一种人卵透明带重组抗原及其制备方法和应用与流程

本发明涉及人卵透明带抗体免疫检测，具体涉及一种人卵透明带重组抗原及其制备方法和应用。

背景技术：

1、人卵透明带蛋白3(zp3)是人卵透明带蛋白中的一种，其在卵子发育和受精中具有重要作用。zp3是卵子表面的关键分子，能与精子结合，促使精子发生顺应性变形，进而发生精子-卵子结合；zp3的结合活性和糖基化状态对于精子选择和胚胎发育起着重要作用。

2、抗透明带抗体是女性进行不孕不育检查中的关键检查项目；检测抗透明带抗体的方法有免疫沉淀反应、间接免疫荧光法、间接血凝、胶乳凝集试验及酶联免疫法检测法等，其中，以酶联免疫法检测法最常用；但是，目前酶联免疫法检测试剂中用到的包被抗原多为猪卵透明带抗原，其存在灵敏度低、特异性差的问题。

3、因此，如何提供一种人源性的卵透明带重组抗原，将此卵透明带重组抗原应用到酶联免疫平台检测抗透明带抗体，提高抗透明带抗体检测的灵敏度和特异性，是本领域的技术人员急需解决的技术问题。

4、公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

1、针对上述技术问题，本发明实施例提供了一种人卵透明带重组抗原及其制备方法和应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、本发明提供了以下技术方案：

3、一种人卵透明带重组抗原，核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、优选的，氨基酸序列如seq id no.2所示。

5、一种重组表达载体，所述重组表达载体由表达载体和上述所述的人卵透明带重组抗原的编码基因重组而成。

6、优选的，所述表达载体为质粒载体pgapzαa。

7、一种重组工程菌，所述重组工程菌是向宿主菌中转化上述所述的重组表达载体而成。

8、优选的，所述重组工程菌为含有重组表达载体的毕赤酵母gs115感受态细胞。

9、此处需要重点强调的是，zp3为毕赤酵母gs115感受态细胞的胞外表达产物，这表示zp3在毕赤酵母细胞外部分泌到培养液中，这对于后续zp3的纯化和应用非常有利，因为zp3不需要从细胞内部提取。

10、一种检测抗透明带抗体的酶联免疫试剂，酶联免疫试剂中所用到的包被抗原为上述所述的人卵透明带重组抗原。

11、一种人卵透明带重组抗原的制备方法，包括以下步骤：

12、(1)依据genbank数据库获取人卵透明带蛋白3的氨基酸序列，其氨基酸序列如seqid no.2所示，对应的核苷酸序列如seq id no.5所示；

13、(2)将步骤(1)中获取的氨基酸序列进行信号肽1-22aa去除并进行针对毕赤酵母表达系统的密码子优化，获得序列为seq id no.1的核苷酸序列；

14、(3)以序列seq id no.1为模板，设计上下游引物，在引物前添加酶切位点及保护碱基并进行基因扩增，将基因扩增产物回收后经双酶切，连接至经ecor i和not i酶切后的质粒载体pgapzαa上，形成重组表达载体；其中，p1为上游引物、p2为下游引物；

15、(4)将步骤(3)中的重组表达载体转化至毕赤酵母gs115感受态细胞，形成重组工程菌；

16、(5)筛选获得阳性重组工程菌，对阳性重组工程菌进行培养，表达人卵透明带重组抗原；

17、(6)分离纯化人卵透明带重组抗原。

18、优选的，引物p1的核苷酸序列如seq id no.3所述；引物p2的核苷酸序列如seq idno.4所示。

19、本发明实施例提供的一种人卵透明带重组抗原及其制备方法和应用，具有以下有益效果：本发明是以人卵透明带蛋白3为基础，通过对其进行密码子优化，构建至表达载体进行毕赤酵母表达，因其具有蛋白质翻译后修饰功能，且经发酵发现该蛋白为胞外表达，经蛋白纯化后获得了高纯度且生物活性高的重组人卵透明带蛋白，使其在抗原特异性方面具有明显的优势；将人卵透明带重组抗原蛋白作为包被抗原应用到酶联免疫平台检测抗透明带抗体，检测的特异性及产品的稳定性有明显的提高。

技术特征：

1.一种人卵透明带重组抗原，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的人卵透明带重组抗原，其特征在于，氨基酸序列如seq idno.2所示。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体由表达载体和权利要求1或2所述的人卵透明带重组抗原的编码基因重组而成。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述表达载体为质粒载体pgapzαa。

5.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌是向宿主菌中转化如权利要求3或4所述的重组表达载体而成。

6.根据权利要求5所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为含有重组表达载体的毕赤酵母gs115感受态细胞。

7.一种检测抗透明带抗体的酶联免疫试剂，其特征在于，酶联免疫试剂中所用到的包被抗原为权利要求1或2所述的人卵透明带重组抗原。

8.一种人卵透明带重组抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的人卵透明带重组抗原的制备方法，其特征在于，引物p1的核苷酸序列如seq id no.3所述；引物p2的核苷酸序列如seq id no.4所示。

技术总结
本发明公开了一种人卵透明带重组抗原及其制备方法和应用，涉及人卵透明带抗体免疫检测技术领域。一种人卵透明带重组抗原，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明是以人卵透明带蛋白3为基础，通过对其针对毕赤酵母表达系统进行密码子优化，后构建至表达载体进行毕赤酵母表达，因其具有蛋白质翻译后修饰功能，且经发酵发现该蛋白为胞外表达，经蛋白纯化后获得了高纯度且生物活性高的重组人卵透明带蛋白，使其在抗原特异性方面具有明显的优势；将人卵透明带重组抗原蛋白作为包被抗原应用到酶联免疫平台检测抗透明带抗体，检测的特异性及产品的稳定性有明显的提高。

技术研发人员：李林,马海玲,董丽宁,张纯瑶,杨帆,刘万建,田永帅
受保护的技术使用者：青岛硕景生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/8