连接子的液相合成方法及其合成产物与流程

本发明涉及多肽偶合物合成，具体而言，涉及连接子的液相合成方法及其合成产物。

背景技术：

1、adc药物由抗体、linker、细胞毒素三部分组成，其中抗体是可以特异性的靶向特定抗原，在肿瘤细胞过表达，而在正常细胞低表达和不表达。linker是作为adc药物的桥梁，通过可切割和不可切割的连接子与抗体连接，linker具有在生理状态下的稳定性，又要在特定部位释放的特征。而细胞毒素具有高毒性活性和低免疫的特征，且具有与linker连接的活性基团和明确的作用机理。

2、下述式(1)所示化合物为常用的连接子(linker)

3、现有的合成工艺中采用fmoc-val-oh、h-cit-oh、4-氨基苄醇和对硝基苯氯甲酸酯进行反应，继而由前至后依次连接氨基酸的方案形成该连接子，但是fmoc-val-cit的合成中产品晶型较差，纯化操作难度极大，不易操作，导致此中间体纯度不高；fmoc-val-cit-pab的合成中由于反应速率较慢，反应时间长达36h，时间成本昂贵，且纯度不高；fmoc-val-cit-pab-pnp的合成中采用制备液相得到纯度较高的化合物，纯化成本高昂，收率较低不利于工业化生产。

4、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供连接子的液相合成方法及其合成产物。本发明实施例提供一种新的液相合成方法，提高了原料的转化率，能够提升产物的收率和纯度。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供一种连接子的液相合成方法，其参照下述合成路径进行合成：

4、

5、在可选的实施方式中，形成中间体a的步骤包括：将fmoc-l-cit与对氨基苯甲醇通过缩合剂进行缩合反应；

6、优选地，形成中间体a的步骤包括：将所述fmoc-l-cit、所述对氨基苯甲醇、所述缩合剂和溶剂混合进行缩合反应；

7、或者形成中间体a的步骤包括：将所述fmoc-l-cit、所述对氨基苯甲醇、所述缩合剂、碱和溶剂混合进行缩合反应；

8、优选地，还包括：缩合反应结束后进行后处理，后处理包括过滤、甲基叔丁基醚和二氯甲烷进行打浆，而后过滤和烘干。

9、在可选的实施方式中，所述缩合剂选自n,n"-二异丙基碳二亚胺、2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉、n,n"-二环己基碳二亚胺、n,n"-羰基二咪唑、n-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑、对硝基酚和五氟苯酚中的任意一种或者两种及以上；优选n,n"-二环己基碳二亚胺与1-羟基苯并三唑；

10、采用的有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、dmf、甲醇、氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为dmf；

11、采用的碱为三乙胺、n，n-二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钠或者dbu中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选n，n-二异丙基乙胺；

12、优选地，所述fmoc-l-cit、所述对氨基苯甲醇和所述缩合剂的摩尔比为1:1-1.3：2-2.8；

13、优选地，所述fmoc-l-cit、所述对氨基苯甲醇、所述n,n"-二环己基碳二亚胺和所述1-羟基苯并三唑的摩尔比为1：1-1.3：1-1.5：1-1.3,最佳为1：1.05：1.2：1.3；

14、优选地，缩合反应的温度为-10至0℃，时间为10-30小时，优选温度为-10℃；时间为18小时。

15、在可选的实施方式中，形成中间体b的步骤包括：将中间体a通过有机碱脱除fmoc；

16、优选地，形成中间体b的步骤包括：将所述中间体a、所述有机碱和溶剂混合进行反应；

17、优选地，还包括：反应结束后进行后处理，后处理包括：浓缩去除溶剂、而后调节ph再利用乙酸乙酯萃取，接着，收集水相。

18、在可选的实施方式中，所述有机碱包括哌啶、二氮杂二环、二乙胺、乙醇胺、环己胺和吗啡啉中的任意一种，优选为二乙胺；

19、所述溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、dmf、甲醇和氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为dmf；

20、优选地，所述中间体a和所述有机碱的质量比为1：0.5-3，优选为1:2.5；

21、所述反应温度为0-40℃，优选为25℃，时间为1-8小时，优选为6小时。

22、在可选的实施方式中，形成中间体c的步骤包括：将fmoc-l-val-oh与中间体b通过缩合剂缩合进行缩合反应；

23、优选地，形成中间体c的步骤包括：将所述fmoc-l-val-oh、所述中间体b、所述缩合剂、溶剂和碱混合进行缩合反应；

24、优选地，还包括：缩合反应结束后进行后处理，后处理包括：将反应液冷却析晶，而后过滤，烘干。

25、在可选的实施方式中，所述缩合剂包括：n,n"-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、n,n"-二环己基碳二亚胺、n-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑、对硝基酚和五氟苯酚中的任意一种或两种及以上；优选1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐与1-羟基苯并三唑；

26、所述溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、水、乙腈、dmf、二氯甲烷和氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为dmf；

27、所述碱包括三乙胺、n，n-二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钠和dbu中的任意一种，优选三乙胺；

28、优选地，所述fmoc-l-val-oh、所述中间体b和所述缩合剂的摩尔比为1:1-1.3:2-2.8；

29、优选地，所述fmoc-l-val-oh、所述中间体b、所述1-羟基苯并三唑和所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比为1：1-1.3：1-1.3：1-1.5；最佳为1：1.05：1.1：1.2；

30、优选地，所述反应温度为-10℃-0℃，优选为-5℃；反应时间为10-20小时，优选为15小时。

31、在可选的实施方式中，包括：将中间体c与二(对硝基苯)碳酸酯在碱性条件下进行酯交换反应；

32、优选地，包括：将所述中间体c、所述二(对硝基苯)碳酸酯、碱和溶剂混合进行酯交换反应；

33、优选地，包括：进行酯交换反应后，将反应液加入酯类溶剂中进行析晶，而后过滤干燥。

34、在可选的实施方式中，所述碱包括三乙胺、n，n-二异丙基乙胺、吡啶、n-甲基吗啉和dbu中的任意一种；优选n-甲基吗啉；

35、所述溶剂包括1,4-二氧六环、二甲基亚砜、dmf、四氢呋喃、二氯甲烷和氯仿中的任意一种或几种任意比例的混合物，优选为1,4-二氧六环；

36、优选地，中间体c、二(对硝基苯)碳酸酯和碱的摩尔比为1：1-4：1-4,最佳为1：1.5：2.5；

37、优选地，温度为-10-30℃，最佳为25℃,优选反应时间为2-8h，最佳为7h。

38、第二方面，本发明提供一种液相合成产物，其通过前述实施方式任一项所述的连接子的液相合成方法制备得到。

39、本发明具有以下有益效果：本发明实施例提供一种新的合成路线，先合成中间体片段，在对接前段氨基酸，最后连接后端活化酯的方式，继而可以改善现有技术中依次连接氨基酸形成的fmoc-val-cit带来晶型差，抽滤难以及纯化困难的问题，大幅提高了产物纯度、收率以及降低了时间成本。同时，fmoc-val-oh与cit-pab的转化率高，提升了中间体c的产率。