黄酮醇生物碱及其制备方法和应用

本发明涉及多酚类化合物领域，具体地涉及一种黄酮醇生物碱及其制备方法和应用。

背景技术：

1、神经退行性疾病时一种慢性进行性神经系统损伤性疾病，阿尔兹海默症时一种慢性的神经退行性疾病，其发病机制尚未明确，只存在一些假说，例如胆碱能神经元假说、tau蛋白异常磷酸化假说、β-淀粉样蛋白毒性假说等。目前市面上在售的一些药物，虽然对阿尔兹海默症的发病进程有一定的延缓作用，但也存在着许多缺点，例如明显的副作用、耐药性、单一靶向等。因此寻找一些源自植物的可替代性天然药物，或许是一种可行方案。茶(camellia sinensis)以其独特的风味和健康功效，在世界各地广受欢迎。茶中的多酚类物质被证明对神经退行性疾病有治疗作用。杨梅素、槲皮素和山奈酚作为茶叶中的活性成分和天然产物，具有神经保护活性，对阿尔兹海默症具有临床作用。实验证明，槲皮素可以穿过血脑屏障发挥生物活性。但槲皮素等黄酮醇类物质在体内的生物利用度较低，限制了它们在医药工业的应用。

技术实现思路

1、基于上述分析，本发明提出黄酮醇生物碱及其制备方法和应用，所要解决的技术问题之一是：提供黄酮醇生物碱，由式i～viii所示结构表示：

2、

3、

4、式i～iiii所示的黄酮醇生物碱，分别命名为杨梅素生物碱a，杨梅素生物碱b，杨梅素生物碱c，槲皮素生物碱a，槲皮素生物碱b，槲皮素生物碱c，山奈酚生物碱a和山奈酚生物碱b。

5、本发明所要解决的技术问题之二是：提供一种黄酮醇生物碱在合成、制备和延缓秀丽隐杆线虫cl4176麻痹药物中的用途。

6、进一步地，本发明还提供了一种延缓秀丽隐杆线虫cl4176麻痹药物，包括：黄酮醇生物碱和其他药用辅料。

7、进一步地，所述延缓秀丽隐杆线虫cl4176麻痹的药物剂型包括但不限于：口服型、外用型和注射型。

8、进一步地，所述口服型包括但不限于：片剂、胶囊剂、颗粒剂；所述外用型包括但不限于：栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂；所述注射型包括但不限于：注射液、混旋液、冻干粉。具体制备方法参照制药领域的常规方法制备，所用药用辅料根据剂型不同选择制药领域通用的辅料。

9、本发明所要解决的技术问题之三是：提供一种黄酮醇生物碱的合成制备方法，包括以下步骤：

10、(1)加热反应：称取杨梅素，槲皮素，山奈酚，l-茶氨酸，溶于水或甲醇水，加热搅拌反应；

11、(2)萃取反应混合物：将反应混合物进行减压浓缩，去除有机溶剂后，用乙酸乙酯萃取，再减压浓缩，去除乙酸乙酯，加乙醇溶解；

12、(3)柱层析分离：将乙醇溶解的反应混合物通过sephadex lh-20凝胶柱层析，80％乙醇水等度洗脱，得到目标组分；

13、(4)半制备：用高效液相和反相半制备柱，纯化单体化合物；

14、(5)手性制备：用手性柱进一步分离手性异构体复合物iv&v。

15、进一步的，步骤(1)所述加热处理包括：

16、①将杨梅素和茶氨酸按1：2的摩尔比溶于水，加入1/10的对甲苯磺酸，反应溶液ph约为2，120℃油浴加热搅拌48小时；

17、②将槲皮素和茶氨酸按1：2的摩尔比溶于20％甲醇水，加入1/10的对甲苯磺酸，反应溶液ph约为2，120℃油浴加热搅拌48小时；

18、③将山奈酚和茶氨酸按1：2的摩尔比溶于50％甲醇水，加入1/10的对甲苯磺酸，反应溶液ph约为2，120℃油浴加热搅拌72小时。

19、进一步的，步骤(4)所述半制备处理包括：采用agilent zorbax eclipse xdb-c18反相色谱柱，流速2ml/min，柱温为30℃，流动相为超纯水(a相)和色谱级乙腈(b相)。

20、黄酮醇生物碱i～iii的洗脱梯度为：0～15min,20～27％b；15～25min,27％b；25～26min,27～95％b；26～28min,95％b；28～30min,95～20％b；30～32min,20％b；

21、黄酮醇生物碱iv～vi的洗脱梯度为：0～5min,27～30％b；5～18min,30％b；18～19min,30～95％b；19～22min,95％b；22～25min,95～27％b；25～28min,27％b；

22、黄酮醇生物碱vii～viii的洗脱梯度为:0～5min,30％b；5～10min,30～35％b；10～19min,35％b；19～20min,35～95％b；20～23min,95％b；23～25min,95～30％b；25～28min,30％b。

23、进一步的，步骤(5)所述手性制备处理包括：采用chiralpakad-rh反相手性分析柱，流速1ml/min，柱温为30℃，流动相为超纯水(a相)和色谱级乙腈(b相)。

24、黄酮醇生物碱iv&v的洗脱梯度为：0～30min,10～40％b；30～32min,40～90％b；32～35min,90％b；35～38min,90～10％b；38～40min,10％b。

25、进一步地，本发明还公开了一种根据任一上述制备方法制得的黄酮醇生物碱。

26、进一步地，本发明还公开了一种上述制备方法制得的黄酮醇生物碱在制备延缓秀丽隐杆线虫cl4176麻痹药物中的用途。

27、本发明还提供一种检测所述的黄酮醇生物碱的方法，包括：

28、采用hplc-q-tof-ms检测方法检测黄酮醇生物碱，其中：

29、流速：0.4ml/min；

30、流动相：a相0.1％甲酸水，b相含0.1％甲酸的乙腈；

31、洗脱条件：0～4min,6％b；4～16min,6～14％b；16～22min,14～15％b；22～32min,15～18％b；32～37min,18～29％b；37～45min,29～45％b；45～49min,45～95％b；49～54min,95％b；54～56min,95～6％b；56～60min,6％b。

32、经检测发现，该黄酮醇生物碱i去质子化离子分子量为428.0982，保留时间为14.637min；黄酮醇生物碱ii去质子化离子分子量为428.0985，保留时间为15.678min；黄酮醇生物碱iii去质子化离子分子量为428.0992，保留时间为16.222min；黄酮醇生物碱iv&v去质子化离子分子量为412.1040，保留时间为17.266min；黄酮醇生物碱vi去质子化离子分子量为412.1046，保留时间为17.870min；黄酮醇生物碱vii去质子化离子分子量为396.1100，保留时间为18.460min；黄酮醇生物碱viii去质子化离子分子量为396.1089，保留时间为19.103min。

33、本发明的有益效果体现在：

34、1.本发明提供的具有生物活性的黄酮醇生物碱对秀丽隐杆线虫麻痹具有显著延缓作用，可以用于制备抗阿尔兹海默症药，对农业和医药领域具有重要的意义，为有效开发利用茶多酚提供了更为广阔的前景。

35、2.本发明黄酮醇生物碱的合成制备方法工艺简单，容易实施，成本较低，具有非常好的应用前景。

36、3.本发明黄酮醇生物碱的检测方法工艺简单，容易实施，准确率高，可用于寻找含有本发明黄酮醇生物碱的生物资源，增加了本发明黄酮醇生物碱获取路径，提高其利用度。