OsCSLE6基因在调控水稻抗旱性中的应用的制作方法

本发明涉及基因工程，具体涉及oscsle6基因在调控水稻抗旱性中的应用。

背景技术：

1、水稻(oryza sativa.l)是中国重要的粮食作物之一，水稻产量对中国的粮食安全至关重要。水稻长期淹水生长，生长发育过程消耗了大量的水资源。但是，中国人均水资源仅为世界水平的四分之一，属于绝对缺水国家。中国水稻生产正面临着严重的水资源短缺的危机，发掘水稻抗旱基因，改良水稻抗旱性，对于确保水稻在面临干旱条件是稳产具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决上述问题，提供oscsle6基因在调控水稻抗旱性中的应用，目的在于改良水稻抗旱性。

2、为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种水稻oscsle6基因的应用，所述oscsle6基因的序列如seq id no:1所示的dna片段；或

3、与seq id no:1至少90％同源的dna片段；或

4、功能相当于seq id no:1所示的核苷酸序列亚片段。

5、在一些实施案例中，所述应用为oscsle6基因编码的蛋白在调控水稻抗旱性中的应用。

6、在一些实施案例中，所述oscsle6基因编码的蛋白的氨基酸序列如seq id no：11所示；或

7、所述oscsle6基因编码的蛋白的氨基酸序列选自seq id no:11的同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体和诱导突变体中的一种。

8、本发明还提供了一种上述基因或蛋白相关的生物材料在水稻抗旱性中的应用，所述生物材料如下任一所示：

9、a)含有核苷酸序列如seq id no:1的dna片段的表达盒，或含有与seq id no:1的至少90％同源的dna片段的表达盒；

10、b)含有核苷酸序列如seq id no:1所示的dna片段重组载体，或含有与seq id no:1的至少90％同源dna片段的重组载体；优选地，所述重组载体为基因敲除载体、敲减载体、敲入载体或过表达载体；

11、c)含有b)所述的重组载体的重组微生物、重组细胞、转基因植物组织或转基因植株；

12、d)如c)所述的转基因植株的可再生细胞的组织培养物或原生质体。

13、在一些实施例中，构建所述的重组载体所使用的质粒为ti质粒或植物病毒载体。

14、本发明还提供一种基于crispr/cas9技术的oscsle6基因敲除突变体，所述的oscsle6基因敲除突变体由以下步骤制备得到：设计1个sgrna和对应的靶点序列引物，所述sgrna靶点核苷酸序列如seq id no:2所示；利用pcr扩增的方法构建所述的oscsle6基因应用于生产具有抗旱性转基因植物的引导rna靶点序列的sgrna表达盒；

