用于治疗不孕症的短肽

本发明涉及多肽领域，特别涉及一种通过治疗成纤维细胞生长因子1对子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制的用于治疗不孕症的短肽。

背景技术：

1、妊娠的成功是一个受到多维度、多方面调控的复杂过程，包括子宫内膜的蜕膜化、胚胎的植入以及母体胎盘的形成。这些过程能顺利的进行，与多种因素密切相关。

2、子宫内膜是一种复杂的多细胞组织，它会经历周期性的动态重塑以创建合适维持妊娠的微环境。当子宫内膜基质细胞不能完全分化为蜕膜化细胞时，会引发多种不良妊娠结局进而导致不孕症。其中，不良妊娠结局包括反复着床失败、反复流产和早产等。

技术实现思路

1、本发明之一提供了一种短肽，其氨基酸序列如seq id no.1、seq id no.2、seqidno.3和seq id no.4中的至少一种。

2、本发明之二提供了一种短肽修饰的脂质体，所述短肽为本发明之一所述的短肽。

3、在一个具体实施方式中，所述脂质体复合物的微粒≤500nm。

4、在一个具体实施方式中，所述脂质体复合物的微粒的大小为80至500nm。

5、在一个具体实施方式中，所述脂质体复合物的微粒≤100nm。

6、在一个具体实施方式中，所述脂质体复合物的微粒为80至100nm。

7、在一个具体实施方式中，所述脂质体复合物包括磷脂、胆固醇和柔性增强剂；其中，所述磷脂包括第一磷脂和第二磷脂，所述第一磷脂为含有氨基的磷脂，并且所述短肽修饰所述第一磷脂。

8、在一个具体实施方式中，所述第一磷脂为1,2-二脂酰-sn-甘油-3-磷酸-o-乙醇胺。

9、在一个具体实施方式中，所述第二磷脂可以为含有氨基的磷脂，也可以为不含氨基的磷脂，例如所述第二磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油和阳离子脂质体用磷脂(dotap)中的至少一种。

10、在一个具体实施方式中，所述第一磷脂和所述第二磷脂的摩尔比为1:(1-10)。

11、在一个具体实施方式中，所述磷脂与所述胆固醇的摩尔比为(1.5-9)：1。

12、在一个具体实施方式中，所述柔性增强剂为吐温、胆酸钠、脱氧胆酸钠、司盘中的至少一种。

13、在一个具体实施方式中，所述柔性增强剂与所述磷脂的摩尔比为1：(1-40)。

14、本发明之二所述的短肽修饰的脂质体复合物可以通过如下方法制备得到：

15、1)用本发明之一所述短肽修饰含有氨基的磷脂，制得短肽修饰的磷脂；

16、2)用短肽修饰的磷脂、磷脂、胆固醇和柔性增强剂制得短肽修饰的脂质体复合物。

17、在一个具体实施方式中，1-1)将短肽溶于缓冲液(例如pbs缓冲液)中，制得短肽溶液；

18、1-2)将含有氨基的磷脂溶于有机溶剂(例如氯仿)，制得含有氨基的磷脂溶液；

19、1-3)向短肽溶液中加入n-羟基琥珀酰亚胺溶液和(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液，在2至10℃下处理2至10小时，得到处理的短肽溶液；

20、1-4)向处理的短肽溶液中滴加含有氨基的磷脂溶液，在2至10℃下反应10至20小时，除去有机溶剂，得到反应液；

21、1-5)将反应液用乙醚萃取，分离出水相，得到萃取液；

22、1-6)将萃取液透析，然后干燥，得到短肽修饰的磷脂。

23、在一个具体实施方式中，2-1)用短肽修饰的磷脂、磷脂和胆固醇溶于有机溶剂(例如氯仿)中，制得磷脂-胆固醇混合液；

24、2-2)除去磷脂-胆固醇混合液中的有机溶剂，得到脂质薄膜；

25、2-3)将柔性增强剂溶于水(例如生理盐水)中，制得柔性增强剂溶液；

26、2-4)用柔性增强剂溶液将脂质薄膜水化，超声，制得悬浮液；

27、2-5)将悬浮液通过纳米膜挤出，得到短肽修饰的柔性脂质体复合物的均一化纳米悬浮液。

28、本发明之二所述的短肽修饰的脂质体复合物也可以通过常规技术制备得到。

29、本发明之三提供了一种组合物，其包括如本发明之一所述的短肽或本发明之二所述的短肽修饰的脂质体复合物，以及药学上可接受的载体。

30、本发明之四提供了根据本发明之一所述的短肽、本发明之二所述的短肽修饰的脂质体复合物或本发明之三所述的组合物在制备用于治疗成纤维细胞生长因子1对子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制的药物中的应用。

31、在一个具体实施方式中，所述应用为用于治疗由于成纤维细胞生长因子1对子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制导致的不良妊娠结局。

32、在一个具体实施方式中，所述子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制导致的不良妊娠结局包括反复着床失败、反复流产和早产中的至少一种。

33、本发明的有益效果：

34、本发明在体外实验首次发现，成纤维细胞生长因子1会显著抑制子宫内膜基质细胞的正常蜕膜化过程，即成纤维细胞生长因子1对子宫内膜基质细胞蜕膜化有抑制作用，而子宫内膜基质细胞蜕膜化被抑制后，会引发多种不良妊娠结局，因此，高水平的成纤维细胞生长因子1会导致包括反复着床失败、反复流产和早产的不良妊娠结局。这与发明人在临床中发现的患有反复着床失败、反复流产和早产的女性，其子宫组织中成纤维细胞生长因子1的表达水平，尤其在月经周期中的增殖期和分泌期，显著高于正常女性结果一致。

35、进一步地，本发明研发了四条短肽，这四条短肽均可改善成纤维细胞生长因子1对子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制作用，进而可以使子宫内膜基质细胞正常蜕膜化，因而其具有治疗不孕症的潜质。

36、为了将短肽递送到子宫基质细胞层，本发明制备了纳米级短肽修饰的脂质体微粒。

1.一种短肽，其氨基酸序列如seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3和seq id no.4中的至少一种。

2.一种短肽修饰的脂质体复合物，所述短肽为权利要求1所述的短肽；

3.根据权利要求2所述的脂质体复合物，其特征在于，所述脂质体复合物包括磷脂、胆固醇和柔性增强剂；其中，所述磷脂包括第一磷脂和第二磷脂，所述第一磷脂为含有氨基的磷脂，并且所述短肽修饰所述第一磷脂。

4.根据权利要求3所述的脂质体复合物，其特征在于，所述第一磷脂为1,2-二脂酰-sn-甘油-3-磷酸-o-乙醇胺；和/或

5.根据权利要求3所述的脂质体复合物，其特征在于，所述磷脂与所述胆固醇的摩尔比为(1.5-9)：1。

6.根据权利要求3所述的脂质体复合物，其特征在于，所述柔性增强剂为吐温、胆酸钠、脱氧胆酸钠、司盘中的至少一种；

7.一种组合物，其包括如权利要求1所述的短肽或权利要求2至6中任意一项所述的短肽修饰的脂质体复合物，以及药学上可接受的载体。

8.根据权利要求1所述的短肽、权利要求2至6中任意一项所述的短肽修饰的脂质体复合物或权利要求7所述的组合物在制备用于治疗成纤维细胞生长因子1对子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用为用于治疗由于成纤维细胞生长因子1对子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制导致的不良妊娠结局。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述子宫内膜基质细胞蜕膜化抑制导致的不良妊娠结局包括反复着床失败、反复流产和早产中的至少一种。