七肽化合物及其组合物和用途的制作方法

本发明涉及多肽，特别是一种七肽化合物及其组合物，以及它们的用途。

背景技术：

1、皮肤作为人体最大最易显露于环境中的器官，担负着机体保护、感觉、调节体温、分泌、排泄和免疫诸多方面的作用。随着时间的推移，受内外各种因素的影响，皮肤的结构和功能开始出现不可逆的变化过程，如皮肤松弛和产生皱纹、色素沉着、皮肤粗糙干裂、皮肤变薄、角质屏障功能减弱、皮肤红肿、瘙痒等各类不适症状。

2、透明质酸（ha）是存在于皮肤当中的一种天然分子，也是皮肤屏障的重要组成成分，其不仅在人体细胞间质和细胞外基质中丰富表达，而且对维持皮肤形态、结构和功能具有重要作用。根据聚合度和分子量大小的不同，透明质酸可分为高分子透明质酸、中等分子透明质酸、低分子透明质酸和超低分子透明质酸。其中，高分子透明质酸能在皮肤表层形成一层透气膜，锁住水分和长久保湿；中等分子透明质酸具有较好的保湿、润滑、缓释和乳化作用；低分子透明质酸可以达到真皮层，抑制炎症因子释放并清除氧自由基，修复损伤细胞和加速组织愈合；超低分子透明质酸可透皮吸收，具有保湿、修复、增加皮肤弹性等深层护肤功效。

3、皮肤中的透明质酸主要由皮肤真皮层的成纤维细胞和表皮层的角质形成细胞合成，其中真皮层的含量远远大于表皮层。表皮层透明质酸参与皮肤屏障形成和角质层细胞脱落；真皮层透明质酸与其他细胞外基质如胶原蛋白、弹性蛋白等纤维状蛋白质相互作用，共同形成含大量水分的细胞外胶状基质，参与调控细胞间代谢物质交换、水平衡、渗透压以及调节离子流动。当皮肤内透明质酸代谢障碍或遭受外界环境刺激时，皮肤内透明质酸含量减少，导致皮肤屏障破坏、皮肤内水分流失、胶原蛋白和弹性蛋白排列紊乱、产生皱纹等，进而加速皮肤老化。此外，透明质酸酶能够分解体内的透明质酸，使其变成低分子量的酸性刺激源，从而引起组胺释放，诱导机体产生敏感症状。

4、综上所述，透明质酸在皮肤补水保湿、抗敏舒缓、抗衰修护方面发挥着重要的作用。透明质酸原料在化妆品行业得到广泛地应用，然而现有的透明质酸原料价格昂贵、提取时分离过程复杂、提取率低，限制了其在化妆品中的大量使用。多肽类化合物具有多种生理活性、易吸收、安全无毒、作用显著等优势，近年来被逐渐应用到美容化妆品中。因此，采用结构设计手段，研究一种能够调节透明质酸含量的多肽类活性物质，用以解决上述衰老、敏感等一系列皮肤问题，具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种七肽化合物，这些化合物及含有这些化合物的组合物，具有保湿、舒缓、抗衰、修护等作用，可以广泛应用于化妆品等领域。

2、鉴于此，本发明提供一种式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐，

3、r1-arg-arg-tyr-gly-gly-thr-asp-r2（i）

4、式（i）中，

5、r1选自：h或r3-co-，其中r3选自：取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的烯基；

6、r2选自：-nr4r5或-or4，其中各个r4和r5彼此独立地选自：h、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的烯基；

7、所述烷基是指具有1-24个碳原子（可选具有1-16个碳原子；可选具有1-14个碳原子；可选具有1-12个碳原子；可选具有1、2、3、4、5、或6个的碳原子）的饱和脂肪族直链或支链的烷基；可选选自：甲基、乙基、异丙基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、2-乙基己基、2-甲基丁基、或5-甲基己基；

