人源化4-1BB单克隆抗体及其药物组合物的制作方法

本发明涉及人源化的4-1bb单克隆抗体、其抗原结合片段、其药物组合物以及医药用途。

背景技术：

1、4-1bb(也称为cd137或tnfrsf9)属于tnfr超家族，分子量50-55kda，表达于t细胞、nk细胞，nkt细胞、树突细胞(dc)、tregs以及pdca+b细胞上。4-1bb与表达于apc细胞上的高亲和性配体4-1bbl结合，从而促进t细胞增殖，增强细胞因子生成，并阻止激活诱导的细胞死亡(aicd)。

2、激动性抗4-1bb单克隆抗体(mab)对各种自身免疫疾病和病毒感染具有显著的抑制作用。许多研究表明，4-1bb在类风湿性关节炎(ra)的发病机制中扮演重要角色。在ra病人中，可溶性4-1bb和4-1bbl的水平均高于健康人群，并且它们的水平与疾病严重程度相关。在抗4-1bb抗体治疗的关节炎小鼠中，大量出现共表达cd11c标记物的cd8+t细胞亚群。该cd11c+cd8+t细胞被证实是关节炎症状减轻的原因。进一步研究证实，4-1bb抗体诱导的cd11c+cd8+t细胞表达高水平的ifn-γ。实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(eau)是一种眼血管层的炎症性疾病，可导致视力受损，甚至失明。研究表明，4-1bb抗体与一种eau诱导剂(irbp)一同给药使cd11c+cd8+ifn-g+t细胞和ido+dc大量扩增，共同抑制病原性cd4+t细胞。此外，4-1bb抗体还被用来治疗其他自身免疫疾病，包括多发性硬化(ms)、i型糖尿病(t1d)和狼疮。研究还发现，4-1bb抗体可以干扰某些病毒感染，如hsv-1，日本乙型脑炎病毒(jev)、牛痘病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)。

3、4-1bb抗体体内抗肿瘤效果是melero等在1997年首次发现，抗4-1bb抗体抑制小鼠体内低免疫原性肉瘤和高免疫原性肥大细胞瘤的生长。随后，研究者们证实，4-1bb抗体单独或与其他抗肿瘤药物可发挥强大的抗肿瘤作用。当4-1bb抗体被注射至scid肿瘤小鼠时，肿瘤生长显著受到抑制。4-1bb抗体处理携带肉瘤细胞或胶质瘤细胞的小鼠，可延长小鼠的生存期并且导t细胞依赖性的致肿瘤退化。而且，4-1bb抗体还显示出在内皮肿瘤、肾细胞瘤、肺癌中的治疗作用。此外，大量研究显示，当4-1bb抗体与其他抗癌剂联合使用时，它们具有更佳的效果。例如，4-1bb抗体/pd-1抗体组合、4-1bb抗体/ctla-4抗体组合、4-1bb抗体/gm-csf组合、4-1bb抗体/cd40抗体组合、顺铂/4-1bb抗体组合、环磷酰胺/4-1bb抗体组合、4-1bb抗体/细胞因子诱导的杀伤细胞组合、4-1bb抗体/cd4+t细胞消除组合、il-2/4-1bb抗体组合，等等。当与其他抗癌剂联合使用时，4-1bb抗体介导的抗肿瘤作用会被放大，这为治疗癌症提供了新的思路。4-1bb抗体的变体，例如4-1bb抗体的scfv，也具有显著的抗肿瘤效果，肿瘤内注射抗4-1bb scfv抑制hepa 1-6肿瘤，这种抗肿瘤作用依赖于增加的ifn-γ以及t细胞对肿瘤的渗透增加。

4、但是，目前4-1bb抗体还没有上市，多项临床研究都以失败告终，体内效果不理想和严重副作用(包括肝毒性、血小板减少、白细胞减少等)是其失败的主要原因。目前仅有两项4-1bb单抗处于临床试验中，分别是百时美施贵宝公司的完全人源化的urelumab，以及辉瑞公司的pf2566。因此，有必要提供更多的4-1bb抗体以满足市场需求。

技术实现思路

1、本发明提供一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包含：(1)重链互补决定区cdr1、cdr2、cdr3，所述cdr1包含seq id no:1或seq id no:4所示的氨基酸序列，所述cdr2包含seq id no:2或seq id no:5所示的氨基酸序列，所述cdr3包含seq id no:3所示的氨基酸序列；和(2)轻链互补决定区cdr1’、cdr2’、cdr3’，所述cdr1’包含seq id no:6所示的氨基酸序列，所述cdr2’包含seq id no:7所示的氨基酸序列，所述cdr3’包含seq id no:8所示的氨基酸序列。

2、本发明另一方面提供一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中重链可变区包含seq id no:9或seq id no:10所示的氨基酸序列，轻链可变区包含seq id no:11所示的氨基酸序列。

3、本发明另一方面还提供一种人源化的4-1bb单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包含重链和轻链，其中重链包含seq id no:12或seq id no:13所示的氨基酸序列，轻链包含seq id no:14所示的氨基酸序列。

4、本发明的另一方面还提供一种药物组合物，其包含本发明所述的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体。

5、本发明的另一方面还提供一种药品套装，所述药品套装包括独立存在的包含本发明的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段的第一制剂，以及独立存在的具有抗癌活性的第二制剂。所述第二制剂例如是pd-1抗体、ctla-4抗体、gm-csf、cd40抗体、顺铂、环磷酰胺、细胞因子诱导的杀伤细胞、il-2等。

6、本发明的另一方面还提供本发明所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎症性疾病或病毒感染的药物中的应用。

7、本发明提供的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段具有广泛的医疗用途，例如用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎症性疾病或病毒感染。一方面，本发明提供一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本发明所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。另一方面，本发明提供一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本发明所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。另一方面，本发明提供一种治疗炎症性疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本发明所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。另一方面，本发明提供一种治疗病毒感染的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本发明所述的结合人4-1bb的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段。

8、此外，本发明还提供生产本发明的抗体或其抗原结合片段的细胞系，包含本发明的核苷酸的重组表达载体，以及通过培养抗体生产细胞系来制备抗体的方法。

9、本发明提供的人源化单克隆抗体以高度亲和性和特异性结合人4-1bb，导致t细胞增殖和tnf-γ生成均显著增加，增强和刺激人4-1bb介导的免疫反应。这些抗体可被用作抗肿瘤或抗病毒免疫响应的免疫增强剂，或者作为t细胞介导的自身免疫疾病的免疫调节剂。这些抗体也可被用作诊断试剂，用于检测癌症、自身免疫疾病或其他疾病患者的血液或组织中的人4-1bb。