一种诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基

本发明属于动物组织培养领域，涉及一种诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基。

背景技术：

1、目前，全球对肉类的需求不断上升，而通过牲畜生产肉类是一个效率极低的过程，目前传统肉类生产能力已接近最大水平。如今细胞培养肉被认为是一种新兴的技术，它有望解决畜牧业带来的问题，例如资源利用，环境破坏和动物伦理等。根据行业测算，细胞培养肉可大幅减少温室气体、土地以及水资源的利用，从而实现肉类可持续绿色生产；对动物而言，细胞培养肉能减少动物的工厂化饲养和屠宰，有利于动物福利；最后，对人类健康而言，细胞培养肉可在工厂中无抗生产，并进行全程质量控制，从而保障肉类的健康和安全。目前细胞培养肉的成本居高不下，其中培养基占据了很大一部分，因为培养基中包含昂贵的胎牛血清。血清中含有多种生长因子、激素、维生素、氨基酸、脂肪酸和微量元素等，这些物质在细胞持续生长过程中提供增殖、保护等方面的调控作用。血清作为牛肉行业的副产品，它被病毒、细菌和内毒素污染的可能性也很高，而且不同批次间血清的质量也不同，影响细胞培养和实验结果的重复性及实验结果的不确定性。另一方面，用胎牛血清补充基础培养基引起了伦理问题，因为它是从怀孕的牛被屠宰后的胎儿的血液中获得的。过渡到完全无血清的培养基或至少减少胎牛血清培养基的大规模生产生物技术产品是必不可少的，特别是基于人口增长和福利增加。因此，寻找血清的替代品，开发无血清培养基不仅是降低培育肉工业化生产成本的主要解决方案，也是细胞培育肉未来产业化发展的必然趋势。

技术实现思路

1、本发明的第一目的是诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基，克服目前用于细胞培养肉的培养基中都要添加血清，容易污染且成本高的问题。

2、本发明的第二目的是提供上述培养基的用途。

3、本发明通过以下技术方案来实现：

4、一、一种诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基，该培养基是在基础培养基的基础上添加了以下组分：

5、牛血清白蛋白 浓度为0.5mg/ml-2mg/ml，胰岛素 浓度为10μg/ml-40μg/ml，表皮生长因子 浓度为5ng/ml-20ng/ml，转铁蛋白 浓度为2μg/ml-10μg/ml，维生素c磷酸酯 浓度为20μg/ml-100μg/ml。

6、进一步的，所述的基础培养基为dmem/f-12基础培养基。

7、进一步的，所述的牛血清白蛋白浓度为1mg/ml。

8、进一步的，所述的胰岛素浓度为30μg/ml。

9、进一步的，所述的表皮生长因子浓度为10ng/ml。

10、进一步的，所述的转铁蛋白浓度为5μg/ml。

11、进一步的，所述的维生素c磷酸酯浓度为50μg/ml。

12、进一步的，该培养基是在基础培养基的基础上添加了以下组分：

13、牛血清白蛋白 浓度为1mg/ml，胰岛素 浓度为30μg/ml，表皮生长因子 浓度为10ng/ml，转铁蛋白 浓度为5μg/ml，维生素c磷酸酯 浓度为50μg/ml。

14、二、根据上述的无血清培养基，该培养基在诱导肌细胞分化中的应用。

15、采用上述技术方案的积极效果：本发明提供的无血清培养基能有效诱导牛成肌细胞的分化；该无血清培养基的分化效率是高于2%马血清的，根据实时荧光定量结果来看，肌细胞分化的标志基因myod1、myog、myh3的表达量显著高于2%马血清，蛋白免疫印记及其量化结果显示无血清培养基中myog和myh3的表达量也是高于2%马血清的；该培养基不仅仅避免了添加血清，并且效果优于现有的血清培养基，用该培养基可以避免高成本、血清批次差异和动物福利等问题。

技术特征：

1.一种诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基，其特征在于：该培养基是在基础培养基的基础上添加了以下组分：

2.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述的基础培养基为dmem/f-12基础培养基。

3.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述的牛血清白蛋白浓度为1mg/ml。

4.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述的胰岛素浓度为30μg/ml。

5.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述的表皮生长因子浓度为10ng/ml。

6.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述的转铁蛋白浓度为5μg/ml。

7.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述的维生素c磷酸酯浓度为50μg/ml。

8.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：该培养基是在基础培养基的基础上添加了以下组分：

9.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：该培养基在诱导肌细胞分化中的应用。

技术总结
本发明涉及一种诱导牛成肌细胞分化的无血清培养基，该培养基是在基础培养基的基础上添加了以下组分：牛血清白蛋白浓度为0.5mg/ml‑2mg/ml，胰岛素浓度为10μg/ml‑40μg/ml，表皮生长因子浓度为5ng/ml‑20ng/ml，转铁蛋白浓度为2μg/ml‑10μg/ml，维生素C磷酸酯浓度为20μg/ml‑100μg/ml。本发明提供的无血清培养基能有效诱导牛成肌细胞的分化；该培养基不仅仅避免了添加血清，并且效果优于现有的血清培养基，用该培养基可以避免高成本、血清批次差异和动物福利等问题。

技术研发人员：杜嘉伟,王洪宝,昝林森
受保护的技术使用者：西北农林科技大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11