一种患肝肠胞虫病虾的基因组提取液及提取基因组的方法与流程

文档序号:37772312发布日期:2024-04-25 10:58阅读:5来源:国知局

本发明涉及一种基因组提取液,特别是一种基因组的提取方法。


背景技术:

1、虾肝肠胞虫病(enterocytozoon hepatopenaei infection)是由虾肝肠胞虫(enterocytozoon hepatopenaei,简称ehp)引起、发生在虾身上的一种常见病害。病虾前期无明显的感染症状,中期的个体表现为行动缓慢并伏底,清晨常浮至水面,摄食减少,反应迟钝,应激能力下降患病,后期可发现群体内病虾体型大小不一。虾肝肠胞虫病感染虾不会马上死去,可以继续存活,也可以进食,但活力大不如前,最严重的是它会阻碍对虾对营养物质的吸收,造成生长缓慢乃至停滞,显著增大了饵料系数,极大地增加养殖成本,对养殖业造成了难以估计的损失,并且该病的阳性检出率非常高。

2、从2004年首次发现至今,对虾肝肠胞虫(ehp)已在全球范围内传播开来。中国、印度、越南、印度尼西亚、马来西亚、委内瑞拉等多个国家已有ehp感染的报道。在广东、浙江、天津、河北、辽宁、江苏等地的养殖对虾中均检测出ehp。

3、肝肠胞虫发病率高,传播能力强,因此需要采用分子生物学方法来对ehp进行确切的诊断。但由于肝肠胞虫个体微小,结构复杂,胞子虫外壁很难裂解,导致核酸提取纯化困难。常规的核酸提取方法一般分为裂解、结合、洗脱、洗涤等步骤,需要在不同的反应管中进行操作,而且需要借助超高速离心机等设备,操作繁琐耗时,费时费力,易造成交叉感染,提取的样本稳定性和重复性比较差,无法实现批量提取纯化。


技术实现思路

1、本发明之一提供了一种基因组提取液,其包括无机碱、金属螯合剂、醋酸盐、还原剂和封闭剂。

2、在一个具体实施方式中,所述无机碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。

3、在一个具体实施方式中,所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。

4、在一个具体实施方式中,所述还原剂为二硫苏糖醇。

5、在一个具体实施方式中,所述醋酸盐为醋酸钾和/或醋酸钠。

6、在一个具体实施方式中,所述封闭剂为牛血清蛋白。

7、在一个具体实施方式中,所述无机碱的浓度为0.5至5m,所述金属螯合剂的浓度为10至30mm,所述醋酸盐的浓度为2至5m,所述还原剂的浓度为10至200mm,所述封闭剂的浓度为10至200mm。

8、本发明之二提了一种提取生物体内基因组的方法,其包括如下步骤:

9、1)将所述生物体研磨,得到研磨后的生物体;

10、2)将所述研磨后的生物体、本发明之一中任意一项所述的基因组提取液,和杂质吸附介质混匀,经过≥2分钟的时间,得到所述生物体的基因组提取样品。

11、在一个具体实施方式中,所述生物体为虾。

12、在一个具体实施方式中,所述研磨后的生物体的质量或体积与所述基因组提取液的体积的比值≥1:20。

13、在一个具体实施方式中,所述研磨后的生物体的质量或体积与所述基因组提取液的体积的比值为1:(10至20)。

14、在一个具体实施方式中,所述研磨后的生物体的质量或体积与所述杂质吸附介质的比值≥1:60。

15、在一个具体实施方式中,所述研磨后的生物体的质量或体积与所述杂质吸附介质的比值为1:(30至60)。

16、在一个具体实施方式中,所述杂质吸附介质为硅藻土、氧化铝、阳离子交换树脂和c18中的至少一种。

17、在一个具体实施方式中,所述杂质吸附介质为质量比1:1的硅藻土和氧化铝。

18、在一个具体实施方式中,所述杂质吸附介质为质量比1:1的阳离子交换树脂和c18。

19、本发明的有益效果:

20、针对现有技术中存在的技术问题,本发明提供了一种新的基因组提取液以及方法。本发明的方法操作简单、快速、纯化效果好、重复性高,并且不需要高速离心机等大型设备。



技术特征:

1.一种基因组提取液,其包括无机碱、金属螯合剂、醋酸盐、还原剂和封闭剂。

2.根据权利要求1所述的基因组提取液,其特征在于,所述无机碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。

3.根据权利要求1所述的基因组提取液,其特征在于,所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。

4.根据权利要求1所述的基因组提取液,其特征在于,所述还原剂为二硫苏糖醇。

5.根据权利要求1所述的基因组提取液,其特征在于,所述醋酸盐为醋酸钾和/或醋酸钠。

6.根据权利要求1所述的基因组提取液,其特征在于,所述封闭剂为牛血清蛋白。

7.根据权利要求1所述的基因组提取液,其特征在于,所述无机碱的浓度为0.5至5m,所述金属螯合剂的浓度为10至30mm,所述醋酸盐的浓度为2至5m,所述还原剂的浓度为10至200mm,所述封闭剂的浓度为10至200mm。

8.一种提取生物体内基因组的方法,其包括如下步骤:

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述研磨后的生物体的质量或体积与所述基因组提取液的体积的比值≥1:20;

10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述杂质吸附介质为硅藻土、氧化铝、阳离子交换树脂和c18中的至少一种;


技术总结
本发明提供了一种患肝肠胞虫病虾的基因组提取液及提取基因组的方法。其中,基因组提取液包括无机碱、金属螯合剂、醋酸盐、还原剂和封闭剂。

技术研发人员:杨华卫,宁祥,江高伟
受保护的技术使用者:江苏猎阵生物科技有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/4/24
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