特异性结合IL-15的抗体及其应用的制作方法

本发明涉及抗体，尤其涉及特异性结合il-15的抗体及其应用。

背景技术：

1、白细胞介素-15（il-15）是一种广泛表达的促炎细胞因子，属于4-螺旋束细胞因子家族，它主要由骨髓细胞表达，在其他细胞类型中也有表达。il-15在结构和功能方面与il-2相关。作为一种可溶性细胞因子，il-15具有多种功能，包括刺激活化的t细胞增殖、控制t细胞反应、调节组织修复和b细胞归巢、产生细胞毒性效应t细胞以及激活和维持nk细胞、调节炎症等，在nk细胞、t细胞和b细胞的复制和分化中均具有重要作用。由于il-15的广泛表达以及严格调控的分泌、反式呈递和治疗潜力，其在细胞因子中的作用是独一无二的。近年来，il-15因具有诱导和维持t细胞反应的治疗潜力而被广泛研究。此外，il-15还可以通过抗体或突变il-15疗法靶向以减少炎症，其多方面的生物学应用在免疫治疗中至关重要。

2、car-t又称嵌合抗原受体t细胞疗法，它是将人的t细胞经过基因工程手段体外修饰改造后，回输患者体内，通过car与靶细胞表面抗原的特异性结合，t细胞能够精准识别并杀死靶细胞，达到治疗肿瘤的目的。car-t细胞疗法在血液瘤治疗领域的优异效果令其成为近年全球发展最为迅速的细胞疗法之一。

3、基于il-15的功能，在细胞治疗领域中的细胞培养过程中，通常会添加il-15促进细胞的增殖。这使得，对于il-15的残留检测成为细胞制品质量控制中关键环节。目前il-15的定量检测试剂普遍存在批间差异较大、检测方法不稳定且受不同基质干扰的问题。

4、因此，开发特异性结合il-15的抗体、试剂盒和检测方法对于保证细胞制品的质量以及确保在t细胞、自然杀伤细胞（nk）细胞、b细胞和嵌合抗原受体（car-t）细胞的增殖和分化中实现工作流程可预测的性能具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明提供特异性结合il-15的抗体及其应用。

2、具体地，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供il-15的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段为以下（1）-（2）中的任意一种：

4、（1）重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：1、2、3所示；轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：4、5、6所示；

5、（2）重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：7、8、9所示；轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：10、11、12所示。

6、优选地，所述抗体或其抗原结合片段为以下（1）-（2）中的任意一种：

7、（1）重链可变区的氨基酸序列如seq id no：13所示；轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：14所示；

8、（2）重链可变区的氨基酸序列如seq id no：15所示；轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：16所示。

9、优选地，所述抗体或其抗原结合片段选自单克隆抗体、fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体、动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异抗体或多特异抗体。

10、在本发明的一些实施方式中提供克隆号为12b11e5的抗体，其重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：1、2、3所示；轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：4、5、6所示；重链可变区的氨基酸序列如seq id no：13所示；轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：14所示。

11、在本发明的一些实施方式中提供克隆号为9b5g1的抗体，其重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：7、8、9所示；轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：10、11、12所示；重链可变区的氨基酸序列如seq id no：15所示；轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：16所示。

12、本发明提供的上述il-15的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合il-15，与其它白细胞介素等细胞因子无交叉反应，且对il-15具有较高的亲和力。

13、本发明提供编码以上所述的il-15的抗体或其抗原结合片段的核酸分子。

14、根据上述抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列，本领域技术人员可获得编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列。由于密码子的简并性，编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列不唯一，所有能够编码产生上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子均在本发明的保护范围内。

15、本发明还提供含有所述核酸分子的生物材料；所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。

16、上述表达盒可通过在所述核酸分子的上游连接启动子等转录或翻译调控元件和/或在其下游连接终止子等转录或翻译调控元件得到。

17、上述载体包括但不限于质粒载体、噬菌体载体、病毒载体、人工染色体载体等。

18、上述宿主细胞包括微生物细胞、昆虫细胞或其它动物细胞。

19、本发明提供一种抗体偶联物，其为将所述il-15的抗体或其抗原结合片段与标记物偶联得到，所述标记物选自酶标记、生物素标记、荧光染料标记、化学发光染料标记、放射性标记中的一种或多种。

20、本发明提供il-15的抗体组合物，所述抗体组合物包含以下（1）-（2）中的抗体：

21、（1）重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：1、2、3所示；轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：4、5、6所示；

22、（2）重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：7、8、9所示；轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no：10、11、12所示。

