用于生长可食用肉制品的基材的制作方法

本发明涉及可食用肉制品领域，特别地涉及用于生长可食用肉制品的基材。

背景技术：

1、细胞培养基材用于支持细胞的附着、增殖和分化。在一些组织工程应用中，细胞培养基材包括配置成支持形成单层和多层细胞片的基本上三维的基材(例如，支架)和/或基本上二维的基材(例如，培养皿)。然而，仍然需要允许改善细胞片的生长、保留、粘附和/或释放的特征的基材。例如，需要减少细胞片从基材过早脱离。因此，需要额外的基材、系统和制造用于培养细胞和形成单层和多层细胞片的基材的方法。

技术实现思路

1、这里描述的是可食用肉制品基材、制备可食用肉制品的方法及其制造方法。通常，本文所述的设备、系统和方法使用用于生长可食用肉制品的基材。通常，这些方法包括以下步骤：将多个非人类细胞施加到至少一个图案化纹理基材上，在图案化纹理基材上生长非人类细胞以形成可食用肉制品，以及将可食用肉制品与图案化纹理基材分离。可食用肉制品可包括细胞片。

2、在一些实施方式中，可以在没有非天然分泌的外源支架的情况下施加多个非人类细胞。在一些实施方式中，细胞片可以通过细胞分泌的细胞外基质保持完整。在一些实施方式中，将可食用肉制品与图案化分离包括将细胞片与图案化纹理基材分离。在一些实施方式中，可食用肉制品可以同时与图案化纹理基材分离。在一些实施方式中，将可食用肉制品与图案化纹理基材分离可包括诱导细胞收缩、细胞松弛和机械脱离中的一种或多种。

3、在一些实施方式中，所述方法还可以包括将多个图案化纹理基材布置在三维格子中。在一些实施方式中，所述方法还可以包括将至少一个图案化纹理基材布置在生物反应器中。在一些实施方式中，所述方法还可以包括将第一图案化纹理基材定位成邻近第二图案化纹理化基材并且在第一和第二图案化纹理之间递送细胞培养基。

4、在一些实施方式中，可食用肉制品的体积在约0.0001m3和约0.1m3之间。在一些实施方式中，施加多个非人类细胞持续至少7天。在一些实施方式中，施加多个非人类细胞持续至少14天。在一些实施方式中，在图案化纹理基材上生长细胞促进基于图案化纹理基材的细胞对齐。在一些实施方式中，细胞可包括来自家畜、家禽、猎物和水生动物物种的一种或多种细胞。在一些实施方式中，细胞可包括来自脊椎动物和无脊椎动物物种中的至少一种的一个或多个细胞。在一些实施方式中，细胞可以包括成肌细胞、成血管细胞(mesangioblasts)、成肌纤维细胞、间充质干细胞、肝细胞、成纤维细胞、周细胞、脂肪细胞、上皮细胞、软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、多能细胞、体干细胞和内皮细胞中的一种或多种。

5、在一些实施方式中，图案化纹理基材可包括多个通道，每个通道具有约0.01μm和约100μm之间的深度以及约1μm和约5mm之间的宽度，其中相邻的通道彼此分离至少约5μm。在一些实施方式中，图案化纹理基材可以是基本上平面的。

6、在一些实施方式中，用于生长可食用肉制品的基材可包括表面，该表面包括至少一种图案化纹理，其中所述至少一种图案化纹理被配置为促进以下中的一种或多种：可食用肉制品在基材上的生长、可食用肉制品在基材上的粘附、可食用肉制品在基材上的保留以及可食用肉制品从基材的释放。可食用肉制品可包括完整的细胞片。

7、在一些实施方式中，基材可以包括多个区域，其中基材的每个区域可以包括图案化纹理中的至少一种。在一些实施方式中，两个或更多个区域包括相同的图案化纹理。在一些实施方式中，基材可包括约10μm和约10cm之间的厚度。在一些实施方式中，基材可包括固体材料或半固体材料。

8、在一些实施方式中，多个区域的组可以周期性地布置。在一些实施方式中，多个区域的组可以非周期性地布置。

9、在一些实施方式中，基材可以限定基材尺寸并且至少一种图案化纹理限定表面尺寸，并且表面尺寸与基材尺寸的比可以在约0.0001:1和约0.1:1之间。在一些实施方式中，图案化纹理可具有预定的方向。在一些实施方式中，预定的方向可包括径向、圆形、非线性、点状和交叉影线图案中的一种或多种。在一些实施方式中，图案化纹理可包括通道、凹部和突起中的一种或多种。

10、在一些实施方式中，图案化纹理可包括多个通道，每个通道具有约0.01μm和约100μm之间的深度以及约1μm和约5mm之间的宽度。相邻的通道可以彼此分离至少约5μm。

11、本文还描述了细胞培养基材、使用细胞培养基材培养细胞的方法及其制造方法。通常，本文所述的设备、系统和方法使用细胞培养基材来生长细胞群并将细胞群粘附至所述基材的表面。细胞培养基材的表面包括至少一种图案化纹理，与不包括图案化纹理的表面相比，所述图案化纹理允许改善细胞在基材上的生长、粘附和保留中的一种或多种，和/或改善细胞从基材的释放。

12、在一些实施方式中，细胞培养基材的表面可包括多个区域，其中每个区域具有图案化纹理。在这些实施方式中的一些实施方式中，两个或更多个区域具有相同的图案化纹理。在这些实施方式中的一些实施方式中，多个区域的组被周期性地布置。在这些实施方式中的一些实施方式中，多个区域的组被非周期性地布置。

