本发明属于生物工程，具体涉及一种taq dna聚合酶抗体及其在taq dna聚合酶制备中的应用。
背景技术：
1、dna聚合酶包括常温酶和pcr酶，而pcr酶广泛应用于生物研究及分子诊断中，作为pcr酶代表的taq dna聚合酶意义非凡。taq dna聚合酶是第一个被发现的热稳定dna聚合酶，最初由saiki等从温泉中分离的一株水生噬热杆菌(thermus aquaticus)中提取获得。
2、生产厂家的taq dna聚合酶制备基本上是通过将taq dna聚合酶重组至带有his标签的原核表达载体中，诱导其在大肠杆菌中表达再经过镍柱等纯化方法制备而成。对于重组蛋白来说，为了纯化一般会加入纯化标签，其中his最常见，虽说标签越小对蛋白活性影响越小，但对酶这种活性要求较高的重组蛋白无标签的天然状态显然是最好的；此外镍柱纯化过程中，难免出现金属离子脱落，而taq dna聚合酶会偶联金属离子，不仅可能导致酶活降低，还可能出现重组酶聚集现象。
3、随着分子生物学及近年来分子诊断产业的迅猛发展，pcr酶也不断进化，具有不同功能的突变株也不断涌现，但是重组酶类纯化方法大同小异。好的纯化方法可以极大降低酶类杂质的含量，较大地提高重组酶的纯度和活性。
4、本发明公开了一种taq dna聚合酶抗体及其制备的taq亲和柱，能特异性吸附taqdna聚合酶，两步即可获得高纯度高活性的taq dna聚合酶，同时还缩短了生产周期节约了人力成本，对重组taq dna聚合酶生产化具有重要意义。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本发明通过杂交瘤制备技术筛选得到了21株杂交瘤细胞，通过层层筛选获得了一株能偶联到亲和树脂上并特异性结合taq聚合酶的抗体，该抗体由杂交瘤细胞株f10-4h9产生。所述单克隆抗体制备的亲和柱纯化得到的taq dna聚合酶纯度达99％以上，能达到预期检测要求，性能优于进口taq dna聚合酶。
2、本发明所采取的技术方案是：
3、本发明的第一方面，提供一种taq dna聚合酶单克隆抗体，其特征在于，所述taqdna聚合酶单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区；
4、所述轻链可变区包含cdr1、cdr2、cdr3；
5、所述轻链可变区cdr1的氨基酸序列为：
6、a)seq id no.1；或
7、b)seq id no.1所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
8、所述轻链可变区cdr2的氨基酸序列为：
9、a)seq id no.2；或
10、b)seq id no.2所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
11、所述轻链可变区cdr3的氨基酸序列为：
12、a)seq id no.3；或
13、b)seq id no.3所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
14、所述重链可变区包含cdr1、cdr2、cdr3；
15、所述重链可变区cdr1的氨基酸序列为：
16、a)seq id no.4；或
17、b)seq id no.4所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
18、所述重链可变区cdr2的氨基酸序列为：
19、a)seq id no.5；或
20、b)seq id no.5所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
21、所述重链可变区cdr3的氨基酸序列为：
22、a)ik；或
23、b)a)所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列。
24、优选地，所述轻链可变区的氨基酸序列为：
25、a)seq id no.6；或
26、b)seq id no.6所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
27、所述重链可变区的氨基酸序列为：
28、a)seq id no.7；或
29、b)seq id no.7所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列。
30、优选地，所述单克隆抗体由保藏编号为cctcc no:c2023206的杂交瘤细胞株f10-4h9产生。
31、本发明的第二方面，提供一种核酸分子，所述核酸分子包括本发明第一方面所述的单克隆抗体的编码基因。
32、优选地，所述编码本发明第一方面所述轻链可变区的核苷酸序列为：
33、a)如seq id no.8所示的核苷酸序列；或
34、b)将seq id no.8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加，且与seqid no.8所示的核酸分子编码相同蛋白的核苷酸序列。
35、所述编码本发明第一方面所述重链可变区的核苷酸序列为：
36、a)如seq id no.9所示的核苷酸序列；或
37、b)将seq id no.9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加，且与seqid no.9所示的核酸分子编码相同蛋白的核苷酸序列。
38、本发明的第三方面，提供一种载体，所述载体包含本发明第二方面所述的核酸分子。
39、本发明的第四方面，提供一种细胞，所述细胞包含本发明第三所述的载体。
40、优选地，所述细胞不包含动植物品种。
41、本发明的第五方面，提供本发明第一方面所述单克隆抗体或本发明第二方面所述核酸分子或本发明第三方面所述载体或本发明第四方面所述细胞在制备taq dna聚合酶或生产制备taq dna聚合酶的产品中的应用。
42、本发明的第六方面，提供一种产品，所述产品包含本发明第一方面所述单克隆抗体或本发明第二方面所述核酸分子或本发明第三方面所述载体或本发明第四方面所述细胞。
43、优选地，所述产品还包括亲和柱。
44、优选地，所述亲和柱的填料包括亲和树脂，但并不局限于此，常用的能与蛋白质、抗体结合的填料均可达到同样的效果。
45、优选地，所述亲和树脂包括溴化氢活化的琼脂糖填料。
46、优选地，所述单克隆抗体和填料的比例为15～25mg(抗体)/ml填料。
47、优选地，所述产品还包括分离纯化taq dna聚合酶所需要的常规试剂。
48、本发明的第七方面，提供一种制备taq dna聚合酶的方法，包括使用本发明第六方面所述的产品制备taq dna聚合酶。
49、优选地，所述方法包括：将所述单克隆抗体与亲和柱中的亲和树脂偶联，用于纯化taq dna聚合酶。
50、本发明的有益效果是：
51、本发明提供了一种taq dna聚合酶单克隆抗体，其可特异性结合taq dna聚合酶并在其制备的亲和柱纯化过程中提高taq dna聚合酶的纯度及活性，用该方法制备得到的taqdna聚合酶对临床样本的扩增效率有明显的提高，而且极大简化了taq dna聚合酶制备过程，有效地缩短了实验周期且较大地节约了生产成本；制备所得的taq dna聚合酶可广泛应用于荧光定量pcr检测等分子诊断领域中。