23、以上（1）-（2）中的抗体结合不同的抗原空间表位。

24、上述抗体组合物可用于作为双抗体夹心elisa（酶联免疫吸附试验）法检测il-15的配对抗体，抗体组合物中的两个抗体分别作为双抗体夹心elisa法中的捕获抗体和检测抗体。其中，检测抗体还可携带可检测的标记。

25、本发明提供一种检测试剂盒，其包含以上所述的il-15的抗体或其抗原结合片段，或包含所述抗体偶联物，或包含所述il-15的抗体组合物。

26、上述试剂盒可作为il-15的检测试剂盒。

27、在本发明的一些实施方式中，所述检测试剂盒为双抗体夹心elisa检测试剂盒。

28、基于本发明的抗体或其抗原结合片段或抗体偶联物或抗体组合物，通过双抗体夹心elisa法可特异性检测培养基、血清、血浆、细胞制品等样品中il-15的含量，具有较高的灵敏度和特异性。

29、上述试剂盒中，所述抗体或其抗原结合片段还可包括可检测的标记；所述试剂盒还可包括携带可检测的标记的第二抗体以检测所述抗体或其抗原结合片段。

30、为便于检测，所述试剂盒还可包含用于elisa检测的其他试剂，这些试剂包括但不限于il-15标准品、pbst洗液、封闭液、显色液、终止液等。

31、基于本发明的抗体或其抗原结合片段的功能，本发明提供所述il-15的抗体或其抗原结合片段或所述核酸分子或所述生物材料或所述抗体偶联物或所述抗体组合物或所述检测试剂盒的如下任一种应用：

32、（1）在非疾病诊断目的的检测il-15在样品中的存在或其水平中的应用；

33、（2）在制备用于检测il-15在样品中的存在或其水平的产品中的应用；

34、（3）在细胞制品中il-15的残留检测中的应用；

35、（4）在细胞制品生产中的应用；

36、（5）在细胞制品质量控制中的应用；

37、（6）在制备靶向il-15的药物中的应用。

38、上述（1）中，所述应用包括利用所述抗体或其抗原结合片段或所述抗体偶联物或所述抗体组合物或所述检测试剂盒检测il-15在样品中的存在或其水平。在非疾病诊断目的的检测中，所述样品可为体外培养得到的细胞培养液、细胞制品等并非来源于人或动物的样品。

39、利用所述抗体或其抗原结合片段或所述抗体偶联物或所述抗体组合物或所述检测试剂盒检测il-15的方法可以使用酶联免疫吸附试验（elisa）、化学发光免疫检测、放射免疫检测、荧光免疫检测、免疫色谱法等检测方法。

40、在本发明的一些实施方式中，利用所述抗体或其抗原结合片段、抗体偶联物、抗体组合物或检测试剂盒以双抗体夹心elisa法检测il-15。

41、上述（2）中，所述产品可为非诊断目的的检测试剂或试剂盒或为诊断目的的检测试剂或试剂盒。

42、上述（3）中，细胞制品中il-15的残留检测为利用所述抗体或其抗原结合片段或所述抗体偶联物或所述抗体组合物或所述检测试剂盒检测il-15在细胞制品中的存在或其水平。

43、上述（5）中，通过检测细胞制品中il-15的含量，对细胞制品进行质量控制。

44、上述（6）中，所述靶向il-15的药物为通过结合il-15发挥疾病治疗目的的药物。

45、本发明提供一种非疾病诊断目的的检测il-15的方法，所述方法包括：利用所述il-15的抗体或其抗原结合片段或所述抗体偶联物或所述il-15的抗体组合物或所述检测试剂盒对待测样品中的il-15进行检测。

46、上述检测可采用酶联免疫吸附试验（elisa）、化学发光免疫检测、放射免疫检测、荧光免疫检测、免疫色谱法等检测方法。

47、本发明中，所述il-15为人il-15。

48、本发明的有益效果至少包括：本发明提供能够特异性结合il-15的抗体，该抗体对il-15具有高亲和力，且对其它白细胞介素等细胞因子无交叉反应，能够实现il-15的高特异性和高灵敏度检测，是理想的il-15蛋白含量的检测抗体。

49、本发明基于提供的抗体开发了il-15的检测试剂，该检测试剂能够实现不同基质样品中il-15的定量检测，具有较高的灵敏度、特异性、准确度和精密度，且不受基质的干扰，操作简单、快速，可用于生产t细胞、nk细胞以及car-t细胞工艺中il-15的残留检测，有利于加速细胞基因治疗（cgt）的应用。