一种用于辅助诊断阿尔兹海默症的血浆生物标志物组合

本发明涉及生物医药，特别是涉及一种用于辅助诊断阿尔兹海默症的血浆生物标志物组合。

背景技术：

1、阿尔兹海默症(alzheimer's disease,ad)是最常见的神经退行性疾病，是导致年龄相关的认知功能下降的主要疾病之一。其临床特征主要包括严重的记忆力下降、语言障碍、注意力下降等。年龄是患ad的主要风险因素，随着全球人口老龄化的不断加剧，ad患病率将不断升高。ad的两种主要核心病理为β-淀粉样蛋白(aβ)斑块和神经原纤维缠结(nft)，以及tau蛋白的过度磷酸化。淀粉蛋白样(aβ)沉淀被认为是认知功能障碍及ad的标志性病变，存在于神经元细胞外基质中，由不溶性淀粉样蛋白β肽(aβ)组成，该蛋白原是由较大的跨膜淀粉样蛋白β-前体蛋白(app)依次通过β和γ分泌酶的蛋白水解作用而产生的多肽。正常状态下，aβ蛋白可由多种细胞产生，通常与伴侣分子结合，并在血液、脑脊液中广泛存在，对神经元细胞具有促进生长及保护作用。但当app蛋白基因发生突变或aβ蛋白酶失活时，aβ蛋白异常性表达，在神经元细胞中过量聚集并形成寡聚沉淀并诱发多效应的级联毒性反应，最终导致神经元的凋亡，并影响认知功能。tau蛋白是一类微管相关蛋白，参与微管的形成及组装，其有6个异构体。临床研究发现，ad患者的血液及脑脊液中，tau蛋白及过度磷酸化的tau蛋白(p-tau)异常高表达，其中p-tau蛋白不能与微管结合，从而形成神经元纤维缠结(nft)，影响神经元的基本功能，研究认为，其是由于蛋白激酶活性增高和/或磷酸酯酶活性降低引起的tau过度磷酸化，同时该蛋白的异常也是导致aβ蛋白在神经元内异常聚集的原因之一。在一项临床研究中发现，70％以上的mci患者(1年后确诊为ad)的脑脊液中，tau及p-tau都有异常高表达，因此可以认为tau蛋白的异常在认知功能障碍发展过程中具有重要作用，该蛋白也是早期ad脑脊液生化诊断标志物并被纳入临床诊断标准。

2、尽管当下主要认为aβ淀粉样蛋白级联理论及tau蛋白的异常磷酸化是解释ad发病的主要假设，但现在多项研究表明炎症可能是导致ad神经变性的主要神经病理学特征。例如，在ad的早期病程中，活化的小胶质细胞能够吞噬并清除aβ，但随着ad的进程的延长，小胶质细胞的持续激活将会进一步导致ad病理的恶化——aβ的不断累积导致小胶质细胞增生并持续释放促炎因子，这些不但致使神经元损伤，同时导致小胶质细胞中用于降解aβ的酶活性降低，进而导致细胞对aβ的分解能力的降低，aβ的累积导致免疫反应不断被激活，从而进一步导致神经退行性病变。此外，外周单核细胞、星形胶质细胞也参与了ad介导的中枢炎症反应。

3、ad主要通过临床表现、神经影像学检查及脑脊液csf检查来进行联合诊断，但由于脑脊液csf检测费用及侵入性较高，早期及轻度患者往往难以接受，导致ad的早期筛查率较低。因此寻找ad特征性的血浆标志物，来用于便捷、快速及无创的早期筛查是非常必要的。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种用于辅助诊断阿尔兹海默症的血浆生物标志物组合，以解决上述现有技术存在的问题，该血浆生物标志物组合对阿尔兹海默症具有较高的诊断价值，具有重要的研究和临床应用价值。