15、将sgrna表达盒装载到crispr/cas9载体上，得到含靶点序列的crispr/cas9-sgrna载体；

16、将上述含有靶点序列的crispr/cas9-sgrna载体转化农杆菌，然后转化水稻愈伤组织，得到水稻oscsle6基因突变体ko植株

17、本发明还提供了一种改良水稻抗旱性的育种方法，筛选包含权利要求1所含的oscsle6基因的水稻。

18、在一些实施例中，所述育种方法为：构建如上述的重组基因编辑载体，并培育oscsle6基因发生突变水稻植株。

19、以下是本发明涉及到的序列：

20、seq id no：1(oscsle6核苷酸序列)：

21、atggagacgacgacgacggagaggcggcggctgttcgcgacggagaaggtgggcggcagggcggtgtacaggctgcaggcggcgacggtggccgccgggatactgctggtgctctactacagggcgacgcgcgtgccggccgccggcgaagggcgggcggcgtggctggggatggcggcggcggagctctggttcgccgtctactgggtcatcacgcagtccgtccggtggtgccccgtccgccgccgcaccttcaagaacaggctcgccgagagatacaaagaaaatctacctggtgtggatgtttttgtatgcactgcagacccacacgcagagccaccaagccttgtcatctctaccatcctatcagtcatggcatacaattacccatcagaaaaaataagtgtgtatctttctgatgatggtggttcaattcttactttctacgctctatgggaggcatccatgtttgcaaagaaatggctaccattctgcagaagatataacattgagccaaggtccccagctgcttacttctcggaatcagaagggcatcacaatctgtgctccccaaaagaatggtcatttatcaagaacctgtatgaagaaatgagagagagaattgattcggctgtcatgtcaggaaaaattcctgaagaaattaaactaaagcataaaggatttgatgaatggaactcggaaatgacctcaaaaaatcaccagccaattgttcaggttctgatagatgggaaaagccaaaatgcagttgatgacgacggaaatgtgctaccaacactggtatacatggcgcgcgagaagagccctcagtatcaccataacttcaaagccggggcattgaacgctttgataagggtatcagcactgataagtgacagccctgttatcttgaatgtggactgtgacatgtattccaacaatagtgattcaatcagagatgcgttgtgcttcttccttgatgaagaaatgagccacaaaattggatttgtccagtatcctcagaactacaacaatatgaccaaaaataatatatatgggaactctctcaatgttatcaatcatgtggagatgcgtggtttggacagtgctggtggatgtctctatattggcacaggatgcttccatagaagagagatcctttgtggtaagaaattcagcaaagattacaaggaagactggggcagaggaataaaggaaagaggacatgagaacatagatgagattgaagagaaggcaaaatctttagcaacctgcacttatgaacttaggacacaatggggcaatgagattggagtgaaatatggttgcccagtagaggatgtcatcactggattggcaatacattgccgaggatgggagtcagtctacatggaacctcaaagggcagcatttgtgggtgtagctccagcaacacttgcccagacaatactgcaacacaagagatggagtgagggcaatttcacaatttttctttcaaagcacaacaccttcctgtttggacatggaaaaatcagcttgcagttacagatgggctactgcatatatggattatgggcagccaattcactgcctacaatctactatgttatgattccagcactaggtcttgtcaaaggcactcccctatttccagagattatgagtccatgggctacacccttcatatatgtattttgtgtgaagaccctctacagtctttatgaggcattattatctggggatacattgaaaggatggtggaatggacaaaggatgtggatggtgaaaagaattacctcatatctatatggcttcattgacaccatccgaaaattgttaggattgtcaaagatgtcatttgaaattacagcaaaggtaagtgatggcgatgaagcaaagaggtatgagcaagaaatccttgagtttgggtcatcatctcctgaatttgtgatcatcgcaactgtcgcattactgaacttcgtctgcctagttgcagggctaagcaaaataatggcaggtgtgtggaatgtgtttttaccccaggtcattctatgtggactgatagtgatcactaatatcccaatttatgaggcaatgtttgtgagaaaggataaggggagaataccattaccagtcacactagcttcaattggctttgtaatgttggcattcctgttaccaatagtttga

22、seq id no：2(sgrna靶点序列)：

23、5’-gattccgagaagtaagcagctgg-3’

24、seq id no：3(casoscsle6-f引物序列)：

25、5’-ccaccaagccttgtcatctc-3’

26、seq id no：4(casoscsle6-r引物序列)：

27、5’-taccgaaacctaggggaacc-3’

28、seq id no：5(oscsle6ko1核苷酸序列)：

29、atggagacgacgacgacggagaggcggcggctgttcgcgacggagaaggtgggcggcagggcggtgtacaggctgcaggcggcgacggtggccgccgggatactgctggtgctctactacagggcgacgcgcgtgccggccgccggcgaagggcgggcggcgtggctggggatggcggcggcggagctctggttcgccgtctactgggtcatcacgcagtccgtccggtggtgccccgtccgccgccgcaccttcaagaacaggctcgccgagagatacaaagaaaatctacctggtgtggatgtttttgtatgcactgcagacccacacgcagagccaccaagccttgtcatctctaccatcctatcagtcatggcatacaattacccatcagaaaaaataagtgtgtatctttctgatgatggtggttcaattcttactttctacgctctatgggaggcatccatgtttgcaaagaaatggctaccattctgcagaagatataacattgagccaaggtccccagctagcttacttctcggaatcagaagggcatcacaatctgtgctccccaaaagaatggtcatttatcaagaacctgtatga

30、seq id no：6(oscsle6ko1截断的氨基酸序列)：

31、metttterrrlfatekvggravyrlqaatvaagillvlyyratrvpaagegraawlgmaaaelwf avywvitqsvrwcpvrrrtfknrlaerykenlpgvdvfvctadphaeppslvistilsvmaynypseki svylsddggsiltfyalweasmfakkwlpfcrrynieprspaslllgirrasqsvlpkrmviyqepv*

