猫杯状病毒毒株及其疫苗组合物

本发明涉及生物医药，具体涉及动物疫苗，尤其涉及一种猫杯状病毒毒株及其疫苗组合物。

背景技术：

1、猫杯状病毒(feline calicivirus,fcv)是引起猫上呼吸道疾病最主要的病原之一，严重威胁宠物猫以及所有野生猫科动物的生命健康。fcv属于杯状病毒科，水疮性病毒属，是无囊膜的单股正链不分节段的rna病毒。成熟的fcv病毒粒子为球形，直径约为35-40nm。经典fcv毒株主要引起猫的口腔和呼吸系统疾病，舌上频繁出现水疱和溃疡是该病的典型临床特征。但近期多个地区报道了引起猫致死性全身系统性疾病(virulent systemicdisease，vsd)的fcv高致病性毒株，可感染成年猫并引起高烧、水肿、头部和四肢溃疡、黄疸症状和较高的死亡率。

2、fcv属于单股正链rna病毒，大小约为7.7kb，编码3个开放读码框(orfs)。其orf1长约5.3kb，编码1763个氨基酸(aa)的非结构蛋白；orf2长约2.1kb，编码衣壳蛋白vp1蛋白前体，衣壳蛋白vp1也是fcv最主要的免疫原性蛋白；orf3位于基因组3′末端，长320bp，编码次要衣壳蛋白vp2，vp2也可影响fcv的复制、成熟、蛋白合成及病毒颗粒的形成过程，自然的病毒颗粒需vp1、vp2共同组装。fcv复制过程中rna依赖rna聚合酶，缺乏校对和低保真度性而具有很强的基因可塑性，这种易于出错的病毒复制机制使病毒在免疫压力下快速做出反应，易于突变逃避机体免疫清除，产生多个基因型fcv。

3、由于大多数的中和性表位存在于fcv衣壳蛋白的高变区，所以利用单价的fcv疫苗可能不能完全预防病毒的感染。因此，为提高交叉中和反应，多价疫苗成为fcv疫苗新的研究方向。并且，fcv早先分离株的减毒和灭活疫苗不再能提供足够的保护来抵抗最新流行的fcv株。公开号为cn116286676a的专利提供了一种猫杯状病毒毒株及疫苗组合物，该专利提供的毒株能够诱导较高水平的中和抗体，进而阻止fcv的感染。但是，对于近期出现的可以引起猫致死性全身系统性疾病的vsd毒株，其防护效果仍有待加强。

4、有鉴于此，有必要分离出会引起vsd的fcv高致病性毒株，并将其应用于相应疫苗的制备，以解决上述问题。

技术实现思路

1、针对上述现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种猫杯状病毒毒株及其疫苗组合物，该毒株具有非常高的病毒滴度，对健康易感猫有非常强的致病性，不仅会引起典型的口腔溃疡和结膜炎等症状，还会引起非典型的全身性症状和较高的死亡率。该毒株的灭活产物能够诱导机体产生针对vsd型fcv的高水平的中和抗体，对vsd型fcv攻击能够提供较高的免疫保护率。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种猫杯状病毒毒株，所述毒株命名为猫杯状病毒fcv wh株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v2023104。

3、作为本发明的进一步改进，所述猫杯状病毒fcv wh株的衣壳蛋白的序列如seq idno:2所示。

4、作为本发明的进一步改进，编码所述猫杯状病毒fcv wh株的衣壳蛋白的核酸的序列如seq id no:1所示。

5、为实现上述目的，本发明还提供了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物中包含所述猫杯状病毒fcv wh株或其衍生病毒。

6、作为本发明的进一步改进，所述疫苗组合物中选用的所述猫杯状病毒fcv wh株为灭活病毒。

7、作为本发明的进一步改进，所述疫苗组合物中包含所述猫杯状病毒fcv wh株的衣壳蛋白或编码所述猫杯状病毒fcv wh株的衣壳蛋白的核酸。

8、作为本发明的进一步改进，所述疫苗组合物的制备方法包括如下步骤：

9、分离出所述猫杯状病毒fcv wh株，并进行培养，得到fcv wh株病毒液；

10、对所述fcv wh株病毒液进行灭活处理；

11、将灭活彻底后的所述fcv wh株病毒液稀释至预定的病毒滴度。

12、作为本发明的进一步改进，稀释前，所述fcv wh株病毒液的病毒滴度≥109.8tcid50/ml；稀释后的病毒滴度为108.5tcid50/ml。

13、作为本发明的进一步改进，所述疫苗组合物中还包括fcv lz-2016、fcv-f9、fcvllk、fcv-m8、fcv-255、fcv-2280中的至少一种猫杯状病毒毒株；所述疫苗组合物中还包含药学上能接受的载体或佐剂。