2、维生素k依赖性蛋白s(pros1)是一类在血浆中高表达的抗凝因子，它不但与血栓、癌症等相关，同时也有研究发现其参与了神经炎症。研究发现在体外细胞中，aβ能诱导原代小胶质细胞促进pros1的分泌，同时在阿尔兹海默症小鼠模型中，也发现pros1在小鼠海马中过度表达。并在ad患者的血浆中也观察到pros1的增加，提示pros1是潜在的ad血浆生物标志物，并可能通过参与神经炎症发挥其对ad病理的调控作用。mirna是由20-22个核苷酸组成的非编码小rna，通过与mrna的互补区域结合来调节靶基因的表达。mirna在神经系统中表达丰富，是参与炎症反应的重要调节剂，早先有许多研究证明其可能反映神经退行性疾病的发病阶段，而且由于mirna在血液中稳定性远优于脑脊液中，因此本发明旨在寻找与神经炎症反应相关的mirna分子作为ad早期诊断的血液生物标志物。

3、基于此，本发明提供了如下方案：

4、本发明提供一种用于辅助诊断阿尔兹海默症的血浆生物标志物组合，所述血浆生物标志物组合包括蛋白标志物pros1以及mirna标志物hsa-mir-155-5p、hsa-mir-423-3p、hsa-mir-1307-3p、hsa-mir-150-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-454-3p和hsa-mir-26a-5p；

5、所述hsa-mir-155-5p、所述hsa-mir-423-3p、所述hsa-mir-1307-3p、所述hsa-mir-150-5p、所述hsa-mir-122-5p、所述hsa-mir-30d-5p、所述hsa-mir-454-3p和所述hsa-mir-26a-5p的核苷酸序列分别如seq id no.1-8所示。

6、进一步地，所述hsa-mir-155-5p、所述hsa-mir-423-3p、所述hsa-mir-1307-3p、所述hsa-mir-150-5p、所述hsa-mir-30d-5p、所述hsa-mir-454-3p和所述hsa-mir-26a-5p的表达量降低，所述hsa-mir-122-5p的表达量升高，同时所述pros1的表达量升高，提示受试者患有阿尔兹海默症的风险升高。

7、本发明还提供检测上述的血浆生物标志物组合在血浆中含量的试剂在制备辅助诊断阿尔兹海默症的产品中的应用。

8、进一步地，所述产品为试剂盒或试剂。

9、本发明还提供一种用于辅助诊断阿尔兹海默症的血浆mirna标志物，所述血浆mirna标志物为hsa-mir-155-5p、hsa-mir-423-3p、hsa-mir-1307-3p、hsa-mir-150-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-454-3p或hsa-mir-26a-5p；

10、所述hsa-mir-155-5p、所述hsa-mir-423-3p、所述hsa-mir-1307-3p、所述hsa-mir-150-5p、所述hsa-mir-122-5p、所述hsa-mir-30d-5p、所述hsa-mir-454-3p和所述hsa-mir-26a-5p的核苷酸序列分别如seq id no.1-8所示。

11、本发明还提供检测上述的血浆mirna标志物在血浆中含量的试剂在制备辅助诊断阿尔兹海默症的产品中的应用。

12、进一步地，所述产品为试剂盒或试剂。

13、本发明还提供一种用于辅助诊断阿尔兹海默症的蛋白标志物，所述蛋白标志物为pros1。

14、本发明还提供检测上述的蛋白标志物在血浆中含量的试剂在制备辅助诊断阿尔兹海默症的产品中的应用。

15、进一步地，所述产品为试剂盒或试剂。

16、本发明公开了以下技术效果：

17、本发明研究发现mirna hsa-mir-155-5p、hsa-mir-423-3p、hsa-mir-1307-3p、hsa-mir-150-5p、hsa-mir-122-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-454-3p和hsa-mir-26a-5p，以及蛋白pros1在阿尔兹海默症患者中存在差异表达，经验证，上述蛋白pros1和8个mirna对阿尔兹海默症具有较高的诊断价值，可以作为诊断阿尔兹海默症的血浆生物标志物。

18、本发明为诊断阿尔兹海默症提供了可靠的血浆生物标志物，具有重要的研究和临床应用价值。