤s4中，通过全自动细胞取样计数系统对混合的第一次细胞产物、第二次细胞产物进行取样计数。

17、本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：

18、本发明提供的脐带间充质干细胞的制备方法，包括：s1、将脐带间充质干细胞与缓冲溶液混合均匀后，加入保护剂，得到混合溶液；s2、将混合溶液在200-400g的离心力下离心处理4-8min，得到第一次离心上清液和第一次细胞产物；s3、将第一次离心上清液在100-300g的离心力下离心处理1-5min，得到第二次离心上清液和第二次细胞产物；s4、收集所述第一次细胞产物与所述第二次细胞产物，取样计数。该制备方法无需化学试剂，采用物理方法，通过两次不同参数的离心处理步骤对脐带间充质干细胞进行分离提纯，并采用保护剂降低离心力对细胞的损伤，从而显著提高了细胞存活率，解决了现有技术中间充质干细胞制备方法中细胞活率低的问题。

技术特征：

1.一种脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，所述混合溶液中，所述脐带间充质干细胞的浓度为1*106个/ml-3*106个/ml。

3.根据权利要求1或2所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述保护剂为海藻糖，所述海藻糖的加入量为所述混合溶液的1-5％。

4.根据权利要求3所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中，离心处理包括第一提速段和第一减速段，其中，所述第一提速段的加速度为50-100g/min，所述第一减速段的加速度为100-200g/min。

5.根据权利要求4所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s3中，离心处理包括第二提速段和第二减速段，其中，所述第二提速段的加速度为50-100g/min，所述第二减速段的加速度为100-200g/min。

6.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，还包括通过全自动灌装系统吹打所述脐带间充质干细胞与缓冲溶液混合物的步骤。

7.根据权利要求6所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述上清液通过全自动灌装系统收集并转移。

8.根据权利要求7所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s3中，还包括通过全自动上清收集系统收集所述第二次离心上清液的步骤。

9.根据权利要求8所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s4中，还包括通过全自动细胞合管系统将收集的所述第一次细胞产物与所述第二次细胞产物混合的步骤。

10.根据权利要求9所述的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤s4中，通过全自动细胞取样计数系统对混合的第一次细胞产物、第二次细胞产物进行取样计数。

技术总结
本发明公开了一种脐带间充质干细胞的制备方法，包括：S1、将脐带间充质干细胞与缓冲溶液混合均匀后，加入保护剂，得到混合溶液；S2、将混合溶液在200‑400g的离心力下离心处理4‑8min，得到第一次离心上清液和第一次细胞产物；S3、将第一次离心上清液在100‑300g的离心力下离心处理1‑5min，得到第二次离心上清液和第二次细胞产物；S4、收集所述第一次细胞产物与所述第二次细胞产物，取样计数。该制备方法无需化学试剂，采用物理方法，通过两次不同参数的离心处理步骤对脐带间充质干细胞进行分离提纯，并采用保护剂降低离心力对细胞的损伤，从而显著提高了细胞存活率，解决了现有技术中间充质干细胞制备方法中细胞活率低的问题。

技术研发人员：董奇政,张芬,王清芳,钟桂强
受保护的技术使用者：深圳市北科生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22