蚁灵口服液指纹图谱的建立方法与流程

本发明涉及药物分析检测，具体涉及一种蚁灵口服液指纹图谱的建立方法。

背景技术：

1、蚁灵口服液由鼎突多刺蚁（君药）、灵芝（臣药）、桑葚（臣药）、大枣（佐药）、陈皮（佐药）、续断（使药）制成，全方六味中药互相配伍，具有补肝肾、强筋骨之功效，主要用于肝肾亏损，筋骨不坚证，症见腰膝酸软，头晕眼花，体倦乏力，食少或兼睡眠不安者。

2、蚁灵口服液现有质量标准中仅采用薄层色谱法，以橙皮苷作为对照品，以陈皮、黑蚂蚁、灵芝作为对照药材，分别进行定性鉴别，同时采用高效液相色谱法对蚁灵口服液中橙皮苷一个成分进行含量测定，质控指标成分较少，无法全面表征中药复方制剂的物质基础以及化学成分群的整体性和复杂性。为更好地控制蚁灵口服液的质量，本发明针对蚁灵口服液药效成分建立了制剂的指纹图谱。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，通过该方法建立蚁灵口服液的指纹图谱，并可以对蚁灵口服液中多个药材的多个药效成分进行定性分析，能较全面的反映蚁灵口服液的质量信息，保证产品质量均一稳定。

2、本发明提供的一种蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，所述蚁灵口服液由鼎突多刺蚁、灵芝、桑葚、大枣、续断和陈皮组成；通过采用高效液相色谱法检测蚁灵口服液成分从而建立蚁灵口服液指纹图谱，所述建立方法包括以下步骤：

3、（1）供试品溶液的制备：取蚁灵口服液，用水饱和的正丁醇提取，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇溶解，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；

4、（2）对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷、柚皮芸香苷、川续断皂苷vi、川陈皮素、橘皮素对照品，加甲醇制成每1ml含有200~500μg橙皮苷、50~150μg柚皮芸香苷、150~200μg川续断皂苷vi、50~150μg川陈皮素、50~150μg橘皮素的对照品溶液；

5、（3）设置高效液相色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温25-35℃，流速为0.8-1.2ml/min，检测波长为200-400nm，并开启pda检测；以乙腈为流动相a，以体积分数为0.05-0.15%磷酸水溶液为流动相b，进行梯度洗脱，在体积比为2~65︰98~35的范围内梯度洗脱；

6、分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5~20μl，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；

7、（4）将步骤（3）得到的液相色谱导入国家药典委中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版分析，得到蚁灵口服液的指纹图谱。

8、优选地，所述步骤（1）的供试品溶液的制备包括：精密吸取蚁灵口服液20ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇20ml溶解，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

9、优选地，所述步骤（2）的对照品溶液中橙皮苷的浓度为387.63μg·ml-1，柚皮芸香苷的浓度为105.00 μg·ml-1，川续断皂苷vi的浓度为149.07μg·ml-1，川陈皮素的浓度为105.38μg·ml-1，橘皮素的浓度为102.89μg·ml-1。

10、优选地，所述步骤（3）包括：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以waterssymmetry c18为色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm，柱温35℃，流速为1.0ml/min，检测波长为203nm，并开启pda检测；以乙腈为流动相a，以体积分数为0.1%磷酸水溶液为流动相b，进行梯度洗脱，流动相a、b的比例变化为0~40min，a︰b为2%︰98%→30%︰70%；40~50min，a︰b为30%︰70%→44%︰56%；50~60min，a︰b为44%︰56%→65%︰35%；

11、分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱。

12、优选地，所述步骤（4）包括：采用国家药典委中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版，将步骤（3）得到的液相色谱的数据导入、多点校正、数据匹配，分析得到蚁灵口服液的指纹图谱。

13、优选地，所述步骤（4）得到的蚁灵口服液的指纹图谱包括柚皮芸香苷对应的19号峰、橙皮苷对应的21号峰、川续断皂苷vi对应的28号峰、川陈皮素对应的34号峰、橘皮素对应的36号峰，其相对保留时间依次对应为0.933、1.000、1.394、1.658、1.744。

14、优选地，所述步骤（4）得到的蚁灵口服液的指纹图谱的共有峰还包括相对保留时间为0.069的1号峰、相对保留时间为0.073的2号峰、相对保留时间为0.085的3号峰、相对保留时间为0.103的4号峰、相对保留时间为0.122的5号峰、相对保留时间为0.145的6号峰、相对保留时间为0.156的7号峰、相对保留时间为0.233的8号峰、相对保留时间为0.292的9号峰、相对保留时间为0.364的10号峰、相对保留时间为0.423的11号峰、相对保留时间为0.451的12号峰、相对保留时间为0.466的13号峰、相对保留时间为0.478的14号峰、相对保留时间为0.502的15号峰、相对保留时间为0.538的16号峰、相对保留时间为0.572的17号峰、相对保留时间为0.651的18号峰、相对保留时间为0.972的20号峰、相对保留时间为1.023的22号峰、相对保留时间为1.246的23号峰、相对保留时间为1.304的24号峰、相对保留时间为1.349的25号峰、相对保留时间为1.354的26号峰、相对保留时间为1.385的27号峰、相对保留时间为1.398的29号峰、相对保留时间为1.408的30号峰、相对保留时间为1.421的31号峰、相对保留时间为1.447的32号峰、相对保留时间为1.504的33号峰、相对保留时间为1.708的35号峰、相对保留时间为1.779的37号峰。

