一株罗伊氏乳杆菌JK23及其冻干粉的制备方法和应用与流程

本发明属于微生物，具体涉及一株罗伊氏乳杆菌jk23及其冻干粉的制备方法和应用。

背景技术：

1、根据世界卫生组织统计，胃癌的发病率在全球排名第四，而且是所有癌症死亡率的第二高，被视为国际间重要的健康危机。“theglobal，regional，and national burdenof stomach cancer in 195 countries，1990-2017: a systematic analysis for theglobal burden of disease study 2017”这篇文章的研究报告，分析了1990年至2017年期间，195个国家和地区中，胃癌的发病率、死亡率和残疾调整生命年(daly)。而引发胃癌的罪魁祸首就是幽门螺杆菌。幽门螺杆菌是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌，主要寄生在胃幽门、胃窦等附近的黏膜上，是人类的唯—种已知的胃部细菌。67%～80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺杆菌引起的。

2、近年来，由于抗生素的耐药性逐年提高，幽门螺杆菌的根除率逐渐下降，业界一直在寻求提高幽门螺杆菌根除率的方法。于是，益生菌逐渐引起人们的重视。益生菌能够分泌直接杀灭幽门螺杆菌的细菌素，通过分泌有机酸抑制幽门螺杆菌的尿素酶活性，破坏细菌细胞壁或胞质膜，与幽门螺杆菌竞争黏附胃上皮细胞，抑制免疫炎症反应，刺激黏蛋白的分泌，增强胃黏膜屏障，从而促进胃肠道内菌群平衡，提高幽门螺杆菌的根除率，并减少不良反应。因此，通过益生菌及时而有效地杀灭幽门螺杆菌，对预防和控制胃癌有重大意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一株可对抗幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌jk23，从而有效地维持胃肠道内菌群的平衡，减少幽门螺杆菌的数量，降低胃炎、胃溃疡和胃癌的患病风险。

2、为了实现上述发明的目的，本发明通过以下技术方案进行实现：

3、一株罗伊氏乳杆菌（lactobacillus reuterl）jk23，保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.25133，保藏日期为2022年07月11日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

4、本发明还提供了一种包含罗伊氏乳杆菌jk23冻干粉的制备方法。

5、所述的包含罗伊氏乳杆菌jk23冻干粉的制备方法，其具体步骤如下：

6、（1）菌种制备

7、将罗伊氏乳杆菌jk23保藏菌株接种至灭菌的平板培养基上，于37℃恒温培养箱中培养12-36h。

8、（2）种子培养

9、将步骤（1）中培养好的罗伊氏乳杆菌jk23挑选1-5个单菌落接种至灭菌的种子培养基中，于37℃，静置培养12-24h。

10、（3）发酵培养

11、将步骤（2）培养好的种子液按照1%-5%的接种量转接至灭菌的发酵培养基中，于37℃，培养12-36h，培养过程中控制葡萄糖的浓度为0.1-0.5g/l，控制ph值为6.0-7.0（氨水调节），得到高密度的罗伊氏乳杆菌jk23的发酵液。

12、（4）收集菌体

13、发酵结束后，立即将发酵液降温至10℃-15℃，用高速离心机收集菌体；收集的菌体加入1-5倍的4-10℃纯化水进行复溶，再高速离心收集菌体；重复以上操作至上清液无色为止，收集菌体，获得菌泥。

14、（5）复配

15、按照菌泥：辅料=1:1~2（质量体积比）充分混合均匀。

16、（6）干燥

17、将步骤（5）的物料均勺的涂抹在冻干盘中，进行真空冷冻干燥，获得冻干粉。

18、（7）粉碎、包装

19、用40-100目的粉碎机进行粉碎；按照产品要求进行包装即可。

20、进一步的，所述步骤（1）中的平板培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/l，大豆蛋白胨10 g/l、酵母浸粉5 g/l，磷酸氢二钾1.0 g/l，七水硫酸镁0.2 g/l，琼脂15-20 g/l，ph=7.0±0.1。

21、进一步的，所述步骤（2）中的种子培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/l，大豆蛋白胨10 g/l，酵母浸粉5 g/l，磷酸二氢钾2 g/l，磷酸氢二钾1.5 g/l，七水硫酸镁1 g/l，ph=7.0±0.1，115-118℃灭菌20-30min。