13、在一些实施方式中，细胞通过细胞分泌的细胞外基质保持在一起以形成细胞片。在一些实施方式中，细胞在细胞片中。在一些实施方式中，不包括图案化纹理的表面不存在表面改性。在一些实施方式中，图案化纹理包括多种表面特征。在一些实施方式中，基材限定基材尺寸并且至少一种图案化纹理限定表面尺寸，并且表面尺寸与基材尺寸的比在约0.0001:1和约0.1:1之间。在这些实施方式中的一些实施方式中，至少一种图案化纹理包括彼此平行的线性通道组。

14、在一些实施方式中，图案化纹理具有预定的方向。在一些实施方式中，预定的方向包括径向、圆形、非线性、点状和交叉影线图案中的一种或多种。在一些实施方式中，图案化纹理具有随机空间分布图案。

15、在一些实施方式中，基材允许细胞片完整和/或同时从基材释放。在一些实施方式中，基材抑制细胞片从基材释放。

16、在一些实施方式中，图案化纹理包括通道、凹部和突起中的一种或多种。在一些实施方式中，图案化纹理包括多个通道，每个通道具有约0.01μm和约100μm之间的深度以及约1μm和约5mm之间的宽度，其中相邻的通道彼此分离至少约5μm。在一些实施方式中，基材由固体材料或半固体材料组成。在一些实施方式中，基材具有约10μm和约10cm之间的厚度。

17、在一些实施方式中，基材与至少一个其他细胞培养基材相邻布置。在一些实施方式中，将多个基材布置在三维格子中。在一些实施方式中，将基材放置于培养容器中和/或与培养容器一体，其中培养容器选自以下中的一种或多种：生物反应器、孔、培养皿、板、烧瓶、瓶子、罐、盒和固定表面。在一些实施方式中，所述细胞包括成肌细胞、成血管细胞、成肌纤维细胞、间充质干细胞、肝细胞、成纤维细胞、周细胞、脂肪细胞、上皮细胞、软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、周细胞、多能干细胞、体干细胞和内皮细胞中的一种或多种。在一些实施方式中，细胞包括来自人类、灵长类、家畜、家禽、猎物和水生动物物种的一种或多种细胞。在一些实施方式中，细胞包括来自脊椎动物和无脊椎动物物种的一种或多种细胞。

18、在一些实施方式中，表面基本上是平面的。在一些实施方式中，表面不是平面的，例如滚瓶。在一些实施方式中，基材不包括非天然分泌的外源支架。

19、此处还描述了用于改善细胞在细胞培养基材上的生长、粘附和保留中的一种或多种，和/或改善细胞从基材释放的方法。通常，这些方法包括使细胞群与细胞培养基材接触的步骤。

20、在一些实施方式中，所述方法包括将细胞从基材脱离为细胞片。在一些实施方式中，所述方法包括将细胞从预定的部分的组中的基材脱离。在一些实施方式中，所述方法包括将细胞从基材脱离，产生多个随机生成的/随机大小的部分。在一些实施方式中，所述方法包括将细胞脱离为细胞片，包括诱导细胞收缩、细胞松弛和机械脱离中的一种或多种。

21、在一些实施方式中，所述方法包括以平行板配置布置多个细胞培养基材。在一些实施方式中，所述方法包括在相邻的细胞培养基材之间递送细胞培养基。在一些实施方式中，所述方法包括将细胞培养基递送至基材表面。在一些实施方式中，递送至基材的细胞培养基流与至少一种图案化纹理对齐。在一些实施方式中，所述方法包括在细胞培养基材上形成一种或多种图案化纹理，其中所述基材包括对应于所述一种或多种图案化纹理的多个区域。

22、在一些实施方式中，所述方法包括形成一种或多种图案化纹理，其中这种方法包括增材制造技术和减材制造技术中的一种或多种。在一些实施方式中，所述方法包括形成多种图案化纹理，包括机械加工、切割、碾磨、研磨、蚀刻、雕刻、压花、划痕、刻划、浇铸、排水、化学蚀刻、激光烧蚀、电子束光刻、溅射涂覆、气相沉积、印刷、粘接和焊接中的一种或多种。在一些实施方式中，所述方法包括周期性地布置多个区域。

23、在一些实施方式中，所述方法包括非周期性地布置多个区域。在一些实施方式中，基材被放置在培养容器中。在一些实施方式中，基材与至少一个其他细胞培养基材相邻布置。在一些实施方式中，将多个基材布置在三维格子中。在一些实施方式中，基材用于组织工程、生物医学、肿瘤学、纺织、诊断、治疗、合成生物学、生物修复、能量储存和生物传感器应用中的一种或多种。在一些实施方式中，将生物相容性涂层施加在基材的表面上。

24、这里还描述了生成包括可食用组织产物的细胞片的方法。通常，这些方法包括在本文所述的任何一种基材上培养细胞的步骤，其中细胞在没有外源提供的支架的情况下生长。

25、这里还描述了生成包括可食用组织产物的细胞片的方法。通常，这些方法包括在本文所述的任何基材上培养细胞(例如自我更新细胞，例如分化细胞)的步骤，其中细胞来源于脊椎动物、无脊椎动物、人类、灵长类家畜、家禽、猎物和水生动物物种。细胞在没有外源提供的支架的情况下生长。在一些实施方式中，本文所述的任何基材可由陶瓷组成。在一些实施方式中，本文所述的任何基材可被配置用于生长可食用肉制品。