8、所述烯基是指具有2-24个碳原子（可选具有2-16个碳原子；可选具有2-14个碳原子；可选具有2-12个碳原子；可选具有2、3、4、5、或6个碳原子）的直链或支链烯基；所述烯基具有一个或多个碳-碳双键，可选具有1、2或3个共轭或非共轭的碳-碳双键；所述烯基是通过一个单键而结合至分子的其余部分；可选选自：乙烯基、油烯基、或亚油烯基；

9、可选地，所述“取代的烷基”、“取代的烯基”中的取代基选自c1-c4烷基；羟基；c1-c4烷氧基；氨基；c1-c4氨基烷基；c1-c4羰氧基；c1-c4氧基羰基；卤素（如氟、氯、溴、以及碘）；氰基；硝基；叠氮化物；c1-c4烷基磺酰基；硫醇；c1-c4烷硫基；c6-c30芳氧基如苯氧基；-nrb(c=nrb)nrbrc，其中rb和rc是独立地选自：h、c1-c4烷基、c2-c4烯基、c2-c4炔基、c3-c10环烷基、c6-c18芳基、c7-c17芳烷基、具有三至十元的杂环基、或氨基的保护基。

10、可选地，r1选自：h、乙酰基、叔-丁酰基、己酰基、2-甲基己酰基、辛酰基、癸酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基或亚油酰基；r4、r5彼此独立地选自：h、甲基、乙基、己基、十二烷基或十六烷基；

11、可选地，r1选自h、乙酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基或棕榈酰基；r4是h并且r5选自：h、甲基、乙基、己基、十二烷基或十六烷基；

12、可选地，r1是h或乙酰基；r2是-oh或-nh2。

13、可选地，式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐，选自下列化合物（1）-（4）：

14、（1）h-arg-arg-tyr-gly-gly-thr-asp-oh；

15、（2）h-arg-arg-tyr-gly-gly-thr-asp-nh2；

16、（3）ac-arg-arg-tyr-gly-gly-thr-asp-oh；

17、（4）ac-arg-arg-tyr-gly-gly-thr-asp-nh2。

18、可选地，式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐，选自化合物（4）：

19、（4）ac-arg-arg-tyr-gly-gly-thr-asp-nh2。

20、本发明的式（i）所示的化合物可以作为立体异构体或立体异构体的混合物存在；例如，其所包含的这些氨基酸可以具有l-、d-的构型、或彼此独立地是外消旋的。因此，有可能获得同分异构混合物以及外消旋混合物或非对映混合物、或纯的非对映异构体或对映异构体，这取决于不对称碳的数量和存在什么同分异构体或同分异构混合物。本发明的式（i）所示的化合物的优选的结构是纯的同分异构体，即，对映异构体或非对映异构体。天然存在的l-异构体可以是优选的。

21、本发明还包括式（i）所示的化合物的所有合适的同位素变体。本发明的这些化合物的同位素变体此处理解为是指这样的化合物：其中在本发明的化合物内至少一个原子被替换为相同原子序数的另一个原子，但所述另一原子的原子质量不同于自然界中通常或主要存在的原子质量。可掺入本发明的化合物中的同位素的实例是：氢、碳、氮或氧的那些，例如2h(氘)、3h(氚)、13c、14c、14n、15n、17o或18o。本发明的化合物的特定的同位素变体（特别是其中已经掺入一种或多种放射性同位素的那些）可能有利于，例如检查在体内的作用机理或活性化合物的分布；由于相对简单的可制备性和可检测性，尤其是用3h或14c同位素标记的化合物适用于该目的。另外，由于化合物的更强的代谢稳定性，同位素（例如氘）的掺入可以产生特定的治疗益处，例如体内半衰期的延长或所需活性剂量的降低；因此，在某些情况下，本发明的化合物的这种改性还可构成本发明的优选实施方案。通过本领域技术人员已知的方法，例如通过在下文中进一步描述的方法和在实施例中所述的方法，通过使用各自的试剂和/或起始物质的相应的同位素改性物，可制备本发明的化合物的同位素变体。