14、本发明还提供了所述疫苗组合物在制备用于预防由猫杯状病毒引起的猫致死性全身系统性疾病的药物中的应用。

15、本发明的有益效果是：

16、1、本发明提供的猫杯状病毒fcv wh株，病毒滴度能够达到109.8tcid50/ml，具有较高的病毒滴度；且该毒株对健康易感猫具有非常强的致病性，不仅会引起典型的口腔溃疡和结膜炎等症状，还会引起非典型的全身症状和较高的死亡率。该毒株的灭活制品免疫猫可产生良好的免疫应答，具有良好的免疫原性，可诱导较高水平的中和抗体，进而阻止fcv的感染，具备开发疫苗的基本潜质。将该毒株灭活后应用于疫苗的制备，获得的灭活疫苗能够较好地刺激机体产生针对vsd型fcv的高水平中和抗体，对vsd型fcv攻击能够提供较高的免疫保护率，实现了对猫杯状病毒的有效防控。

17、2、将本发明提供的猫杯状病毒fcv wh株与其他fcv毒株联合制备成多价疫苗可用于猫杯状病毒防治，提高交叉中和反应，为猫杯状病毒的防控提供重要的疫苗毒株源，进一步提高对猫杯状病毒的防控效果。

技术特征：

1.一种猫杯状病毒毒株，其特征在于：所述毒株命名为猫杯状病毒fcvwh株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v2023104。

2.根据权利要求1所述的猫杯状病毒毒株，其特征在于：所述猫杯状病毒fcvwh株的衣壳蛋白的序列如seq id no:2所示。

3.根据权利要求2所述的猫杯状病毒毒株，其特征在于：编码所述猫杯状病毒fcvwh株的衣壳蛋白的核酸的序列如seq id no:1所示。

4.一种疫苗组合物，其特征在于：所述疫苗组合物中包含权利要求1-3中任一权利要求所述的猫杯状病毒fcvwh株或其衍生病毒。

5.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于：所述疫苗组合物中选用的所述猫杯状病毒fcvwh株为灭活病毒。

6.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于：所述疫苗组合物中包含所述猫杯状病毒fcvwh株的衣壳蛋白或编码所述猫杯状病毒fcvwh株的衣壳蛋白的核酸。

7.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于：所述疫苗组合物的制备方法包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其特征在于：稀释前，所述fcvwh株病毒液的病毒滴度≥109.8tcid50/ml；稀释后的病毒滴度为108.5tcid50/ml。

9.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于：所述疫苗组合物中还包括fcv lz-2016、fcv-f9、fcvllk、fcv-m8、fcv-255、fcv-2280中的至少一种猫杯状病毒毒株；所述疫苗组合物中还包含药学上能接受的载体或佐剂。

10.一种权利要求4～9所述的疫苗组合物在制备用于预防由猫杯状病毒引起的猫致死性全身系统性疾病的药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种猫杯状病毒毒株及其疫苗组合物。该猫杯状病毒毒株的命名为猫杯状病毒FCV WH株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V2023104；疫苗组合物中包含该猫杯状病毒FCV WH株或其衍生病毒。该毒株具有较高的病毒滴度，对健康易感猫有非常强的致病性，不仅会引起典型的口腔溃疡和结膜炎等症状，还会引起非典型的全身性症状和较高的死亡率。该毒株的灭活产物能够诱导较高水平的中和抗体，进而阻止FCV的感染，将该毒株灭活后应用于疫苗的制备，获得的灭活疫苗能够较好地刺激机体产生针对VSD型FCV的高水平中和抗体，对VSD型FCV攻击能够提供较高的免疫保护率，实现了对猫杯状病毒的有效防控。

技术研发人员：曹胜波,曹龙龙,周登元,李秋燕,李勇璠,颜权辉,陈清秀,曾悦
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12