外源基因表达用调控元件、应用、表达盒、表达系统、试剂盒

本发明属于基因工程，具体涉及外源基因表达用调控元件、应用、表达盒、载体、表达系统、试剂盒。

背景技术：

1、重组治疗蛋白是生物药物的重要部分，哺乳动物细胞表达系统，例如中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary，cho)细胞因能扩增外源基因并整合到宿主染色体中，即使在没有持续药物选择的情况下也能维持多种蛋白高水平表达；且具有类似人源化翻译后修饰；既能贴壁生长，也能高密度悬浮生长的特性，以及不易受人类病毒的侵染，成为目前生产重组治疗蛋白的主要宿主。其中70％以上批准上市的重组蛋白药物是cho细胞生产的。

2、随着细胞工程技术的发展，重组蛋白的表达量在不断的提高。尽管通过优化细胞培养基和生产工艺、改造细胞系等策略可以在一定程度上实现较高的目的蛋白表达水平，但通过载体工程优化改造表达载体是提高和保持目的蛋白高水平表达的最适宜策略。重组蛋白表达用载体中通常包括启动子和转录因子结合位点等dna序列用于调控外源基因表达，载体中调控元件通常不影响目的蛋白的性质和功能，主要影响目的蛋白的瞬时表达和稳定表达性能，因此现有技术中也存在一些针对调控元件的研究报道，因此，通过对调控元件创新设计，为重组蛋白表达系统的性能优化提供新的解决方案具有很高的可行性。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供外源基因表达用调控元件，能够提高重组蛋白的瞬时表达量和稳定表达量。

2、本发明的目的之二在于提供外源基因表达用调控元件的应用，用于作为功能元件构建载体，提高重组蛋白的稳定表达水平。

3、本发明的目的之三在于提供一种表达盒，由本发明提供的调控元件连接在重组蛋白编码序列上游构建而成，用于重组蛋白高效表达。

4、本发明的目的之四在于提供一种重组蛋白表达系统，实现重组蛋白高效稳定表达。

5、本发明的目的之五在于提供一种重组蛋白表达系统构建用试剂盒，能够构建获得高效稳定表达重组蛋白的表达系统。

6、为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

7、外源基因表达用调控元件，其核苷酸序列如seq id no:2所示，或者核苷酸序列如seq id no:4所示。

8、上述外源基因表达用调控元件的应用，作为载体的组成元件。

9、可选的，所述载体包括启动子元件，所述启动子元件为cmv；所述调控元件连接在启动子下游。

10、可选的，所述载体以pseap或phsa为出发载体；调控元件替换出发载体的同功能元件。

11、可选的，所述载体还包括重组蛋白编码序列，所述调控元件位于重组蛋白编码序列上游。

12、一种表达盒，包括上述调控元件和重组蛋白编码序列；其中调控元件位于重组蛋白编码序列上游。

13、一种重组蛋白表达系统，包括将包含上述表达盒的载体转染至哺乳动物细胞构建而成。

14、可选的，所述哺乳动物细胞选自cho、hek293、bhk21、cos-7中的任意一种；优选为cho细胞。

15、一种重组蛋白表达用试剂盒，包括哺乳动物细胞、载体、转染试剂和/或作为调控元件核酸分子、和/或上述表达盒；所述载体为不包括调控元件的出发载体，或启动子下游连接有调控元件的载体；

16、作为调控元件的核苷酸序列如seq id no:2所示，或者核苷酸序列如seq id no:4所示。

17、可选的，上述表达系统和试剂盒用于制备包含目的蛋白的制剂；进一步的，所述制剂选自蛋白检测试剂、治疗或预防疾病的目的蛋白药物、带有目的蛋白的基因药物。

18、本发明的有益效果：

19、本发明提供一种调控元件，并优化确定其核苷酸序列seq id no:2所示，或者核苷酸序列如seq id no:4所示，通过试验验证，作为功能元件构建重组表达系统，能够调控外源重组蛋白基因表达，相比现有同类型调控元件，本发明提供的调控元件提高重组蛋白稳定表达水平约1.3～1.7倍。

技术特征：

1.外源基因表达用调控元件，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no:2所示，或者核苷酸序列如seq id no:4所示。

2.如权利要求1所述的外源基因表达用调控元件的应用，其特征在于，作为载体的组成元件。

3.如权利要求2所述的外源基因表达用调控元件的应用，其特征在于，所述载体包括启动子元件，所述启动子元件为cmv；所述调控元件连接在启动子下游。

4.如权利要求3所述的外源基因表达用调控元件的应用，其特征在于，所述载体以pseap或phsa为出发载体；调控元件替换出发载体的同功能元件。

5.如权利要求3或4所述的外源基因表达用调控元件的应用，其特征在于，所述载体还包括重组蛋白编码序列，所述调控元件位于重组蛋白编码序列上游。

6.一种表达盒，其特征在于，包括如权利要求1所述调控元件和重组蛋白编码序列；其中调控元件位于重组蛋白编码序列上游。

7.一种重组蛋白表达系统，其特征在于，包括将包括如权利要求6所述表达盒的载体转染至哺乳动物细胞构建而成。

8.如权利要求7所述的重组蛋白表达系统，其特征在于，所述哺乳动物细胞选自cho、hek293、bhk21、cos-7中的任意一种；优选为cho细胞。

9.一种重组蛋白表达用试剂盒，其特征在于，包括哺乳动物细胞、载体、转染试剂和/或作为调控元件核酸分子、和/或权利要求6所述的表达盒；所述载体为不包括调控元件的出发载体，或启动子下游连接有调控元件的载体；

10.如权利要求7～8所述表达系统或权利要求9所述试剂盒的应用，其特征在于，用于制备包含目的蛋白的制剂；

技术总结
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及外源基因表达用调控元件、应用、表达盒、载体、表达系统、试剂盒。本发明提供一种调控元件，并优化确定其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，或者核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。通过试验验证，本发明提供的调控元件作为功能元件构建重组表达系统，能够调控外源重组蛋白基因表达，相比现有同类型调控元件，本发明提供的调控元件提高稳定表达水平约1.3~1.7倍。

技术研发人员：王天云,王小引,李正梅,郭潇,林艳,米春柳,赵春澎,张玺
受保护的技术使用者：新乡医学院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12