22、术语“盐”指被认可的在动物，并且更确切地说在人类中使用的一种盐，包括式（i）所示的化合物的金属盐，所述金属包括，但不局限于：锂、钠、钾、钙、镁、锰、铜、锌或铝等；包括式（i）所示的化合物与有机碱形成的盐，所述有机碱包括，但不局限于：乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸或哌嗪等；包括式（i）所示的化合物与无机酸或有机酸形成的盐，所述有机酸包括，但不局限于：乙酸、柠檬酸、乳酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、延胡索酸、苯甲酸、天冬氨酸、谷氨酸、琥珀酸、油酸、三氟乙酸、草酸、扑酸（pamoate）或葡萄糖酸等；所述无机酸包括，但不局限于：盐酸、硫酸、硼酸或碳酸。

23、本发明式（i）所示的化合物或其盐的合成可以根据现有技术中已知的常规方法来进行，例如固相合成法、液相合成法或固相与液相结合的方法，还可以通过以产生所希望的序列为目标的生物技术方法、或通过具有动物、真菌、或植物来源的蛋白质的控制水解来制备。

24、例如，一种获得式（i）所示的化合物的方法包括以下步骤：

25、-将具有受保护的n-末端和自由的c-末端的氨基酸与具有自由的n-末端和受保护的或与固体载体结合的c-末端的氨基酸偶联；

26、-消除保护n-末端的基团；

27、-重复该偶联顺序和消除保护n-末端的基团，直到获得所希望的化合物序列；

28、-消除保护c-末端的基团或从该固体载体裂解。

29、优选地，c-末端与一种固体载体结合并且该方法是在固相上进行，包括将具有受保护的n-末端和自由的c-末端的氨基酸与具有自由的n-末端和与一种聚合物载体结合的c-末端的氨基酸偶联；消除保护n-末端的基团；并且重复此顺序所需要的次数以便因此获得具有所希望的长度的肽类化合物，接着从最初的聚合物载体裂解所合成的肽类化合物。

30、在整个合成中这些氨基酸的侧链的官能团用临时或永久的保护基团保持充分地保护，并且可以与从该聚合物载体裂解肽类化合物的过程同时地或正交地脱保护。

31、可选地，固相合成可以通过将二肽或三肽偶联到聚合物支持体上或偶联到先前与聚合物支持体结合的二肽或氨基酸上的汇集策略（convergent strategy）来进行。

32、使用本领域已知的标准条件和方法对n-末端和c-末端脱保护和/或以非确定的次序从聚合物支持体裂解化合物，随后可以修饰所述末端的官能团。可以对与聚合物支持体结合的式（i）的化合物进行n-末端和c-末端的任选的修饰，或在化合物已从聚合物支持体裂解后进行n-末端和c-末端的任选的修饰。

33、本发明的另一方面，提供一种组合物，包括有效量的上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐，以及至少一种赋形剂和任选的佐剂。