32、seq id no：7(oscsle6ko2核苷酸序列)：

33、atggagacgacgacgacggagaggcggcggctgttcgcgacggagaaggtgggcggcagggcggtgtacaggctgcaggcggcgacggtggccgccgggatactgctggtgctctactacagggcgacgcgcgtgccggccgccggcgaagggcgggcggcgtggctggggatggcggcggcggagctctggttcgccgtctactgggtcatcacgcagtccgtccggtggtgccccgtccgccgccgcaccttcaagaacaggctcgccgagagatacaaagaaaatctacctggtgtggatgtttttgtatgcactgcagacccacacgcagagccaccaagccttgtcatctctaccatcctatcagtcatggcatacaattacccatcagaaaaaataagtgtgtatctttctgatgatggtggttcaattcttactttctacgctctatgggaggcatccatgtttgcaaagaaatggctaccattctgcagaagatataacattgagccaaggtccccagcttgcttacttctcggaatcagaagggcatcacaatctgtgctccccaaaagaatggtcatttatcaagaacctgtatga

34、seq id no：8(oscsle6ko2截断的氨基酸序列)：

35、metttterrrlfatekvggravyrlqaatvaagillvlyyratrvpaagegraawlgmaaaelwf avywvitqsvrwcpvrrrtfknrlaerykenlpgvdvfvctadphaeppslvistilsvmaynypseki svylsddggsiltfyalweasmfakkwlpfcrrynieprspaclllgirrasqsvlpkrmviyqepv*

36、seq id no：9(oscsle6ko3核苷酸序列)：

37、atggagacgacgacgacggagaggcggcggctgttcgcgacggagaaggtgggcggcagggcggtgtacaggctgcaggcggcgacggtggccgccgggatactgctggtgctctactacagggcgacgcgcgtgccggccgccggcgaagggcgggcggcgtggctggggatggcggcggcggagctctggttcgccgtctactgggtcatcacgcagtccgtccggtggtgccccgtccgccgccgcaccttcaagaacaggctcgccgagagatacaaagaaaatctacctggtgtggatgtttttgtatgcactgcagacccacacgcagagccaccaagccttgtcatctctaccatcctatcagtcatggcatacaattacccatcagaaaaaataagtgtgtatctttctgatgatggtggttcaattcttactttctacgctctatgggaggcatccatgtttgcaaagaaatggctaccattctgcagaagatataacattgagccaaggtccccagctggcttacttctcggaatcagaagggcatcacaatctgtgctccccaaaagaatggtcatttatcaagaacctgtatga

38、seq id no：10(oscsle6ko3截断的氨基酸序列)：

39、metttterrrlfatekvggravyrlqaatvaagillvlyyratrvpaagegraawlgmaaaelwf avywvitqsvrwcpvrrrtfknrlaerykenlpgvdvfvctadphaeppslvistilsvmaynypseki svylsddggsiltfyalweasmfakkwlpfcrrynieprspaglllgirrasqsvlpkrmviyqepv*

40、seq id no：11(oscsle6正常表达的氨基酸序列)：

41、metttterrrlfatekvggravyrlqaatvaagillvlyyratrvpaagegraawlgmaaaelwfavywvitqsvrwcpvrrrtfknrlaerykenlpgvdvfvctadphaeppslvistilsvmaynypsekisvylsddggsiltfyalweasmfakkwlpfcrrynieprspaayfseseghhnlcspkewsfiknlyeemreridsavmsgkipeeiklkhkgfdewnsemtsknhqpivqvlidgksqnavdddgnvlptlvymarekspqyhhnfkagalnalirvsalisdspvilnvdcdmysnnsdsirdalcffldeemshkigfvqypqnynnmtknniygnslnvinhvemrgldsaggclyigtgcfhrreilcgkkfskdykedwgrgikerghenideieekakslatctyelrtqwgneigvkygcpvedvitglaihcrgwesvymepqraafvgvapatlaqtilqhkrwsegnftiflskhntflfghgkislqlqmgyciyglwaanslptiyyvmipalglvkgtplfpeimspwatpfiyvfcvktlyslyeallsgdtlkgwwngqrmwmvkritsylygfidtirkllglskmsfeitakvsdgdeakryeqeilefgssspefviiatvallnfvclvaglskimagvwnvflpqvilcglivitnipiyeamfvrkdkgriplpvtlasigfvmlafllpiv*

42、与现有技术相比，本发明的有益效果：

43、本发明利用crispr/cas9技术创制的oscsle6功能缺失突变体植株，可以提高转基因植株在干旱胁迫条件下的苗期存活率，提高成株期抗旱性。可以应用于改良栽培稻的抗旱性。