一种具有肠屏障保护功能的五肽LK5及其应用

本发明涉及一种小分子肽及其应用，具体涉及一种具有肠屏障保护功能的五肽lk5及其在肠屏障保护功能食品和慢性结肠炎缓解/治疗药物中的应用，属于生物。

背景技术：

1、炎症性肠病是一种慢性、复发性、炎症性肠道疾病，主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病，其病理表现包括肠屏障损伤、隐窝结构破坏、基础浆细胞增加、淋巴细胞聚集和固有层纤维化等。有研究表明，长期的炎症性肠病会增加结肠癌症风险。

2、肠屏障功能损伤既是炎症性肠病的病理表现，也被认为是炎症性肠病发病机制之一。因此，保护/恢复肠屏障功能，是治疗炎症性肠病的新思路。机械屏障是肠屏障的重要组成部分，正常状态下，细胞在紧密连接蛋白（zo）的作用下紧密连接封闭了相邻肠上皮细胞间的空隙，阻止了肠腔内细菌、抗原等物质进入肠黏膜固有层以激活固有层内的免疫细胞，避免了黏膜异常免疫反应的发生。其中，紧密连接蛋白1（zo-1）是一种重要的紧密连接蛋白，与肠屏障功能密切相关。目前对于炎症性肠病有部分治疗药物，但具有一定副作用。来源于食源性蛋白酶解的活性肽具有特异性高、毒副作用小、疗效好、可用药剂量更大等优点，是保护肠道屏障、缓解炎症性肠病的好策略。

3、动物、植物等不同来源的蛋白原料，在不同的酶解工艺中，会获得不同酶解液。酶解液是一系列结构各异、序列多样和功能各有侧重的活性肽集合。具有肠屏障保护和肠道炎症缓解功能的活性肽氨基酸组成和结构差别很大，没有固定或统一氨基酸组成。食物蛋白酶解产物成分相当复杂，即使使用相同的蛋白原料，因酶解工艺不同也会产生不同的产物组分。因此，从不同蛋白来源、不同制备工艺获得的酶解物中筛选具有肠屏障保护和肠道炎症缓解功能的活性肽策略，具有特异性。

4、xing-wei xiang等在文章《protective effect of tuna bioactive peptide ondextran sulfate sodium-induced colitis in mice》中报道了金枪鱼废弃物酶解液在dss诱导结肠炎小鼠模型中具有抗炎和抗氧化作用，但是并未进一步完成其中活性组分及其序列的鉴定；jin-woo hwang等在文章《purification and characterization of anovel peptide with inhibitory effects on colitis induced mice by dextransulfate sodium from enzymatic hydrolysates of crassostrea gigas》中报道了太平洋牡蛎酶解液具有缓解结肠炎的功能，并进一步聚焦到其中序列为qcqcavegg的功能肽；arranz a等在文章《vasoactive intestinal peptide as a healing mediator in crohn’s disease》中报道了从鱼皮明胶酶解液中获得的活性肽gpa在dss诱导结肠炎小鼠模型中具有修复肠上皮屏障损伤、降低il-6、il-12和活性氧含量的作用；ziyan wang等在文章《targeted screening of an anti-inflammatory polypeptide from rhopilemaesculentum kishinouye cnidoblasts and elucidation of its mechanism inalleviating ulcerative colitis based on an analysis of the gut microbiota andmetabolites》中报道了从沙蛰蛋白酶解液中获得的活性肽pkkvv在dss诱导结肠炎小鼠模型中具有修复肠上皮屏障损伤、靶向作用于zo-1的作用。

5、金枪鱼为大洋性下层鱼类，具有高蛋白、低脂肪等特点，是非常值得推广的水产资源。金枪鱼蛋白是制备生物活性肽的良好来源。目前，已经发现并评估了金枪鱼多肽具有抗氧化、降血压、抗糖、减肥和降尿酸等功能。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种筛选自金枪鱼酶解液、具有肠屏障保护功能、可以应用于肠屏障保护功能食品和慢性结肠炎缓解/治疗药物中的五肽lk5。

2、为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

3、一种具有肠屏障保护功能的五肽lk5，所述五肽lk5的氨基酸序列为lerak，如序列表seq id no：3所示。

4、前述具有肠屏障保护功能的五肽lk5在肠屏障保护功能食品或慢性结肠炎缓解/治疗药物中的应用。

5、当前述具有肠屏障保护功能的五肽lk5应用在慢性结肠炎缓解/治疗药物中时，所述五肽lk5通过固相合成获得，固相合成方法具体如下：采用fmoc固相合成策略，以fmoc保护的氨基酸为原料，选用聚苯乙烯树脂作为固相载体，按照亮氨酸-谷氨酸-精氨酸-丙氨酸-赖氨酸的顺序，使肽链从c端向n端延伸，固相合成五肽lk5。

6、当前述具有肠屏障保护功能的五肽lk5应用在肠屏障保护功能食品中时，所述五肽lk5通过酶解金枪鱼获得，酶解金枪鱼的方法具体如下：

7、（1）取金枪鱼鱼肉，按照0.5％的酶底比加入复合酶进行酶解，酶解温度为55℃，ph值为8，酶解时间为6h，得到酶解产物，其中，所述复合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶按照1:1的质量比混合而成；

8、（2）酶解结束后，用八层纱布对酶解产物进行过滤，去除残渣，得到澄清的多肽酶解液；

9、（3）冻干上述多肽酶解液，得到金枪鱼肽样品，所述金枪鱼肽样品中含有较多的五肽lk5。

10、本发明的有益之处在于：本发明得到的肠屏障保护五肽lk5从金枪鱼酶解液中提取得到，与紧密连接蛋白1（zo-1）具有潜在相互作用，能显著降低结肠炎模型小鼠的炎症反应、增加肠屏障功能蛋白表达、保护和缓解因建模药物导致的小鼠肠道屏障损伤，可以有效地用于肠屏障保护功能食品和慢性结肠炎缓解/治疗药物中。

技术特征：

1.一种具有肠屏障保护功能的五肽lk5，其特征在于，所述五肽lk5的氨基酸序列为lerak，如序列表seq id no：3所示。

2.权利要求1所述的具有肠屏障保护功能的五肽lk5在慢性结肠炎缓解/治疗药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述五肽lk5通过固相合成获得。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述五肽lk5的固相合成方法具体如下：采用fmoc固相合成策略，以fmoc保护的氨基酸为原料，选用聚苯乙烯树脂作为固相载体，按照亮氨酸-谷氨酸-精氨酸-丙氨酸-赖氨酸的顺序，使肽链从c端向n端延伸，固相合成五肽lk5。

5.权利要求1所述的具有肠屏障保护功能的五肽lk5在肠屏障保护功能食品中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述五肽lk5通过酶解金枪鱼获得，酶解金枪鱼的方法具体如下：

技术总结
本发明公开了一种具有肠屏障保护功能的五肽LK5及其应用，属于生物技术领域。所述五肽LK5的氨基酸序列为LERAK，该五肽LK5从金枪鱼酶解液中提取得到，与紧密连接蛋白1（ZO‑1）具有潜在相互作用，能显著降低结肠炎模型小鼠的炎症反应、增加肠屏障功能蛋白表达、保护和缓解因建模药物导致的小鼠肠道屏障损伤，可以有效地用于肠屏障保护功能食品和慢性结肠炎缓解/治疗药物中。

技术研发人员：秦松,解桂珍,芦晨阳,李文军,刘超,张启华,孟鹏飞
受保护的技术使用者：中国科学院烟台海岸带研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15