22、进一步的，所述步骤（3）中的发酵培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/l，大豆蛋白胨10 g/l，酵母浸粉5 g/l，磷酸二氢钾2.5 g/l，磷酸氢二钾2 g/l，七水硫酸镁1.5 g/l，一水合柠檬酸1.5 g/l，硫酸亚铁0.0015 g/l，硫酸锰0.001 g/l，烟酥胺0.001 g/l，生物素0.002 g/l，盐酸硫铵0.001 g/l，ph=7.0土0.1，115-118℃灭菌20-30min。

23、进一步的，所述步骤（4）中的高速离心机为碟式离心机及管式离心机。

24、进一步的，所述步骤（5）中的辅料包括以下组分：食用玉米淀粉10-30 g/l、全脂乳粉10-25 g/l、海藻糖10-25 g/l、低聚果糖20-30 g/l、低聚异麦芽糖10-20 g/l。

25、本发明还提供了一种罗伊氏乳杆菌jk23在制备抑制幽门螺杆菌产品中的应用。

26、本发明的有益效果为：

27、（1）本发明通过控制发酵过程中的葡萄糖含量和发酵液的ph值，使得罗伊氏乳杆菌jk23的生长环境更加稳定，菌体数量、活性及稳定性大大提高。

28、（2）本发明提供的罗伊氏乳杆菌jk23具有很强的耐酸性，菌体存活率大大提高，从而可以有效地抑制幽门螺杆菌的增殖，减少了其在体内的数量，进而维持胃肠道内菌群的平衡，降低胃炎、胃溃疡和胃癌的患病风险。

技术特征：

1.一株罗伊氏乳杆菌（lactobacillus reuterl）jk23，保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.25133，保藏日期为2022年07月11日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.一种包含如权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌jk23的冻干粉。

3.一种制备如权利要求2所述的罗伊氏乳杆菌jk23冻干粉的方法，其特征在于，具体步骤如下：

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的平板培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/l，大豆蛋白胨10 g/l、酵母浸粉5 g/l，磷酸氢二钾1.0 g/l，七水硫酸镁0.2g/l，琼脂15-20 g/l，ph=7.0±0.1。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的种子培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/l，大豆蛋白胨10 g/l，酵母浸粉5 g/l，磷酸二氢钾2 g/l，磷酸氢二钾1.5 g/l，七水硫酸镁1 g/l，ph=7.0±0.1，115-118℃灭菌20-30min。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的发酵培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/l，大豆蛋白胨10 g/l，酵母浸粉5 g/l，磷酸二氢钾2.5 g/l，磷酸氢二钾2 g/l，七水硫酸镁1.5 g/l，一水合柠檬酸1.5 g/l，硫酸亚铁0.0015 g/l，硫酸锰0.001 g/l，烟酥胺0.001 g/l，生物素0.002 g/l，盐酸硫铵0.001 g/l，ph=7.0土0.1，115-118℃灭菌20-30min。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中的高速离心机为碟式离心机及管式离心机。

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（5）中的辅料包括以下组分：食用玉米淀粉10-30 g/l、全脂乳粉10-25 g/l、海藻糖10-25 g/l、低聚果糖20-30 g/l、低聚异麦芽糖10-20 g/l。

9.一种如权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌jk23在制备抑制幽门螺杆菌产品中的应用。

技术总结
本发明涉及一株罗伊氏乳杆菌JK23及其冻干粉的制备方法和应用，属于微生物技术领域。罗伊氏乳杆菌（lactobacillus reuterl）JK23，保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25133，保藏日期为2022年07月11日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明还提供了一种包含上述罗伊氏乳杆菌JK23的冻干粉以及罗伊氏乳杆菌JK23在制备抑制幽门螺杆菌中的应用。本发明提供的罗伊氏乳杆菌JK23具有很强的耐酸性，菌体存活率大大提高，从而可以有效地抑制幽门螺杆菌的增殖，减少了其在体内的数量，进而维持胃肠道内菌群的平衡，降低胃炎、胃溃疡和胃癌的患病风险。

技术研发人员：马凯,季锋
受保护的技术使用者：江苏新申奥生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/5