一种发酵用烟草增香微生物制剂、其制备方法和应用与流程

本发明属于烟草及烟草生物，具体而言，涉及一种发酵用烟草增香微生物制剂，其制备方法和应用。

背景技术：

1、长久以来，人们在无意识的情况下利用微生物赋予食物香味如酒类、面包、熏肉、茶叶等，发酵类食物往往具有一种自然的芳香。许多细菌和霉菌都具有合成芳香化合物的能力，如枯草芽抱杆菌能够全程合成此吡嗪类物质，从而赋予酱油、豆鼓、豆瓣酱和酱香型白酒特有的香味；拟抱长喙壳菌能产生多种带有果味花香的萜烯类化合物；念珠长喙壳菌能产生包括乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、香茅醇和香叶醇等多种香气物质。

2、不适用烟叶是烟叶评定中质量不合格或者不符合标准无法进行生产应用的烟叶原料。目前，国内各中烟公司库存不适用烟叶仍约有600万担。这些不适用烟叶占据了企业仓储管理的成本，一般被报废处理或者丢弃，这些处理方式经济效益不高，且存在环境污染。发酵是提升烟叶品质的良好方法，不仅可以有效提高烟叶的香气物质，同时降低烟叶中的蛋白质、淀粉、果胶等物质的含量，提高香烟的口感。在烟草发酵过程中选择适当的微生物和适宜的发酵制剂，可以有效改善发酵效果。目前烟草行业相关研究开展了有关枯草芽孢杆菌(cn107354109a)、贝莱斯芽孢杆菌(cn110839940a)、酿酒酵母(cn113073062a)等用于烟叶发酵的微生物制剂开发工作，而利用产香型丝状真菌及其制剂进行烟叶发酵提升烟叶风味的相关研究报道极少。

3、因此，利用生物技术手段筛选特色产香微生物，增加烟叶风味，提升不适用烟叶品质，是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、本发明正是基于上述技术问题至少之一，提出了一种发酵用烟草增香微生物制剂，其制备方法和应用，可为不适用烟叶的品质带来显著提升。

2、本发明的第一方面，提供一种发酵用烟草增香微生物制剂，所述制剂为产香菌株发酵液冻干粉，所述产香菌株为黄柄曲霉(aspergillus flavipes，购买于美国标准菌株保藏中心atcc，保藏号为atcc 200802)。

3、本发明的第二方面，提供一种发酵用烟草增香微生物制剂在烟叶发酵中的应用。本发明发酵用烟草增香微生物制剂可帮助烟叶发酵增香、提升烟叶甜香香韵。

4、本发明的第三方面，提供一种发酵用烟草增香微生物制剂具体的制备方法，包括以下步骤：

5、(1)将黄柄曲霉在pda平板上于15～35℃环境中活化5～10d，后使用灭菌小刀或打孔器在菌落边缘处切出小块接种于液体发酵培养基，于15～35℃恒温摇床中以120～200r/min震荡发酵，得到发酵液；

6、(2)将发酵液以5000～10000rpm离心10～20min，取上清液；

7、(3)将上清液经-20℃预冻24h后，真空冷冻干燥得到发酵用烟草增香微生物制剂。

8、进一步的，步骤(1)中液体发酵培养基的配制方法为：去皮马铃薯清洗切碎，称取100～500g，加入1l蒸馏水，煮沸10～50min后使用滤网对其过滤，添加5～30g葡萄糖、5～30g麦芽浸粉于滤液中，蒸馏水定容至1l，ph自然，于100～130℃高压灭菌10～50min。

9、进一步的，步骤(1)中震荡发酵培养5～10d。

10、本发明所述发酵用烟草增香微生物制剂在烟叶发酵中的应用方法，具体为：将所述发酵用烟草增香微生物制剂添加于烟叶中进行发酵。

11、可选的，所述烟叶为烤烟不适用烟叶、低等级烟叶、烟梗或烟末中的任意一种或几种。

12、进一步的，所述发酵用烟草增香微生物制剂添加于烟叶中的方法为：使用无菌水将烟草增香微生物制剂以体积比1～3％的比例稀释，均匀喷洒于烟叶中。

13、进一步的，所述发酵用烟草增香微生物制剂的添加量为烟叶重量的1～30％，发酵温度为24～45℃，湿度为30～90％，发酵时间为8～140h。

14、本发明提供一种发酵用烟草增香微生物制剂、其制备方法及应用，具有如下技术效果：

15、1.利用产香真菌及其制剂提升烟叶品质目前在烟草行业研究报道较少，本发明提出的烟草增香微生物黄柄曲霉能分泌甜香成分土曲霉酮及2-丙酰基环己酮，为首次发现。

16、2.该制剂可以增加不适用烟叶的甜香香韵，显著改善烟气口感，提升不适用烟叶的可用性。

17、3.本发明提供的烟草发酵用微生物剂制备简单，便于保存，使用时操作方便，无需特殊处理。

18、4.利用本发明微生物制剂发酵不适用烤烟烟叶，可用原料适用范围广，且适合大规模发酵与生产。黄柄曲霉及其制剂可应用于不适用烟叶的品质提升。

技术特征：

1.一种发酵用烟草增香微生物制剂，其特征在于，所述制剂为产香菌株发酵液冻干粉，所述产香菌株为黄柄曲霉。

2.权利要求1所述的发酵用烟草增香微生物制剂在烟叶发酵中应用。

3.权利要求1所述的发酵用烟草增香微生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中液体发酵培养基的配制方法为：去皮马铃薯清洗切碎，称取100~500 g，加入1 l蒸馏水，煮沸10~50 min后使用滤网对其过滤，添加5~30 g葡萄糖、5~30 g麦芽浸粉于滤液中，蒸馏水定容至1 l，ph自然，于100~130℃高压灭菌10~50min。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中的震荡发酵培养5~10 d。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用方法为；将所述发酵用烟草增香微生物制剂添加于烟叶中进行发酵。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述烟叶为烤烟不适用烟叶、低等级烟叶、烟梗或废弃烟末中的任意一种或几种。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述发酵用烟草增香微生物制剂添加于烟叶中的方法为：使用无菌水将烟草增香微生物制剂以体积比1~3 %的比例稀释，均匀喷洒于烟叶中。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述发酵用烟草增香微生物制剂的添加量为烟叶重量的1~30 %，发酵温度为24~45℃，湿度为30~90%，发酵时间为8~140 h。

技术总结
本发明涉及一种发酵用烟草增香微生物制剂、其制备方法及应用，主要涉及一株产香微生物黄柄曲霉及其在不适用烟叶发酵中应用，研究中发现黄柄曲霉在发酵过程中可以产生较大量的甜香成分土曲霉酮及2‑丙酰基环己酮等，将其制备成微生物制剂发酵烟叶，可以增加烟叶的甜香香韵、醇和烟气，提升不适用烟叶品质，增加烟叶可用性，烟草发酵用微生物制剂可在烟叶的品质提升中应用。

技术研发人员：何力,罗海涛,齐午城,刘子文,邵灯寅,邹恩凯,任周营,刘思奎,陈栋,占小林,胡久彪,黄龙伟,刘征侃,李天笑,董鸿辉
受保护的技术使用者：江西中烟工业有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19