34、可选地，所述佐剂选自：镇痛剂、抑制par-2活性的剂、胶原合成刺激剂、调节pgc-1α合成的剂、调节pparγ的活性的剂、增加或减少脂肪细胞的甘油三酸酯含量的剂、刺激或延迟脂肪细胞分化的剂、脂解剂或刺激脂肪分解的剂、溶脂剂、生脂剂、乙酰胆碱受体聚集的抑制剂、抑制肌肉收缩的剂、抗胆碱能试剂、弹性蛋白酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、黑色素合成刺激或抑制剂、增白剂或脱色剂、促色素沉着剂、自晒黑剂、抗老化剂、no-合酶抑制剂、5α-还原酶抑制剂、赖氨酰羟化酶和/或脯氨酰羟化酶的抑制剂、抗氧化剂、自由基清除剂和/或抗大气污染的剂、活性羰基类物质清除剂、抗糖化剂、抗组胺剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂、乳化剂、润肤剂、有机溶剂、液体推进剂、皮肤调理剂、保留水分的物质、α羟基酸、β羟基酸、增湿剂、表皮水解酶、维生素、氨基酸、蛋白质、色素、染料、生物聚合物、胶凝聚合物、增稠剂、表面活性剂、软化剂、粘合剂、防腐剂、抗皱剂、能够减少或治疗下眼袋的剂、角质层分离剂、抗微生物剂、抗真菌剂、抑真菌剂、灭菌剂、抑菌剂、刺激真皮或表皮大分子的合成和/或能够抑制或预防它们的降解的剂、刺激弹性蛋白合成的剂、刺激核心蛋白聚糖合成的剂、刺激层粘连蛋白合成的剂、刺激防御素合成的剂、刺激伴侣蛋白合成的剂、刺激camp合成的剂、刺激hsp70合成的剂、刺激热休克蛋白合成的剂、刺激透明质酸合成的剂、刺激纤连蛋白合成的剂、刺激去乙酰化酶合成的剂、刺激脂质和角质层组分的合成的剂、神经酰胺、脂肪酸、抑制胶原降解的剂、抑制弹性蛋白降解的剂、抑制丝氨酸蛋白酶的剂、刺激成纤维细胞增殖的剂、刺激角质形成细胞增殖的剂、刺激脂肪细胞增殖的剂、刺激黑色素细胞增殖的剂、刺激角质形成细胞分化的剂、抑制乙酰胆碱酯酶的剂、皮肤松弛剂、刺激糖胺聚糖合成的剂、抗角化过度剂、粉刺溶解剂、抗银屑病剂、抗湿疹剂、dna修复剂、dna防护剂、稳定剂、止痒剂、用于治疗和/或护理敏感性皮肤的剂、固化剂、紧致剂、重构剂、抗拉伸纹剂、调节皮脂产生的剂、止汗剂、刺激愈合的剂、协助愈合的剂、刺激再上皮化的剂、协助再上皮化的剂、细胞因子、镇静剂、抗炎剂、麻醉剂、作用于毛细血管循环和/或微循环的剂、刺激血管生成的剂、抑制血管渗透性的剂、静脉紧张剂、作用于细胞代谢的剂、用于改善真皮-表皮接合的剂、诱导毛发生长的剂、毛发生长抑制或延缓剂、香料、螯合剂、植物提取物、精油、海洋提取物、得自生物发酵过程的剂、无机盐、细胞提取物、防晒剂、以及有效抗a和/或b紫外线的有机或无机光防护剂或其混合物。

35、本发明的化合物根据它们的序列的性质或n-末端和/或c-末端中的任何可能的修饰，在水中具有可变的溶解度。因此本发明的化合物可以通过水溶液掺入组合物中，且不溶于水的那些可溶解于常规溶剂中，所述溶剂例如并且不限于乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、甘油、丁二醇或聚乙二醇或其任何组合。

36、待施用的有效量的本发明的化合物以及它们的剂量将依赖于许多因素，包括年龄、使用者的状态、状况的严重性、施用的途径和频率以及待使用的化合物的具体性质。

37、“有效量”意指无毒性的但足以提供希望的效果的本发明的一种或多种化合物的量。在本发明的组合物中以获得希望的效果的有效的浓度使用本发明的化合物；在一个优选形式中，相对于组合物的总重量，在0.00000001%（按重量计）和20%（按重量计）之间，优选在0.000001%（按重量计）和15%（按重量计）之间、更优选在0.0001%（按重量计）和10%（按重量计）之间，并且甚至更优选在0.0001%（按重量计）和5%（按重量计）之间。

38、本发明的另一方面，提供一种递送系统或缓释系统，以便实现有效成分的更好渗透，其包含有效量的上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物。

39、术语“递送系统”是指与本发明的化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体，它们选自：水、油或表面活性剂、包括石油来源、动物来源、植物来源、或合成来源的那些，例如并且不限于花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯、醚硫酸酯、硫酸酯、甜菜碱、葡萄糖苷、麦芽糖苷、脂肪醇、壬苯醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯、聚乙二醇、右旋糖、甘油、毛地黄皂苷和类似物。本领域的普通技术人员已知在可以给予本发明的化合物的不同递送系统中可以使用的稀释剂。

