一种新冠病毒数字PCR混检装置及方法

本发明涉及pcr检测，具体为一种新冠病毒数字pcr混检装置及方法。

背景技术：

1、随着全球新型冠状病毒感染病例不断被报道，新冠病毒核酸检测的时效性明显不足提高检测能力势在必行，目前的检测手段广泛采用传统的荧光定量pcr方法，pcr混检是一种检测样品中核酸的方法，其原理是将多个受检者的样本采集到同一个采样管中，然后集中提取核酸进行荧光定量pcr检测，可反映混采受检者的病毒携带状况，数字pcr是一种核酸分子绝定量技术，通过泊松分布校正得到目标基因的绝对靠拷贝数，无需标准品，具有灵敏好、精确度高、耐受抑制剂能力强等特点，可以提供比pcr更精准的核酸定量结果，有望大大提升检测时效；但在数字pcr仪检测前，对样本中病毒提取的过程较为繁琐，需要使用人员进行频繁操作，且将提取的样本加入pcr板中需要逐个加入样本，费时费力，增加使用人员的劳动强度，不利于对样本的大批量检测使用，降低混检效率，为此，提出一种新冠病毒数字pcr混检装置及方法。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供一种新冠病毒数字pcr混检装置及方法，以解决或缓解现有技术中存在的技术问题，至少提供一种有益的选择。

2、本发明的技术方案是这样实现的：一种新冠病毒数字pcr混检装置，包括台面、涡旋振荡器、离心机、移动机构、封盖机构、供料机构、两个夹取机构、加料机构、数字pcr仪和控制器；

3、所述涡旋振荡器安装于所述台面的上表面，用于对样本进行混合；

4、所述离心机安装于所述台面的上表面，且位于所述涡旋振荡器的一侧，用于对样本进行离心操作；

5、所述移动机构安装于所述台面的上表面，且位于所述涡旋振荡器和所述离心机的上方，用于调整样本的水平位置；

6、所述封盖机构安装于所述移动机构的上表面，且位于所述离心机的上方，用于调整所述离心机的开口的闭合；

7、所述供料机构安装于所述封盖机构的一侧，用于给样品提供所需物料；

8、两个所述夹取机构均安装于所述台面的上表面，两个所述夹取机构分别位于所述涡旋振荡器和所述离心机的一侧，用于对样品抓取；

9、所述加料机构安装于所述台面的上表面，所述加料机构还包括pcr板，所述pcr板位于所述台面的上表面，所述加料机构用于将样品均匀加入pcr板中；

10、所述数字pcr仪安装于所述台面的上表面，位于所述加料机构的上方，用于对所述pcr板中的样本进行检测。

11、进一步优选的，所述台面还包括壳体，所述壳体固定连接于所述台面的上表面，所述数字pcr仪安装于所述壳体的顶部。

12、进一步优选的，所述移动机构还包括两个第一固定板，两个所述第一固定板固定安装于所述台面的上表面，两个所述第一固定板相邻的一侧固定连接有长方形框板，所述长方形框板的一侧安装有正反转电机，所述正反转电机安装于所述长方形框板的一侧，所述长方形框板中设有第二固定板，所述第二固定板的上表面固定连接有套筒，所述正反转电机的输出端固定连接有螺纹杆，所述螺纹杆的一端贯穿所述长方形框板和所述第二固定板，所述螺纹杆的外侧壁与所述第二固定板螺纹连接，所述螺纹杆的一端与所述长方形框板的内侧壁通过轴承转动连接。

13、进一步优选的，所述长方形框板的内侧壁对称开设有两个滑槽，两个所述滑槽的内侧壁均滑动连接有滑块，两个所述滑块相邻的一侧与所述第二固定板固定连接。

14、进一步优选的，所述封盖机构还包括u形板，所述u形板固定连接于所述长方形框板的上表面，所述u形板的上表面固定连接有第一电动推杆，所述第一电动推杆的伸缩端固定连接有第三固定板，所述离心机的上方设有盖板，所述盖板的外侧壁与所述第三固定板固定连接。