15、本发明的有益效果是：

16、1、用本发明所提供的方法所建立的蚁灵口服液指纹图谱，能有效地表征蚁灵口服液的质量，有利于全面监控药味的质量。

17、2、以蚁灵口服液的指纹图谱作为一个整体对待，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，既避免了因测定个别化学成分而判定蚁灵口服液质量的片面性，又减少了人为主观判断而造成误差的可能性和为质量达标而人为处理的可能性。

18、3、本发明方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好的优点。

技术特征：

1.一种蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述蚁灵口服液由鼎突多刺蚁、灵芝、桑葚、大枣、续断和陈皮组成；通过采用高效液相色谱法检测蚁灵口服液成分从而建立蚁灵口服液指纹图谱，所述建立方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（1）的供试品溶液的制备包括：精密吸取蚁灵口服液20ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇20ml溶解，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（2）的对照品溶液中橙皮苷的浓度为387.63μg·ml-1，柚皮芸香苷的浓度为105.00 μg·ml-1，川续断皂苷vi的浓度为149.07μg·ml-1，川陈皮素的浓度为105.38μg·ml-1，橘皮素的浓度为102.89μg·ml-1。

4.根据权利要求1所述的蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（3）包括：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以waters symmetry c18为色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm，柱温35℃，流速为1.0ml/min，检测波长为203nm，并开启pda检测；以乙腈为流动相a，以体积分数为0.1%磷酸水溶液为流动相b，进行梯度洗脱，流动相a、b的比例变化为0~40min，a︰b为2%︰98%→30%︰70%；40~50min，a︰b为30%︰70%→44%︰56%；50~60min，a︰b为44%︰56%→65%︰35%；

5.根据权利要求1-4中任一项所述的蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（4）包括：采用国家药典委中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版，将步骤（3）得到的液相色谱的数据导入、多点校正、数据匹配，分析得到蚁灵口服液的指纹图谱。

6.根据权利要求5所述的蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（4）得到的蚁灵口服液的指纹图谱包括柚皮芸香苷对应的19号峰、橙皮苷对应的21号峰、川续断皂苷vi对应的28号峰、川陈皮素对应的34号峰、橘皮素对应的36号峰，其相对保留时间依次对应为0.933、1.000、1.394、1.658、1.744。

7.根据权利要求6所述的蚁灵口服液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（4）得到的蚁灵口服液的指纹图谱的共有峰还包括相对保留时间为0.069的1号峰、相对保留时间为0.073的2号峰、相对保留时间为0.085的3号峰、相对保留时间为0.103的4号峰、相对保留时间为0.122的5号峰、相对保留时间为0.145的6号峰、相对保留时间为0.156的7号峰、相对保留时间为0.233的8号峰、相对保留时间为0.292的9号峰、相对保留时间为0.364的10号峰、相对保留时间为0.423的11号峰、相对保留时间为0.451的12号峰、相对保留时间为0.466的13号峰、相对保留时间为0.478的14号峰、相对保留时间为0.502的15号峰、相对保留时间为0.538的16号峰、相对保留时间为0.572的17号峰、相对保留时间为0.651的18号峰、相对保留时间为0.972的20号峰、相对保留时间为1.023的22号峰、相对保留时间为1.246的23号峰、相对保留时间为1.304的24号峰、相对保留时间为1.349的25号峰、相对保留时间为1.354的26号峰、相对保留时间为1.385的27号峰、相对保留时间为1.398的29号峰、相对保留时间为1.408的30号峰、相对保留时间为1.421的31号峰、相对保留时间为1.447的32号峰、相对保留时间为1.504的33号峰、相对保留时间为1.708的35号峰、相对保留时间为1.779的37号峰。

技术总结
本发明公开了一种蚁灵口服液指纹图谱的建立方法。以蚁灵口服液制备得供试品，以溶有橙皮苷的溶液为对照品溶液，通过高效液相色谱仪测定液相色谱；将得到的液相色谱导入国家药典委中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版分析，经多点校正，数据匹配，得到蚁灵口服液指纹图谱，获得的指纹图谱37个特征峰，检测到的化学成分较多，避免了因测定个别化学成分而判定蚁灵口服液整体质量的片面性，能有效地表征蚁灵口服液的质量，有利于全面监控药物的质量。本发明方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。

技术研发人员：鄂秀辉,陆湘龙,王石齐,刘武占,孙霞
受保护的技术使用者：湖南迪诺制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15