40、术语“缓释”以常规含义使用，指提供化合物在一段时间内逐渐释放的化合物的递送系统，且优选地但不是必须地，在整个时间段内具有相对恒定的化合物释放水平。

41、递送系统或缓释系统的实例包括，但不局限于：脂质体、油质体、醇质体、毫米胶囊、微米胶囊、纳米胶囊、纳米结构的脂质载体、海绵状物、包合物、类脂囊泡、胶束、毫米球、微米球、纳米球、脂质球、微米乳液、纳米乳液、毫米粒子、微米粒子或纳米粒子。

42、本发明的另一方面，提供一种化妆品，包含有效量的上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统。

43、可选地，所述化妆品的剂型包括膏霜、乳液、凝胶、粉剂、片剂、膜剂、气雾剂或喷雾剂。

44、本发明的另一方面，提供一种上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备化妆品中的用途。

45、本发明的另一方面，提供一种上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于护理或治疗皮肤或粘膜的组合物中的用途。

46、本发明的另一方面，提供一种上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备保湿组合物中的用途。

47、本发明的另一方面，提供一种上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备舒缓组合物中的用途。

48、本发明的另一方面，提供一种上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备抗衰组合物中的用途。

49、本发明的另一方面，提供一种上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于修护皮肤或黏膜的组合物中的用途。

50、本发明的另一方面，提供一种上述式（i）所示的化合物、或其立体异构体、或其立体异构体的混合物、或其盐、或上述的组合物、或上述的递送系统或缓释系统在制备用于提高细胞活性和/或促进细胞增殖的组合物中的用途，或在制备用于促进皮肤或粘膜的再上皮化或愈合的组合物中的用途，或在制备用于修护皮肤屏障的组合物中的用途，或在制备用于增加透明质酸含量的组合物中的用途，或在制备用于抑制透明质酸酶活性的组合物中的用途，或在制备用于降低基质金属蛋白酶含量的组合物中的用途，或在制备用于增加皮肤弹性和/或提高皮肤紧致度的组合物中的用途。

51、在本发明中，术语“皮肤”应理解为是构成它的多个层，从最上层或角质层至最下层或皮下组织，两个端点都包括在内。这些层由不同类型的细胞组成，如角质形成细胞、成纤维细胞、黑色素细胞、和/或脂肪细胞等。在本发明中，术语“皮肤”包括头皮。

52、在本说明书中，用于氨基酸的缩写遵循iupac-iub生化命名委员会（iupac-iubcommission of biochemical nomenclature）在欧洲生物化学杂志（eur. j. biochem.1984, 138: 9-37）中所指定的规则。

53、因此，例如，gly表示nh2-ch2-cooh，gly-表示nh2-ch2-co-，-gly表示-nh-ch2-cooh，并且-gly-表示-nh-ch2-co-。因此，表示肽键的连字符消除了当位于该符号的右侧时的氨基酸（在此用常规非离子化形式来表示）1-羧基中的oh，并且消除了当位于该符号的左侧时的氨基酸2-氨基中的h；两种修饰可以应用于同一个符号（见表1）。

54、表1 氨基酸残基的结构以及它们的单字母和三字母缩写符号

55、

56、缩写“ac-”在本发明中用来表示乙酰基（ch3-co-）；gly：甘氨酸；arg：精氨酸；tyr：酪氨酸；thr：苏氨酸；asp：天冬氨酸。

57、本发明具有以下优点和效果：

58、1、本发明的化合物通过人工设计得到，合成方便，安全性高，对人体无刺激，具有保湿、舒缓、抗衰、修护等作用。

59、2、本发明的化合物能够提高细胞活性、促进细胞增殖、促进皮肤或粘膜的再上皮化或愈合、修护皮肤屏障、增加透明质酸含量、抑制透明质酸酶活性、降低基质金属蛋白酶含量、增加皮肤弹性、提高皮肤紧致度，可以广泛应用于化妆品等领域。