15、进一步优选的，所述u形板的一侧固定连接有第四固定板，所述第四固定板的一侧安装有第二电动推杆，所述第二电动推杆的伸缩端固定连接有第五固定板，所述第五固定板上安装有四个喷头。

16、进一步优选的，所述夹取机构还包括第三电动推杆，所述第三电动推杆固定安装于所述台面的上表面，所述第三电动推杆的伸缩端固定连接有电动夹爪，所述电动夹爪的夹持端对称固定连接有两个夹板。

17、进一步优选的，所述加料机构还包括箱体，所述箱体设于所述壳体的内部，所述箱体的后表面固定安装有振动电机，所述箱体的两侧均对称固定连接有三个弹簧，所述弹簧的一端与所述壳体固定连接，所述箱体的下表面均匀安装有多个注射管，所述箱体的内侧壁固定连接有导向板，所述壳体的内部顶壁固定安装有第四电动推杆，所述第四电动推杆的输出端固定连接有压板。

18、进一步优选的，所述壳体的一侧安装有控制器，所述控制器与所述正反转电机、第一电动推杆、第二电动推杆、第三电动推杆和振动电机电连接。

19、为了解决上述技术问题，本发明还提出了一种新冠病毒数字pcr混检方法：具体包括如下步骤：

20、s1、将样本添加到微量离心管中与裂解缓冲液混合，把离心管放入涡旋振荡器，混合时间为2min，缓冲液可高度变性由苯酚、异硫氰酸胍组成，病毒在裂解缓冲液提供的高度变性条件下裂解；

21、s2、把混合后的样本加入纯化柱，放入离心管进行离心，然后使用核酸纯化柱进行纯化，纯化柱放置收集管中，将样品上样到纯化柱，然后通过离心机离心操作，通过固相萃取，固定相由二氧化硅基质组成，在最佳盐离子和ph条件下，rna分子结合到硅胶膜上，同时蛋白质和其他污染物不被吸附；

22、s3、将纯化柱中离心后的样本连同纯化柱一起放入新的离心管中，加入洗涤缓冲液再次离心，离心后将纯化柱中的样本放入新的收集管中，添加洗涤缓冲液，再次放入离心机中5min，使洗涤缓冲液通过膜，去除膜上残留的杂质，使得硅胶膜上只结合rna；

23、s4、将洗涤后的样本连同纯化柱一起放入新的离心管中，加入洗脱缓冲液再次离心，洗涤后将纯化柱放入新的离心管中，加入洗脱缓冲液，再次通过离心机离心10min，使洗脱缓冲液通过膜，洗脱缓冲液使病毒rna，从纯化柱上洗脱，获得了去除蛋白、抑制剂和其他杂质的纯化过的rna；

24、s5、将离心管中的纯化柱取下，向离心管中加入预混液进行混合，制备用于pcr扩增的反应混合物，该预混液是预混合的浓缩液，包含缓冲液、逆转录酶、核苷酸、正向引物、反向引物、taqman探针和dna聚合酶，加入rna模板完成反应物混合，使用涡旋振荡器2混合；

25、s6、将反应物加入pcr板中，放入数字pcr仪中进行检测，pcr板为96个孔的pcr板，可以同时分析多个样品，将反应物放入数字pcr仪中，通过扩展靶序列来检测新型冠状病毒。

26、本发明实施例由于采用以上技术方案，其具有以下优点：

27、本发明使用的过程中，通过移动机构、供料机构和夹取机构的相互配合，提高对样本提取的自动化操作，减少使用人员的操作步骤，且通过加料机构的设置，将提取后的样本均匀快速的添加到pcr板上，不需要使用人员逐个加入样本，省时省力，降低使用人员的劳动强度，利于对样本的大批量检测使用，提高混检效率。

28、上述概述仅仅是为了说明书的目的，并不意图以任何方式进行限制。除上述描述的示意性的方面、实施方式和特征之外，通过参考附图和以下的详细描述，本发明进一步的方面、实施方式和特征将会是容易明白的。